广州市医疗机构HIV 抗体不确定的蛋白印迹试验结果及与转归情况的关系

李丽雅 胡凤玉 兰芸 蔡晓莉 谭奕洲 范庆红 贾卫东

广州医科大学附属市八医院传染病研究所 510060

准确和及时诊断HIV 是实现抗病毒治疗和病毒控制目标的必要条件。目前最常用的HIV 抗体确证试验方法是蛋白印迹试验（WB），其试验结果可判为HIV 抗体阳性、阴性和不确定。 HIV 抗体不确定结果不仅给实验室检测和临床诊断带来困扰，也给受检者带来沉重的心理负担。 由于受检者后续随访依从性差，若处于HIV 感染窗口期，将有可能继续传染，造成疫情扩大。 本研究通过对广州医科大学附属市八医院艾滋病确证实验室2015—2019 年报告的HIV 抗体不确定的WB 结果进行分析，旨在了解HIV 抗体不确定结果的流行病学特征、WB 带型特征及其与感染转归的关系，为临床诊治和疫情防控提供依据。

对象与方法

一、研究对象

查询广州医科大学附属市八医院艾滋病确证实验室病例登记信息库， 纳入2015—2019 年进行HIV 抗体筛查试验阳性，经WB 试验判为HIV 抗体不确定的病例共199 例。 通过医院电子病历系统，收集并录入患者的社会人口学信息、临床资料及实验室检查结果，并将HIV 抗体不确定者分为HIV 阳转、阴转和失访人群。

二、检测方法

HIV 抗体筛查试验采用ELISA 法和快速试验（RT），分别采用HIV 抗原抗体诊断试剂盒（北京万泰生物药业股份有限公司）和HIV 抗体检测试剂盒（胶体金法，厦门英科新创科技术有限公司）。

HIV 抗体确证试验采用HIV-1+2 型抗体免疫试剂盒（WB，HIV BLOT2.2）（新加坡MP 生物医学亚太私人有限公司）， 仪器为AutoBlot System 20 免疫印迹仪。 以上试验具体操作参照试剂说明书和实验室标准操作规程，所有试剂均在有效期内，所有仪器均经过校验。 HIV 抗体确证试验结果根据试剂盒说明书进行判定。

三、结果判断标准

参照《全国艾滋病检测技术规范》（2015 年修订版）[1]和试剂说明书，HIV 抗体确证试验WB 结果判断 标 准：（1）HIV 抗 体 阳性： 检 测 出2 条 外 膜 蛋白（env）带（ gp160／gp41 和gp120） 及1 条核心蛋白（gag）带（ p17、 p24 和p55）或反转录酶蛋白（pol）带（ p31、 p51 和p66）；（2）HIV 抗体阴性：无HIV抗体特异条带出现；（3）HIV 抗体不确定：出现HIV 抗体特异条带，但不足以被判定阳性。

四、统计学分析

采用SPSS 23.0 软件进行统计分析。 计数资料以例数和率表示，组间比较采用χ2检验。 所有统计检验均为双侧，P<0.05 表示差异有统计学意义。

结 果

一、HIV 抗体不确定人群的流行病学特征

2015—2019 年共有3 365 份样本进行了WB确证试验， 其中HIV 抗体不确定者199 例，占5.91%， 5 年间不确定者检出率差异无统计意义（χ2=6.475，P＞0.05）。 流行病学分析显示，HIV 抗体不确定者以50 岁以下的中青年男性为主， 可能的感染途径以性传播为主。 近5 年不确定人群在平均年龄、性别、婚姻状况、文化程度和感染途径上的差异均无统计学意义（P 均＞0.05）。

二、HIV 抗体不确定的WB 带型特征与转归情况

1. 组合带型出现频率

199 例HIV 不确定者的WB 组合带型共有13种，出现最多的是p24+gp160，占32.66%（65 例），其次是gp120+gp160 和gp41+gp120+gp160， 分别占16.58%（33 例）和16.08%（32 例）。 HIV 的三个主要结构抗原：env 类的组合带型有11 种， 占86.93%；gag 类的组合带型有2 种，占13.07%。

2. 不确定结果的转归情况

199 例HIV 抗体不确定结果中，185 例有后续随访结果，失访14 例。185 例随访结果中，转归为阳性的比例为89.73%（166 例），转归为阴性的比例为10.27%（19 例）。 在上述最常见的3 种组合带型中，除了1 例gp120+gp160 组合带型患者最后转归为阴性，其他均转归为阳性。 然而，23 例组合带型为p24单条带型的患者中，10 例（43.48%）转归为阴性。 详见表1。

表1 HIV 抗体不确定结果的蛋白印迹试验带型分布及转归情况

3. 组合带型条带数量与转归情况的关系

对185 例明确转归的HIV 抗体不确定者组合带型条带数量与转归情况进行分析，各种组合带型条带数不超过3 条，以2 条带为主（52.43%，97/185），阳转率97.94%（95/97）； 带型为单条带占27.03%（50/185），阳转率66.00%（33/50）；带型为3 条带占20.54%（38/185），阳转率100.00%（38/38）。随着条带数增加，阳转率显著增高，阳转率差异有统计学意义（χ2=41.993，P＜0.01）。

三、HIV 抗体不确定单条带型出现频率情况

分析185 例明确转归的HIV 抗体不确定结果单条带型出现频率， 发现gp160、p24 和gp120 带型出现频率最高， 分别为84.32%、49.73%和37.30%。 此外， 阳转者gp160 和gp120 带型出现率显著高于阴转者（χ2=36.116 和4.188，P＜0.01 或＜0.05），详见表2。

四、ELISA 试验S/CO 值与转归情况

对185 例有明确转归结果的患者进行ELISA筛查， 由于19 例转归为阴性者中有15 例样本的ELISA 试验S/CO 值≤6， 据此分为S/CO 值≤6 组（88 例）和＞6 组（97 例），其中S/CO 值≤6 组的阳转率 为82.95%（73/88），S/CO 值＞6 组 的 阳 转 率 为95.88%（93/97），差异有统计学意义（χ2=8.360，P＜0.01）。

表2 HIV 抗体不确定结果单条带型的分布情况[出现频数（%）]

讨 论

中国艾滋病疫情形势严峻，截至2017 年底，我国报告的现存活HIV/AIDS 患者758 610 例， 当年报告死亡30 718 例[2]。 对于HIV 抗体不确定者，需要通过流行病学史、定期随访和实验室检测结果判定，尽早明确诊断，实现早期干预，减少艾滋病的传播风险， 同时也可尽早解除非HIV 感染者的心理压力。

既往研究结果显示，WB 试验结果为不确定的比例为3.45%～14.5%[3-5]，本研究发现HIV 抗体不确定的比例为5.9%，与文献报道基本一致。 HIV 抗体不确定的原因尚未完全清楚，既往研究认为，出现WB 试验不确定结果的可能原因包括HIV 窗口期感染、艾滋病终末期和非特异性反应[6-7]。 人体从感染HIV 到能够检测到HIV 抗体的窗口期约为2 周，早期感染发生时，病原体抗体滴度较低，与抗原的亲和力低，就会导致抗体检测出现不确定结果或漏检的情况[8]。 患者进入艾滋病期，由于机体出现免疫功能受损以及血液中大量病毒复制并且与抗体产生抗原抗体复合物， 抗体滴度会下降， 也会导致HIV抗体检测不确定结果。 国内关于HIV 抗体不确定的报道一般认为以非特异性条带反应为主， 缪礼锋等[9]报道90.0%以上的不确定结果为非感染样本，吴守丽等[10]报道由非特异性反应所引起的HIV 抗体不确定结果比例分别为52.4%。 本研究199 例WB试验不确定结果中， 有185 例明确转归， 其中89.73%转归为阳性，可见大多数的不确定结果是由HIV 感染引起。 本研究结果与上述研究不一致的主要原因可能是研究对象不同，广州医科大学附属市八医院是广州市艾滋病治疗定点医院，进行此项检测的患者多是在外院先行筛查试验为感染待确定者或有明确高危行为、吸毒史等特殊人群以及出现艾滋病相关症状的晚期感染者， 因此， 本院的HIV抗体不确定阳转率较高，与谢思燕等[11-12]报道基本一致。

Schüpbach 等[13]和王继宝等[14]的研究显示，不同WB 带型不确定结果预示HIV 感染的意义不同。gp160 和p24 是HIV 感染后最早出现的带型， 是早期感染的重要信息[3]。 本研究结果显示，组合带型以env 类为主， 最常见的组合带型p24+ gp160 随访中最后转归均为阳性，提示env 带（gp160/gp120/gp41）和p24 同时出现可能有更大的感染风险，而且该人群很可能是早期感染者。 有研究表明， 急性期HIV传播能力是其他阶段的26 倍[15]，因此早期、准确、可靠的诊断尤为重要，是防止HIV 广泛传播的关键。

谭卓等[16]报道187 例不确定结果中，出现单条带114 例（60.96%），认为不确定结果通常不超过3条条带，以单一和2 条带型为主。 本文对明确转归的不确定结果WB 条带数分析发现，组合带型以2 条带为主，组合带型为3 条带的阳转率为100.00%，随着条带数增加， 阳转率显著增高， 表明出现带型3条及以上条带，基本可以排除非特异性反应，高度怀疑为HIV 感染，需要密切随访。 转归为阴性的多为单条带反应，19 例阴转者中有17 例检出为单条带，其中p24 单条带型10 例。 p24 在早期感染的检测中有重要意义，但同时具有非特异性，楚承霞等[3]报道p24 带型随访者转归均为阴性，然而本研究结果显示，单条p24 带型超过一半比例（56.52%）最后转归为阳性，此外，出现单条gp160 带型的HIV 抗体不确定转归为阳性的比例也较高 （79.17%）。 因此，在定点医疗机构，对于HIV 感染高危人群，在出现单条带型gp160 和p24 的不确定结果时， 仍要警惕，注意复检或结合其他检测方法如病毒载量检测等进行诊断。

本研究发现，ELISA 试验的S/CO 值与最终转归密切相关，19 例转归为阴性的患者中，15 例S/CO值≤6，S/CO 值＞6 的不确定者转阳率明显高于≤6者，与夏燕等[17]研究结果一致。 ELISA 试验的S/CO值的大小与样本中含HIV 抗体种类的多少和浓度相关，S/CO 值越高，阳性概率越大[18]，提示对于S/CO值＞6 的HIV 抗体不确定样本， 临床可根据就诊者是否有高危行为等流行病学史和临床症状及时进行复检。

WB 试验是目前被公认为最有效、 最普遍的HIV 抗体确证试验。 对于HIV 抗体不确定结果，根据WB 带型特征和ELISA 结果的S/CO 值范围，可以对不确定结果的感染风险进行初步评估。 env 类不确定结果以及ELISA 试验S/CO 值＞6 预示HIV感染的意义比较大。 p24+ gp160 组合带型的不确定结果很可能处于感染早期，应缩短复检时间，结合流行病学调查结果、CD 细胞计数和病毒载量检测，争取尽早确诊，尽早治疗，降低发病率和病死率，防止HIV 进一步扩散。

利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突