DENBA+对小鼠皮肤伤口愈合效果的影响

张晓霞 马家骅 谢海霞 付 博 张琪苓 颜川岚 杨文雪 冉玉婷

西南科技大学生命科学与工程学院，四川绵阳 621010

皮肤由于总暴露在外部环境中，创伤等受伤概率较大[1-2]，尤其因人口老龄化，以及肥胖和糖尿病等发病率不断上升，更多的人可能会受皮肤创伤的困扰[3-5]，因此，加速皮肤创伤愈合对身体健康至关重要。目前促进创伤愈合的活性物质主要包括生长因子、生物材料、中药等，尽管显示出较好的治疗效果，但起效相对较慢，有些存在安全隐患，长期使用成本较高，为患者带来沉重的负担[6-8]，亟需探寻更加安全有效的治疗手段。

目前市面上有一种空间电势发生装置，即DENBA+技术装置，通过产生高压低频交变电场实现保鲜，其主要原理是其产生的电场进入商品的水分子细胞中，发生共振，使水分子保持活性，不流失，由此达到保鲜的效果[9-10]。同理，若DENBA+产生的电场能使伤口处的肉芽组织等活性组织保持活性，则有可能促进细胞生长增殖，达到促进伤口愈合的效果。为此，进行了DENBA+对小鼠皮肤线形伤口愈合程度的影响研究。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物

小鼠，昆明种，SPF 级，购于成都达硕实验动物有限公司，雌雄各半，体重18 ～22 g，许可证号SCXK（川）2015-030。

1.2 仪器设备与试剂

DENBA +电毯，由四川长虹器件科技有限公司提供；硫化钠九水合物为分析纯（上海易恩化学技术有限公司，批号：C00000055），水为纯净水。

1.3 实验方法

1.3.1 小鼠皮肤线形伤口模型的制备与分组 小鼠30 只，随机分为三组，每组10 只，分别为DENBA+处理8 h 组、DENBA+处理4 h 组和空白组。用医用棉签少量多次沾取8%硫化钠溶液对小鼠背部进行脱毛，10 min 后观察背部毛是否脱干净，若未脱干净，重复上述步骤，观察24 h，确认脱毛未损伤背部肌肤后，进行造模。依据小鼠体重按5 ml/kg 分别腹腔注射10%水合氯醛溶液，待小鼠完全处于麻醉状态后，在背部脱毛区域划一长度为1 cm 的线形伤口[11-12]，避免划破筋膜层。对于DENBA+ 8 h 组与DENBA+4 h 组，分别将小鼠笼置于电压为2200 V的DENBA+电毯上处理8 h 和4 h，而空白组不作处理。

1.3.2 指标观察 每天观察并记录小鼠的活跃程度和毛色等体征变化情况，记录摄食量与饮水量，最后一天称重，同时在造模后的第2、7、12 天分别量取小鼠伤口长度，按下式计算愈合率。

愈合率=（第1 天伤口长度-第n 天伤口长度）/第1 天伤口长度×100%

1.3.3 病理组织检测 在造模后的第12 天，将小鼠麻醉，取创面边缘至创面中心宽约1 cm×2 cm 的皮肤组织，将取下的皮肤用4%多聚甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋切片，苏木精和伊红（hematoxylin and eosin，HE）染色，用显微镜观察小鼠皮肤组织病理改变。

1.4 统计学方法

采用SSPS 26.0 统计学软件进行统计学处理，计量资料用（）表示。多组资料比较采用单因素方差分析，组间比较用LSD检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 DENBA+对小鼠体重、摄食、饮水及体征的影响

各组小鼠的体重比较，差异无统计学意义（P＞0.05），提示DENBA+处理与否对小鼠的体重影响不大。经DENBA+处理后，DENBA+处理8 h 组和4 h 组的摄食量低于空白组，差异有统计学意义（P＜0.01），且DENBA+处理8 h 组摄入量低于4 h组，差异有统计学意义（P＜0.01），而各组饮水量比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。根据每日对小鼠整体状态的观察，发现在整个实验期间，各组小鼠表现活跃，毛色均匀，皮毛顺滑，无明显差异。见表1。

表1 DENBA+对小鼠体重与饮食的影响（±s）

表1 DENBA+对小鼠体重与饮食的影响（±s）

注：与空白组比较**P ＜0.01；与DENBA+处理4 h 组比较##P ＜0.01

组别 n 体重（g） 摄食量[g/（只·d）] 饮水量[g/（只·d）]DENBA+处理8 h 组 10 35.716±1.981 9.613±0.541**## 11.014±0.594 DENBA+处理4 h 组 10 37.072±1.956 12.648±0.486** 10.976±0.630空白组 10 35.734±1.464 14.577±0.616 10.947±0.473 F 值 1.834 123.954 0.021 P 值 0.179 0.000 0.979

2.2 DENBA+对小鼠皮肤伤口愈合程度的影响

DENBA+ 对小鼠皮肤伤口愈合程度的影响见图1、表2。由图1 可见，与第1 天比较，在第3天时，伤口的开合程度较大，表明伤口正在经历炎症期，之后慢慢地随着肉芽组织的生长，伤口的愈合也加速。与空白组比较，DENBA+ 处理8 h 组在第11 天伤口已经表皮愈合完全，只留下一道很细的缝。由表2 可知，DENBA+ 处理的第2 天，与空白组比较，小鼠伤口愈合情况较好，且随着处理时间的加长，愈合率也提高，其中DENBA+处理8 h 组高于空白组，差异有极显著性统计学意义（P＜0.01）；第7 天与第12 天情况类似，DENBA+ 处理8 h 组与4 h 组的愈合率高于空白组，差异有统计学意义（P＜0.01），而DENBA+处理8 h 组与4 h 组的效果比较，差异无统计学意义（P＞0.05），提示DENBA+ 产生的电场对线形伤口愈合有促进作用。

图1 DENBA+处理对小鼠伤口的影响

2.3 DENBA+对小鼠皮肤伤口病理组织的影响

DENBA+对小鼠皮肤伤口病理组织的影响见图2。由图2 可知，各组表皮连续，细胞排列整齐，已经明显处于伤口愈合的最后阶段，但DENBA+处理组较空白组细胞排列紧密，表明DENBA+产生的电场对线形伤口的愈合有促进作用，但处理8 h 与4 h 无明显差异。

图2 DENBA+对小鼠皮肤伤口影响的病理切片结果 ( HE, ×100 )

表2 DENBA+对皮肤伤口愈合程度的影响（±s，%）

表2 DENBA+对皮肤伤口愈合程度的影响（±s，%）

注：与空白组比较**P ＜0.01

组别 动物数（只） 第2 天愈合率 第7 天愈合率 第12 天愈合率DENBA+处理8 h 组 10 33.792±3.265** 48.855±4.783** 89.852±3.713**DENBA+处理4 h 组 10 31.605±2.953 47.073±3.526** 89.018±2.023**空白组 10 29.962±2.617 39.620±2.355 81.555±2.242 F 值 4.223 17.622 27.343 P 值 0.025 0.000 0.000

3 讨论

创伤愈合是一个包括炎症期、增殖期和组织再塑期的有序过程[13]，实验中，小鼠的急性线形伤口在第2 ～3 天时开口较大，主要是因为此时正处于炎症期，伤口局部有不同程度的组织坏死和血管断裂出血，会出现炎症反应，表现为充血、浆液渗出及白细胞游出，故局部红肿。虽然皮肤伤口在第2 天开口很大，但长度缩小较快，之后随着细胞浆液的渗出与凝集成块，创口渐渐开始结痂，愈合较前期变慢，在第10 天左右，有的小鼠皮肤痂皮已经脱落，只留下一丝伤口痕迹，该愈合过程与文献报道基本一致[14]。

本研究结果提示，DENBA+处理的伤口愈合情况较空白组好，可能是DENBA+技术装置产生的高压低频交变电场，通过共振效应使人体的水分子活化，激活和修复机体受损细胞，减少炎症渗出，控制炎症，并通过改善创面局部微循环瘀滞状态，加速创面新陈代谢，促进毛细血管再生和胶原沉积，从而促进肉芽组织增生，达到加速伤口愈合的效果[15-16]，与韩燕等[17]报道的外源性脉冲电磁场刺激促进糖尿病皮肤创伤愈合的机制类似，但其效应可能与电场强度、处理时间、动物模型等有关[18]，还需要后期进一步探讨。同时，DENBA+对皮肤愈合相关的血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、表 皮 生 长 因 子（epidermal growth factor，EGF）、成纤维细胞生长因子（fibroblast growth factor，FGF）、转化生长因子（transforming growth factor-β，TGF-β）、炎症释放因 子（inflammatory release factor-1β，IL-1β）、血管增生等的影响也有待研究[19]，后期将在此基础上取皮肤组织制片，通过免疫组化来检测上述指标，进一步揭示DENBA+促进伤口愈合的机制。

综上所述，DENBA+产生的电场对皮肤伤口愈合有促进作用，但会使小鼠摄食减小，饮水略有增加，为DENBA+在临床方面的应用提供了理论依据与实验支撑。