正交试验法优选参葛颗粒的醇提工艺

单鑫 徐丹 涂清波 陈璟

摘 要：通过对参葛颗粒的醇提工艺研究，选取最优的醇提工艺，并进行验证。选取考察指标葛根素、五味子醇甲、醇提浸出物得率，采用L9（34）正交试验设计法考查乙醇质量分数、乙醇用量、提取次数、提取时间进行醇提工艺研究，发现醇提次数对所选指标的影响较大，醇提时间、乙醇质量分数、乙醇用量未见显著性影响，优选醇提工艺为加入饮片总量10倍的60%乙醇，提取3次，每次1 h。该醇提工艺稳定可行，可用于参葛颗粒的质量控制。

关键词：参葛颗粒;醇提工艺;葛根素;五味子醇甲

参葛颗粒由葛根、党参、五味子、枸杞子、甘草五味药组成，诸药合用，具有养阴清热、化瘀通络的功效，对络脉不和、酒毒伤中所引起的酒精性肝损伤有较好的保护作用[1-2]。

醇提药物葛根中的主要有效成分是葛根素，木脂素是五味子中的有效成分。本研究选取葛根素、五味子醇甲以及醇提浸出物得率作为评价指标，采用L9（34）正交试验法优选参葛颗粒的醇提工艺，以扩大其适用范围[3-4]。

1    试验材料

1.1  仪器

WATERS Alliance-017（2998PDA）（美国Waters        公司）;HH-420型水浴锅（上海力辰邦西公司）;FA1104N电子天平（上海天平仪器厂）;MS-105DU型电子天平（MettlerToledo）;Milli-Q超纯水系统（Millipore）;      KQ-500B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2  试药

葛根、党参、五味子、（安徽丰原铜陵中药饮片有限       公司）;葛根素、五味子醇甲（中国食品药品检定研究院）;甲醇、乙腈（美国Merk公司）;超纯水（实验室自制），其余试剂為分析纯。

2    试验方法与结果

2.1  醇提工艺

按照L9（34）正交表进行醇提工艺正交设计，考察因素选择乙醇质量分数、乙醇用量、提取次数、提取时间进行3味饮片的回流提取工艺优选，选取葛根素、五味子醇甲、醇溶性浸出物为指标进行测定，因素水平如表1所示。

2.2  样品处理方法

称取葛根素10 g、五味子20 g、党参10 g，共9份，分别以相应的因素水平进行回流提取，醇提液过滤，浓缩成浸膏备用。

2.3  葛根素质量

（1）色谱条件。色谱柱：Tnature C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相：甲醇-水（25∶75），检测波长：250 nm，流速：1.0 mL/min;柱温：30 ℃，进样量10 μL。

（2）供试品溶液。取样品稠膏适量（相当于葛根饮片0.1 g），精密称定，置于250 mL锥形瓶中，精密加入30%乙醇50 mL，称重，回流30 min，冷却后称重，用30%乙醇补足失重，摇匀、过滤、收取滤液即得。

2.4  五味子醇甲质量

（1）色谱条件。Tnature C18柱（4.6 mm×250 mm，      5 μm），流动相：甲醇-水（65∶35），流速：1.0 mL/min，检测波长：250 nm，柱温：35 ℃，进样量：10 μL。

（2）供试品处理。称取样品稠膏适量（相当于五味子饮片0.25 g），精密称定，置于25 mL容量瓶中，加入甲醇        20 mL，超声处理（功率300 W，频率20 kHz）25 min，取出，加入甲醇，定容、摇匀、过滤、收取滤液即得。

2.5  醇提浸出物得率

取各醇提正交样品稠膏（相当于生药饮片2 g），精密称定，置于干燥恒重的蒸发皿中，置于105 ℃烘箱中，干燥3 h，取出，置于干燥器中，冷却30 min，放凉，精密称重，计算醇提浸出物得率。

2.6  正交试验结果与分析

9份样品中测得的葛根素、五味子醇甲、醇提浸出物得率。采用综合评分法，综合评分=（Amax-Ai）×0.4+（Bmax-Bi）×0.4+（Cmax-Ci）×0.2+100。

Ai为各组葛根素质量，Amax为各组中葛根素质量最大值;Bi为各组五味子醇甲质量，Bmax为各组五味子醇甲质量最大值;Ci为各组浸出物得率，Cmax为各组中浸出物得率最大值（见表2～3）。

方差结果表明，试验各因素对所选指标的影响依次为： C（提取次数）>D（提取时间）>A（乙醇质量分数）>B（乙醇用量），且提取次数对结果有显著性影响;确定参葛颗粒醇提最佳工艺为：A2B2C3D2，即加入饮片总量10倍的60%乙醇，提取3次，每次1 h。

2.7  最佳醇提工艺验证

称取配方量10倍的葛根、党参、五味子饮片3份，依照上述优选的醇提工艺进行验证，取样测定浸膏中葛根素、五味子醇甲及浸出物得率。每份样品中葛根素质量分别为679.02、683.87、676.37 mg;五味子醇甲质量分别为34.47、35.85、34.46 mg;浸出物得率分别为30.79%、30.41%、31.17%。结果表明，优选醇提工艺稳定可行。

3    讨论

（1）醇取工艺选择参葛颗粒葛根、党参、五味子、枸杞子、甘草5味药组成，以醇溶性成分为主，葛根主要化学成分为异黄酮类、甾体类、三萜类、葛酚苷类、香豆素类等。其中，主要有效成分为异黄酮类化合物等，五味子主要含有木脂素、多糖、挥发油、三萜类等有效成分，本试验选择回流提取法[5-7]。

（2）评价指标选择药理研究表明葛根中的葛根素、三萜类成分均能显著提高肝脏ALDH、ADH活性，缓解酒精中毒的症状。五味子中所含木脂素类、多糖类成分有兴奋中枢神经、增强心脏收缩力及心血管系统张力、降低ALT活性等作用。本试验选取的葛根素、五味子醇甲是组方药物的主要有效成分，与《中国药典》（2015年版）质量控制指标一致，从原料到制剂全面控制制剂质量，有助于临床用药的安全性及有效性[8-9]。

[参考文献]

[1]蔡峥，麦静愔.参葛颗粒对脾虚痰浊证老年性非酒精性脂肪性肝炎患者的临床疗效[J].中成药，2018，40（9）：1935-1938.

[2]骆慧琳，谢燕，李国文，等.参葛颗粒质量标准研究[J].中成药，2012，34（9）：1720-1725.

[3]田双，严铭铭，邵帅，等.五味子醇提物的提取工艺优化及其体外抗氧化作用评价[J].中国药房，2016，27（28）：3976-3978.

[4]周晶，李玲，王冰，等.正交试验优选平唐复方的醇提工艺和水提工艺[J].中国试验方剂学杂志，2016，22（22）：26-30.

[5]金福，易红，冯伟红，等.葛根不同提取工艺的试验研究[J].中国中药杂志，2009，34（9）：1171-1172.

[6]樊晖，田原.正交试验优选天麻安神颗粒乙醇提取工艺[J].中国试验方剂学杂志，2015，21（7）：21-23.

[7]陈岩岩，吴清，李辉，等.多药效学指标结合HPLC优选晕定方中天麻、葛根提取工艺[J].北京中医药大学学报，2014，37（10）：705-711.

[8]杨志勇.葛根醇提物对糖尿病模型大鼠血脂与血管的保护作用[J].中国药房，2013，24（43）：4063-4065.

[9]董奥，谭小月，孔琪，等.五味子醇提液对糖尿病肾病小鼠氧化应激的保护作用及机制研究[J].中草药，2019，50（24）：6038-6044.

Optimization of alcohol extraction process of Shenge granule by orthogonal test method

Shan Xin， Xu Dan， Tu Qingbo， Chen Jing

（Nanjing University of Chinese Medicine Hanlin College， Taizhou 225300， China）

Abstract：Through the study of alcohol extraction process of Shenge granule， the optimal alcohol extraction process was selected and verified. The extraction yield of puerarin， schisandrin and alcohol was studied by using L9（34） orthogonal test design method. The extraction process of ethanol concentration， ethanol dosage， extraction times and extraction time was studied. It was found that the extraction time， ethanol concentration and ethanol dosage had no significant effect on the selected indexes. The optimum extraction process was 60% ethanol with 10 times the total amount of drinking pieces and extracted three times and 1 h each time. The alcohol extraction process is stable and feasible， and can be used for quality control of Shenge granule.

Key words：Shenge granule; alcohol extraction process; puerarin; schisandra chinensis

基金项目：2018年江苏省高校自然基金（18KJB360011）;2019年江苏省中医药管理局项目（YB201997）

作者简介：单鑫（1986— ），男，江苏泰州人，讲师，硕士;研究方向：中药品质评价與质量标准。

通信作者：陈璟（1987— ），男，讲师，硕士;研究方向：药物新剂型与新技术。