妊娠糖尿病患者血清miR-137、miR-351表达对妊娠结局的影响

熊雯 周新娥 李南

妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus，GDM)是糖尿病的一种独立类型，是指在孕妇妊娠期间发生或首次发现的糖耐量异常，属于妊娠期常见并发症[1]。GDM孕妇血糖调节能力、血脂代谢功能、心肺功能、免疫功能等发生异常，严重危害母婴健康，易导致妊娠结局不良[2]。目前，GDM发病机制研究已取得了较大进展，由胰岛素抵抗引起的体内血糖、血脂异常是GDM的重要病理机制，但具体过程尚未完全明确[3]。微小RNA(micro RNA，miRNA)是一种长度为19～24 nt的非编码单链RNA分子，在多种疾病发生发展中均发挥作用。近年来，已有研究发现多种mRNA参与GDM的生理过程，并影响妊娠结局[4]。miR-137、miR-351分别与GDM患者血管内皮细胞功能异常及小鼠卵泡发育有关[5，6]，但两者是否对GDM患者妊娠结局有影响笔者尚未见相关报道。本研究通过检测GDM患者血清miR-137、miR-351水平，探讨两者对妊娠结局的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年2月至2019年8月在本院产检并分娩的GDM孕妇138例(观察组)为研究对象，根据妊娠结局分为良好组(70例)和不良组(68例)；选取同期健康孕妇140例(对照组)为对照。询问受试者妊娠生育史、糖尿病家族史，记录年龄、孕周、孕前体重、身高，计算孕前体重指数(body mass index，BMI)。

1.2 纳入与排除标准

1.2.1 纳入标准：①诊断符合中华医学会妇产科学分会产科学组、中华医学会围产医学分会妊娠合并糖尿病协作组制订的《妊娠合并糖尿病诊治指南(2014)》[7]，当75 g口服葡萄糖耐量试验(oral glucose tolerance test，OGTI)服糖后1 h血糖(plasma glucose，PG)≥10.0 mmol/L或服糖后2 h PG≥8.5 mmol/L或空腹血糖(fasting plasma glucose，FPG)≥5.1 mmol/L时诊断为GDM；②经医院伦理委员会审核，符合伦理学相关规定；③研究对象及家属知情，并签署知情同意书。

1.2.2 排除标准：①患有严重器官性疾病、精神疾病、感染性疾病、代谢性疾病、免疫系统疾病、内分泌疾病或血液系统疾病者；②妊娠前存在糖尿病、脂代谢紊乱者；③患有妊娠期其他并发症者；④多胎妊娠者；⑤不服从检测安排者；⑥临床资料不全者。

1.3 试剂与仪器 化学发光试剂盒(货号：ZY-11256)购自上海泽叶生物科技有限公司；TRIzol试剂(货号：GMS12279)购自深圳子科生物科技有限公司；逆转录试剂盒(货号：AB-4366596)购自上海嵘崴达实业有限公司；荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR，qRT-PCR)检测试剂盒(货号：KL190)购自上海康朗生物科技有限公司；全自动生化分析仪(型号：AU5800)购自美国贝克曼库尔特有限公司；qRT-PCR仪(型号：ABI 7500)购自美国Applied Biosystems公司；引物均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

1.4 血糖、胰岛素、血脂水平检测 清晨抽取受试者空腹外周静脉血5 ml于采血管中，4℃ 3 500 r/min离心10 min，取上层血清。采用化学发光法检测FPG、空腹血清胰岛素(fasting serum insulin，FINS)水平，并计算胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment-insulin resistance，HOMA-IR)，HOMA-IR=FPG×FINS/22.5。使用全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(total cholesterol，TC)、三酰甘油(triglyceride，TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-C)水平。

1.5 qRT-PCR法检测血清miR-137、miR-351水平 使用TRIzol试剂提取血清总RNA，紫外分光光度计检测RNA质量，琼脂糖凝胶电泳鉴定RNA完整性。使用逆转录试剂盒将RNA逆转录成cDNA，检验合成cDNA质量。采用qRT-PCR法检测血清miR-137、miR-351水平，U6作为内参基因。反应条件：94℃ 15 min；94℃ 30 s，60℃ 30 s，72℃ 30 s，循环40次；72℃延伸8 min。采用2-ΔΔCt法计算血清miR-137、miR-351相对表达量。miR-137上游引物：5’-ACACTCCAGCTGGGTTATGGCT-3’，下游引物：5’-CTCAACTGGTGTCGTGGA-3’；miR-351上游引物：5’-ACACTCCAGCTGGGTCCCTGAGGAGCCCTTGG-3’，下游引物：5’-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGTCAGGCTC-3’；内参U6上游引物：5’-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3’，下游引物：5’-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3’。

2 结果

2.1 观察组和对照组孕妇临床资料比较 观察组、对照组孕妇年龄、孕周、孕前BMI、血清HDL-C水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)；与对照组相比，观察组孕妇FINS、FPG、HOMA-IR、血清TC、TG、LDL-C水平均显著升高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.2 观察组和对照组孕妇血清miR-137、miR-351水平比较 与对照组比较，观察组孕妇血清miR-137、miR-351水平均显著升高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表1 观察组和对照组孕妇临床资料比较

表2 观察组和对照组孕妇血清miR-137、miR-351水平比较

2.3 良好组和不良组GDM孕妇胰岛素、血糖、血脂水平 良好组、不良组GDM孕妇血清HDL-C水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)；与良好组比较，不良组GDM孕妇FINS、FPG、HOMA-IR、血清TC、TG、LDL-C水平均显著升高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 良好组和不良组GDM孕妇胰岛素、血糖水平比较

2.4 良好组、不良组GDM孕妇血清miR-137、miR-351表达水平 与良好组比较，不良组GDM孕妇血清miR-137、miR-351水平均显著升高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

2.5 GDM孕妇血清miR-137、miR-351水平与其他临床指标的相关性 Pearson相关性分析结果显示，血清miR-137水平与FINS、FPG、HOMA-IR、血清TC、TG、LDL-C水平均显著正相关(P<0.05)；血清miR-351水平与FINS、血清TC、TG、LDL-C水平均显著正相关(P<0.05)，与FPG、HOMA-IR均无明显相关关系(P>0.05)。见表5。

表4 2组GDM孕妇血清miR-137、miR-351水平比较

表5 GDM孕妇血清miR-137、miR-351水平与其他临床指标的相关性分析

2.6 影响GDM孕妇妊娠结局的多因素分析 将妊娠结局作为因变量，以FINS、FPG、HOMA-IR、血清TC、TG、LDL-C、miR-137、miR-351水平为自变量进行COX回归分析，结果显示，FPG、血清TG、miR-137水平为影响GDM孕妇妊娠结局的独立危险因素(P<0.05)。见表6。

表6 影响GDM孕妇妊娠结局的多因素分析

3 讨论

研究认为，GDM发病与2型糖尿病发病基础类似，可能与患者妊娠期间存在的胰岛素抵抗和胰岛素分泌功能相对不足有关，但也有研究认为GDM病理特征与肥胖类似，认为脂肪代谢异常、糖耐量异常等病理变化与由脂肪细胞分泌的特定细胞因子量变化异常有关[8]。妊娠过程中，因孕期进补超过母婴正常营养需求等原因，体内糖脂水平异常，但大部分孕妇可增加胰岛素分泌或调控脂肪细胞分泌以维持正常糖脂代谢[9，10]。存在胰岛素抵抗的孕妇在血糖升高时，由于胰岛素靶器官、靶组织对胰岛素敏感性下降，无法增加胰岛素分泌或增加胰岛素分泌亦无法调控体内糖脂代谢，从而导致GDM发生[11]。本研究中，观察组孕妇FINS、FPG、HOMA-IR、血清TC、TG、LDL-C水平较对照组均显著升高，不良组GDM孕妇FINS、FPG、HOMA-IR、血清TC、TG、LDL-C水平较良好组均显著升高，表明GDM孕妇体内糖脂代谢紊乱，胰岛素分泌无障碍，可能是胰岛素调控糖脂代谢的靶器官、靶组织、靶受体缺少对胰岛素的敏感性所致。

miRNA可由胎盘分泌，并在母体血液中稳定存在，通过调控细胞增殖、分化、迁移、凋亡、血管再生及糖脂代谢等过程，参与胰岛素抵抗、分泌、糖代谢等妊娠期糖尿病发病机制及胎盘异常、胎儿血管内皮细胞损伤等妊娠期病理学改变，并对胎儿生长发育及GDM患者母婴健康近远期风险造成影响。Poirier等[12]研究发现，miRNA在GDM患者妊娠过程中发挥代谢和发育调节剂功能，可能参与其发病和妊娠结局等过程。明艳等[4]研究发现，miR-301a可能通过调节机体抗炎-促炎失衡影响GDM发生发展，可能成为预测、治疗GDM的重要靶点。张婧怡等[13]研究发现，miRNA-101水平在GDM患者胎盘中异常升高，可能通过EZH2-H3K27me3途径降低胎盘滋养细胞增殖、迁移能力，从而参与GDM发病的病理机制。彭海燕等[14]在GDM样本miRNAs差异表达分析调查中发现，miR-137在GDM患者16-19周外周血、37周胎盘中均呈差异性表达。张星星等[15]通过靶基因预测发现，miR-351与基因转录及细胞代谢水平有关，且其变化水平较miR-143更明显。本研究中，观察组GDM孕妇血清miR-137、miR-351水平较对照组均显著升高，不良组GDM孕妇血清miR-137、miR-351水平较良好组均显著升高，表明miR-137、miR-351可能参与GDM发生发展，并与患者预后有关，但具体途径未知。本研究结果显示，血清miR-137水平与FINS、FPG、HOMA-IR、血清TC、TG、LDL-C水平均显著正相关，血清miR-351水平与FINS、血清TC、TG、LDL-C水平均显著正相关，表明miR-137与糖脂代谢过程联系紧密，miR-351与胰岛素分泌、血脂水平关系密切，两者均可能参与对糖脂代谢过程的调控[16,17]。

本研究进一步分析影响GDM孕妇妊娠结局的因素，结果显示，FPG、血清TG、miR-137水平为影响GDM孕妇妊娠结局的独立危险因素，表明FPG、血清TG、miR-137水平升高可初步预测GDM孕妇妊娠结局不良，需及时调整治疗措施。

综上所述，GDM孕妇血清miR-137、miR-351水平显著升高，与FINS、血清TC、TG、LDL-C水平均显著正相关，其中，血清miR-137水平是影响GDM孕妇妊娠结局的独立危险因素，可为临床GDM疾病治疗提供一定实验参考。