高效液相色谱法同时测定含乳饮料中 7 种合成着色剂

◎ 张敏莉

（宝鸡市质量技术检验检测中心，陕西 宝鸡 721000）

食品色素按照来源不同可分为天然色素和人工合成色素两大类。合成色素性质稳定，着色力强，价格低廉，因此被广泛使用[1]，但过量使用存在一定的安全隐患，我国对合成着色剂的使用范围和使用量有严格的规定。因此，食品中合成着色剂的检测显得尤为重要。

《食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定》（GB 5009.35—2016）[2]方法中，采用聚酰胺粉吸附食品中的合成着色剂，并用无水乙醇-氨水-水溶液进行洗脱。聚酰胺粉的吸附能力会受到外界环境的影响，回收率较低，同时操作步骤复杂，不适合大批量样品的处理[3]。本试验采用ProElut PWA-2 固相萃取柱，简化了实验步骤，极大的提高了回收率。而且可以同时检测含乳饮料中7 种合成着色剂。

1 材料与方法

1.1 主要仪器

Waterse2695 高效液相色谱仪（紫外检测器）、WelchUltimateAQ-C18柱、固相萃取装置及氮吹仪。

1.2 试验试剂

甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯）、乙酸铵（色谱纯）、甲酸（色谱纯）和氨水（分析纯）。

1.3 标准溶液

柠檬黄（编号：GBW（E）100158，浓度1.00 mg·mL-1）、新红（编号：BW0719-1，浓度1 000 μg·mL-1）、苋菜红（编号：GBW（E）100160，浓度1.00 mg·mL-1）、靛蓝（编号：BW0726-1，浓度1 000 μg·mL-1）、胭脂红（编号：GBW（E）100161，浓度1.00 mg·mL-1）、日落黄（编号：GBW（E）100159，浓度1 000 μg·mL-1）及亮蓝（编号：GBW（E）100162，浓度1 000 μg·mL-1），以上7 种标准溶液由北京海岸鸿蒙标准物质技术有限责任公司提供。

1.4 试验方法

1.4.1 标准曲线

分别准确吸取柠檬黄、新红、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄和亮蓝标准溶液0.025 mL、0.125 mL、0.250 mL、0.375 mL、0.625 mL 和1.250 mL 于25 mL 容 量 瓶中，用水定容至刻度，摇匀，配制成1.00 μg·mL-1、5.00 μg·mL-1、10.0 μg·mL-1、15.0 μg·mL-1、25.0 μg·mL-1和50.0 μg·mL-1的系列标准溶液，测定标准工作曲线。

1.4.2 样品处理

提取：准确称取1.0 g 样品，加入10.0 mL 水、5.00 mL 甲醇和3.00 mL 甲酸混匀，待净化。

净化：取已活化好的ProElut PWA-2 固相萃取柱（依次用5 mL 甲醇、5 mL10%甲酸水活化），加入待净化液。溶液完全流干后，用5.00 mL 甲醇淋洗。淋洗液完全流干后，用5.00 mL 15%氨水甲醇洗脱，接收洗脱液，并于50 ℃下氮吹至约300 μL，用流动相定容至2.00 mL。0.22 μm 的有机相滤膜过滤，待测。

1.4.3 色谱条件

色谱柱：WelchUltimateAQ-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相A 为乙酸铵溶液（0.02 mol·L-1），B 为甲醇+乙腈（70+30），流速1.0 mL·min-1，进样量10 μL，检测波长：254 nm，梯度洗脱设置见表1。

表1 流动相梯度表

1.4.4 回收率测定

称取1.0 g 含乳饮料空白样品，分别加入含量为5 mg·kg-1、25 mg·kg-1、40 mg·kg-1的7 种合成着色剂混合标准溶液，经前处理后进行加标回收实验。

1.4.5 重复性测定

取污染后浓度为25.0 μg·mL-1的含乳饮料样品各6 份，经前处理后进行分析，测得7 种色素的浓度，计算其RSD，获得重复性结果。

2 结果与分析

2.1 洗脱梯度的优化

不同类别的色素极性差异较大，采用等度洗脱不能得到很好的分离，故采用梯度洗脱。本实验先参照GB/T 5009.35—2016 方法用甲醇、乙酸铵进行梯度洗脱，实验出现以下问题：①甲醇浓度变化过快，柠檬黄、新红不能很好的分离。②亮蓝出峰前后会出现基线向上漂移，影响定量结果的准确性。故采用甲醇+乙腈（70+30）的混合液作为流动相B，参照GB/T 5009.35—2016 方法进行梯度洗脱，使7 种色素得到较好的分离。图1 为7 种色素在本实验条件下得到的色谱峰。

图1 混合标准溶液色谱图

2.2 标准曲线

配 制 浓 度 为1.00 μg·mL-1、5.00 μg·mL-1、10.0 μg·mL-1、15.0 μg·mL-1、25.0 μg·mL-1和50.0 μg·mL-1的混合标准序列，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，线性范围为1.00 ～50.0 μg·mL-1，各组分相关系数均在0.999 以上，线性关系良好。线性方程、相关系数见表2。

表2 标准曲线及相关系数表

2.3 方法的准确度

称取1.0 g 含乳饮料空白样品，加标回收实验。测定回收率结果见表3。该方法回收率在91.4%～107.5%，说明方法准确度良好。

表3 回收率实验表

2.4 方法的重复性

取污染后浓度为25.0 μg·mL-1的含乳饮料样品各6 份，进行重复性实验，结果见表4，7 种色素的重复性（RSD值）均＜5%，表明方法的重复性良好。

表4 重复性测定结果（n=6）表

3 结论

实验表明，通过优化梯度洗脱条件，同时改进含乳饮料样品的前处理方法，采用ProElut PWA-2 固相萃取柱进行前处理，可以达到简化前处理过程、缩短实验时间、提高实验回收率的目的。该方法结果准确，重现性好，可用于含乳饮料中7 种合成着色剂的同时测定。