银耳多糖益生元效应的研究

◎ 李国光

（上海辉文生物技术股份有限公司，上海 201318）

银耳在我国是最受欢迎的食用菌和药用真菌之一，又称为雪耳或者白蘑菇，现在市场上的银耳几乎都是是商业化栽培所得[1]。银耳的子实体富含蛋白质、多糖、膳食纤维、多种矿物质、微量元素和维生素[2]。子实体中的银耳多糖主要是酸性多糖，具有提高人体免疫[3]、抑制肿瘤[4]、抗衰老[5]及清除自由基[6]等生物学功能。有研究表明，子实体中提取的银耳多糖主链为由α-（1，3）-糖苷键组成的甘露聚糖，主链的2，4，6 位上链接有葡萄糖、木糖、岩藻糖及葡萄糖醛酸等残基组成的侧链[7]。有研究者认为食用菌多糖是具有益生元效应的活性物质，如GUO等人利用银耳多糖，以鸡为研究的对象，通过对鸡盲肠的分析发现，多糖能够发酵产生挥发性脂肪酸，改善肠道内微生物菌群的组成和活性。同时进行体外实验，证明银耳多糖能够促进双歧杆菌生长[8]。本研究利用体外实验分析银耳多糖益生元效应情况，为银耳多糖益生元的进一步研究提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

银耳多糖，MRS 液体培养基和MRS 琼脂培养基，TPY 液 体 培 养 基 和TPY 琼 脂 养 基，TSB 肉 汤液体培养基和TSA 琼脂培养基。青春双歧杆菌（编号：GDMCC1.278）、长双歧杆菌婴儿亚种（编号：GDMCC1.207）、嗜酸乳杆菌（编号：GDMCC1.208）、鼠李糖乳杆菌（编号：GDMCC1.325）、大肠杆菌（编号：GDMCC1.737）和沙门氏菌（编号：GDMCC1.237），所有菌株购自广东省微生物菌种保藏中心。

1.2 仪器与设备

SX-BHC 生物安全柜（苏州净化设备有限公司）、恒温培养箱（上海博迅医疗生物仪器股份有限公司）、摇床（上海世平实验设备有限公司）、高压蒸汽灭菌锅（上海博迅医疗生物仪器股份有限公司）和pH 计（上海仪电科学仪器股份有限公司）。

1.3 实验方法

1.3.1 菌种活化

冻干粉菌种活化，首次活化，干粉要全部用完，不能保留，干粉用尽量少的MRS、TYP、TSB 培养液溶解，接种在5 mL 液体培养基中，静止培养。将双歧杆菌接种于TPY 液体培养基，37 ℃厌氧培养48 h；乳酸菌接种于MRS 液体培养基，37 ℃培养24 h，。将大肠杆菌及沙门氏菌接种于肉汤液体培养基37 ℃培养24 h，分别涂片、染色、镜检，观察菌体形态正确后，开始后续研究。

1.3.2 不同浓度银耳多糖对有益菌和有害菌的影响

银耳多糖为实验室提取保存，用去离子无菌水配制成浓度为0.10%、0.05%、0.01%的液体，取一个96孔平板，在孔中加入90 μL 银耳多糖溶液，分别接入10 μL 的青春双歧杆菌、长双歧杆菌婴儿亚种、嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、大肠杆菌和沙门氏菌菌液，放在厌氧摇床上培养37 ℃，24 h，取出OD600检测（检测前轻微晃动96 孔板）。

1.3.3 不同益生元调节肠道菌群作用

采用GAM 培养基为基础培养基（未加葡萄糖），对照组1不加葡萄糖，实验组分别为0.10%、0.05%、0.01%银耳多糖，每组设置3 个平行，每个样品装液量为50 mL，灭菌处理，取新鲜健康人的粪便10 g 加入到200 mL 生理盐水中充分混合，分别取上清1 mL 加入到空白组和实验组中，37 ℃发酵培养24 h。

检测发酵24 h 后发酵液中肠杆菌、肠球菌、双歧杆菌和乳酸菌的值，以及发酵液中的pH 值，并计算B/E值，值越高表示益生菌在体内的定植抗力越强。

2 结果与分析

2.1 不同浓度银耳多糖对有益菌和有害菌的影响

由图1 可知，不同浓度的银耳多糖对微生物生长的影响不同，对双歧杆菌和乳酸杆菌，银耳多糖能够促进其生长且成剂量关系，0.5%的银耳多糖对青春双歧杆菌、长双歧杆菌婴儿亚种、嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌的生长促进效果最显著。而对于大肠杆菌和沙门氏菌来说，银耳多糖抑制作用不明显，也没有很好的促进效果。总体来看，银耳多糖可以作为一种益生元促进肠道有益微生物的生长。

2.2 不同浓度银耳多糖对肠道菌群调节作用

由表1 可知，发酵24 h 后，肠道菌群数量测定，不同浓度银耳多糖与对照组相比较，双歧杆菌、乳杆菌、肠杆菌和肠球菌均增多，但乳杆菌和双歧杆菌增加显著（p<0.01）；与对照组相比，3 个实验组的pH值明显降低（p<0.05），但各试验组间差异无显著性（p>0.05）；发酵24 h 后测得的B/E值可以发现0.01%浓度银耳多糖组最高，表明肠道微生物定植抗力更强。

表1 发酵24 h 后肠道菌群数量测定结果表（单位：CFU·g-1）

3 结论

研究结果表明，银耳多糖可以作为一种益生元发挥益生元效应，从体外实验可以发现随着银耳多糖的含量提高，双歧杆菌和乳酸菌的数量明显增多，同时大肠杆菌和沙门氏菌等有害菌的生长不明显。发酵24 h肠道菌群数量测定 ，各实验组肠道菌与对照组相比较双歧杆菌、乳杆菌、肠杆菌和肠球菌均增多；pH值降低，各试验组间差异无显著性（p>0.05）。银耳多糖对有害菌群（肠杆菌、肠球菌）的增殖效果要弱，而银耳多糖对人体肠道内的有益菌群（双歧杆菌、乳杆菌）增殖有明显促进作用。