陕西省部分猪场5种疫病抗体及病原的检测

郑丹阳，石姝彤，李晨露，许信刚，周宏超，拓晓玲，杨程梓，黄光东*，张 琪*

(1.西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌 712100；2.陕西中科基因检测技术有限公司，陕西西安 710010)

口蹄疫、猪繁殖与呼吸综合征、猪瘟、猪伪狂犬病、猪圆环病毒病是当前规模化猪场危害较为严重的疫病，给养猪业带来较大的经济损失。口蹄疫是一种人畜共患病，传播速度快、传播途径广，仔猪的死亡率极高，疫区发病率可高达 100%，显著特征为猪蹄、口腔黏膜、乳房及乳头等处形成水泡并逐步溃烂，口蹄疫是危害世界各国畜牧业最严重的疫病之一[1-3]；猪繁殖与呼吸综合征又称猪蓝耳病，该病对猪群的繁殖功能有着很大的影响，仔猪断乳前后最容易发生该病，死亡率能够达到40%～100%[4-5]；猪瘟主要经由病猪的尿液、粪便以及各种分泌物散播病毒，从而感染不同年龄的猪群，该病具有较高传染性和致死性，对养猪业造成巨大的经济损害[6-7]；猪在感染伪狂犬病毒后能引起发热、母猪流产、仔猪神经症状等临床表现，初生仔猪感染率和死亡率可达100%[8]。随着养猪业的发展，伪狂犬病不断蔓延扩大，给养猪业造成巨大的经济损失[9-10]；猪圆环病毒2型造成的危害也十分严重，虽然母猪可以产仔，但大多数不能存活，出现断代现象，该病也成为影响养猪业的主要疫病之一[11-12]。本研究通过对陕西省部分规模化猪场送检的20 233份血清样品和1 633份病料样品进行检测，了解5种疫病疫苗免疫后抗体水平情况及病原感染情况，为陕西省猪场疫病的防控提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品采集 2019年1月至2019年12月由陕西省部分规模化猪场送检的20 233份血清样品和1 633份病料。每份样品需进行记录并编号，置于-20℃保存备用(表1)。

表1血清样品采集情况

1.1.2 主要试剂 口蹄疫抗体检测试剂盒、猪繁殖与呼吸综合征抗体检测试剂盒、猪瘟抗体检测试剂盒、伪狂犬病病毒gB抗体检测试剂盒均购自IDEXX公司；猪圆环病毒2型抗体检测试剂盒购自深圳芬德生物技术有限公司；DNA提取试剂盒、Trizol试剂、反转录试剂盒购自天根生化科技有限公司，其他试剂均为国产分析纯。

1.1.3 主要仪器设备 PCR仪(K960)，力康生物医疗科技控股有限公司产品；电泳仪(DYY-6C)北京市六一仪器厂；凝胶成像分析系统(GenoSens 1800)北京赛智创业科技有限公司产品；台式离心机(H1650-W)，湖南湘仪实验室仪器开发有限公司产品；高速冷冻离心机(D3024R)，美国贝克曼股份有限公司产品；全自动制冰碎冰机，常熟市凌科电器有限公司；超净工作台(VD-1300)苏洁净化技术有限公司产品；电子天平(DTC)，亚津电子科技公司产品。

1.2 方法

1.2.1 5种疫病抗体的检测 口蹄疫、猪繁殖与呼吸综合征、猪瘟、伪狂犬病病毒gB抗体检测按照IDEXX公司ELISA抗体检测试剂盒说明书进行操作和结果判定；猪圆环病毒2型抗体检测按照深圳芬德生物技术有限公司抗体检测试剂盒说明书进行操作和结果判定。

1.2.2 病毒的PCR/RT-PCR检测

1.2.2.1 病毒DNA的提取 将组织剪碎，研磨，反复冻融3次，12 000 r/min离心2 min，取上清200 μL于EP管中，按照天根生化科技有限公司DNA提取试剂盒说明书提取病毒基因组DNA，将获得的DNA溶于20 μL TE中。

1.2.2.2 病毒RNA的提取和cDNA的合成 将组织剪碎，研磨，反复冻融3次，12 000 r/min离心2 min，取上清200 μL于EP管中，按照Trizol试剂使用说明提取病毒基因组RNA，再按照天根生化科技有限公司反转录试剂盒说明书合成cDNA，将获得的cDNA溶于20 μL无RNA酶水中。

1.2.2.3 病毒的检测 口蹄疫病毒(FMDV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)5种病原检测引物由陕西中科基因检测技术有限公司提供，反应体系和反应条件参照文献[13]操作。

2 结果

2.1 疫苗免疫后5种病毒病血清抗体检测结果

用于检测口蹄疫抗体的4 089份血清样品中，阳性数为3 136份，阳性率为76.69%；用于检测猪繁殖与呼吸综合征抗体的5516份血清样品中，阳性数为4 692份，阳性率为85.06%；用于检测猪瘟抗体的4 881份血清样品中，阳性数为4 300份，阳性率为88.10%；用于检测伪狂犬病病毒gB抗体的2810份血清样品中，阳性数为2 367份，阳性率为84.23%；用于检测猪圆环病毒2型抗体的420份血清样品中，阳性数为399份，阳性率为95%(表2)。

2.2 未免疫疫苗的5种病毒病血清抗体检测结果

用于检测口蹄疫抗体的1 065份血清样品中，阳性数为450份，阳性率为42.25%；用于检测猪繁殖与呼吸综合征抗体的743份血清样品中，阳性数为210份，阳性数为28.26%；用于检测猪瘟抗体的284份血清样品中，阳性数为136份，阳性率为47.89%；用于检测伪狂犬病病毒gB抗体的332份血清样品中，阳性数为72份，阳性率为21.69%；用于检测猪圆环病毒2型抗体的93份血清样品中，阳性数为82份，阳性率为88.17%(表3)。

表2疫苗免疫后5种病毒病血清抗体检测结果

表3未免疫疫苗的5种病毒病血清抗体检测结果

2.3 5种病毒病病原检测结果

用于检测口蹄疫的226份样品中，阳性数为1份，阳性率为0.44%；用于检测猪繁殖与呼吸综合征的654份样品中，阳性数为71份，阳性率为10.86%；用于检测猪瘟的328份样品中，阳性数为31份，阳性率为9.45%；用于检测伪狂犬的144份样品中，阳性数为4份，阳性率为2.78%；用于检测猪圆环病毒2型的281份样品中，阳性数为40份，阳性率为14.23%(表4)。

3 讨论

本研究对2019年陕西省20 233份血清样品和1 633份病料样品进行检测。结果表明，FMD、PRRS、CSF、PR-gB、PCV2疫苗免疫后抗体阳性率均较高，其中PCV2免疫抗体阳性率最高(95%)，FMD免疫抗体阳性率最低(76.69%)，但也符合国家免疫要求(70%以上)；PCV2野毒感染抗体阳性率高达88.17%，其次是CSF和FMD，野毒感染抗体阳性率分别为47.89%和42.25%；PRRS和PR-gB野毒感染抗体阳性率相对来说最低，分别为28.26%和21.69%，但均达到20%以上。可以看出，PCV2、CSF、FMD、PRRS和PR野毒感染情况严重，应该加强管理，定期免疫，以达到净化目的。5种病毒抗原检测结果显示，PCV2、PRRSV和CSFV阳性率较高，分别为14.23%、10.86%和9.45%，说明PCV2、PRRSV和CSFV在陕西省的流行情况较为严重，应该加以重视。

针对本次检测结果，相关猪场需要积极采取措施来降低PCV2、CSFV、FMDV、PRRSV和PRV的感染率。必须做好防疫监测，对猪群进行血清学调查，有针对性地预防接种，对于健康猪群的猪场最好采取自繁自养，如果必需进行引种时，应对引种猪场进行考察，在充分了解之后方可引种，且猪群到场之后必须隔离1个月，在该过程中应进行防疫，经过检测确认合格后才可作为留种[14]；其次要加强猪场日常管理和饲养管理，科学的饲养管理是养猪生产的关键，可以提高猪群的生产力，猪场应配有消毒设备，且猪场应适当通风透气，保持猪场卫生良好、干燥舒适，营造冬暖夏凉的环境，还应确保饲料营养水平合理，促使猪群健康生长[15-16]。近年来FMD、PRRS、CSF、PR、PCV仍是影响养猪业发展的重要因素，做好免疫预防工作，定期检测抗体水平，制定更加完善的防控措施，仍是规模化猪场疫病防控工作的重中之重。