加味五子衍宗浓缩丸制备工艺及质量控制研究

欧阳若水 钟兰英 文桂卿 钟倪俊 卓进盛 邢益涛 王利胜

1.广州中医药大学中药学院，广东广州 510403；2.广东江门中医药职业学院南药学院，广东江门 529000；3.海南省中医院肺病科，海南海口 570203；4.海南省中医院泌尿外科，海南海口 570203

加味五子衍宗方是来源于海南省中医院的临床经验方，由枸杞子、菟丝子、五味子、车前子、覆盆子、乌药、沉香、细辛八味药材组成，有补肾益精、温中止痛的功效，被广泛用于治疗肾虚腰痛、阳痿、不育等疾病。该方在临床上以汤剂的形式服用，具有服用量大、煎煮时间长、不便携带等缺点，本研究旨在不改变原方的基础上，将原方汤剂改制为浓缩丸。在浓缩丸的制备过程中，清膏的相对密度、药蜜用量比、药粉的细度、干燥时间、干燥温度等，都会对浓缩丸的品质产生直接的影响[1-3]。因此，本研究以软材性状、成型性、水分和溶散时限为工艺评价指标[4-5]，采用单因素试验[6]对本浓缩丸进行优化，旨在探索出合适的制备工艺，同时，在优化的工艺基础上，对所制的浓缩丸进行质量检测。

1 仪器与试药

1.1 仪器

电子分析天平（生产厂家：上海民桥精密科学仪器有限公司；型号：FA2014；精密度：0.0001）；四两装高速中药粉碎机（生产厂家：瑞安市永历制药机有限公司；型号：103）；电热恒温鼓风干燥箱（生产厂家：上海精宏实验设备有限公司；型号：DHG-9240A）；旋转蒸发器（生产厂家：上海亚荣生化仪器厂；型号：RE-52 系列）；恒温水浴锅（生产厂家：上海亚荣生化仪器厂；型号：B-220）；小型多功能中药制丸机（生产厂家：长沙市岳麓区中南制药机械厂；型号：DZ-20）；智能崩解仪（生产厂家：天津市天大天发科技有限公司；型号：ZB-1E）；高效液相色谱仪（生产厂家：日本岛津公司；型号：LC-20A）；色谱柱（生产厂家：Agilent；型号：ZORBAXSB-Aq）。

1.2 试药

枸杞子、菟丝子、五味子、车前子、覆盆子、乌药、沉香、细辛药材均购自康美药业股份有限公司，经检验均符合2015 年版《中华人民共和国药典》[7]标准；金丝桃苷对照品（成都格利普生物科技有限公司，批号：19071603）；乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 成型工艺研究

2.1.1 制法

按处方称取菟丝子20 g、覆盆子10 g、车前子10 g、乌药10 g、沉香10 g，粉碎，过筛，混合均匀。按处方取枸杞子30 g、五味子15 g、细辛3 g，水提，浓缩，与上述细粉混合，加入适量中蜜作为黏合剂，采用塑制法[8]制丸，干燥，即得。

2.1.2 工艺流程

工艺流程见图1。

图1 工艺流程

2.2 评价指标测定

2.2.1 水分的测定

按照2015 年版《中华人民共和国药典（四部）》[9]水分测定法（通则0832）项下的烘干法进行测定，含水量不得超过12.0%。

2.2.2 溶散时限检查

按照2015 年版《中华人民共和国药典（四部）》[9]崩解时限检查法（通则0921）进行检查，应在2 h 内全部溶解。

2.3 试验因素考察

2.3.1 清膏相对密度考察

按处方量称取水提组3 味药材，水提后分别浓缩至相对密度为1.20、1.30、1.40、1.50（20℃），分别与粉碎组药材细粉混匀制丸，固定药蜜用量比为1∶0.5，药粉细度为100 目。以软材性状和成丸情况为评价指标。优选出清膏相对密度为1.40。见表1。

表1 清膏相对密度考察

2.3.2 药蜜用量比考察

按处方量称取药材细粉，分别加入药蜜比为1∶0.3、1∶0.4、1∶0.5、1∶0.6 的中蜜做黏合剂，固定清膏相对密度为1.40，药粉细度为100 目，干燥温度为65℃，干燥时间为10 h，制丸。以成型性、水分和溶散时限为评价指标，综合考察指标的结果，优选出药蜜用量比为1∶0.4。见表2。

表2 药蜜用量比考察

2.3.3 药粉细度考察

将粉碎组5 味药材粉碎，分别过60、80、100、120目筛，固定清膏相对密度为1.40，药蜜用量比为1∶0.4，干燥温度为65℃，干燥时间为10 h，制丸。以成型性、水分、溶散时限为评价指标，确定药粉细度为100 目。见表3。

表3 药粉细度考察

2.3.4 干燥温度考察

将清膏相对密度固定为1.40，药蜜用量比为1∶0.4，药粉细度为100 目，制丸，分别于50、60、70、80℃不同温度下进行干燥，干燥时间固定为10 h，以水分、溶散时限为评价指标，最终确定干燥温度为60℃。见表4。

表4 干燥温度考察

2.3.5 干燥时间考察

固定清膏相对密度为1.40，药蜜用量比为1∶0.4，药粉细度为100 目，干燥温度为60℃，制丸，分别干燥7、10、13、16 h，以水分和溶散时限为考察指标，优选出干燥时间为10 h。见表5。

表5 干燥时间考察

2.3.6 验证实验

为了进一步验证优选工艺的可靠性，分别取3 份处方量的药材，按照优选出的条件进行试验，测定成品的水分和溶散时限。最终确定了加味五子衍宗浓缩丸的制备工艺，清膏的相对密度为1.40，药蜜用量比为1∶0.4，药粉细度100 目，干燥温度60℃，干燥时间10 h。见表6。

表6 工艺验证考察表

2.4 质量检查

根据上述试验筛选出的条件，制备3 批（批号：20070101、20070102、20070103）加味五子衍宗浓缩丸，随后依据2015 年版《中华人民共和国药典》[9]四部通则丸剂项的相关规定对丸粒进行质量检查。

2.4.1 溶散时限

按照2015 年版《中华人民共和国药典（四部）》[9]崩解时限检查法（通则0921）将样品置于智能崩解仪中测定。批号为20070101、20070102、20070103 加味五子衍宗浓缩丸样品溶散时限分别为23、27、26 min。3 批样品的溶散时限均在120 min 内，符合《中华人民共和国药典》的溶散时限规定。

2.4.2 水分检查

按照2015 年版《中华人民共和国药典》四部[9]水分测定法（通则0832）项下的烘干法进行测定，批号为20070101、20070102、20070103 加味五子衍宗浓缩丸样品水分检查结果分别为7.01%、6.89%、6.82%。3 批样品的水分都小于9%，符合《中华人民共和国药典》的水分规定。

2.4.3 重量差异

按照2015 年版《中华人民共和国药典（四部）》[9]丸剂重量差异检查法进行测定，以10 丸为1 份，取供试品10 份，分别称定重量。3 批样品的重量差异均在±9%以内，符合《中华人民共和国药典》对该剂型重量差异的规定。见表7。

表7 3 批样品重量差异检查表（g）

2.4.4 金丝桃苷含量测定

2.4.4.1 色谱条件 色谱柱：Agilent ZORBAX SB-Aq色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（17∶83）；检测波长：360 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；进样量：10 μL，理论塔板数按金丝桃苷峰计算应不低于5000[7]。

2.4.4.2 对照品溶液的制备 取金丝桃苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成97 μg/mL 的溶液，即得金丝桃苷对照品储备液。

2.4.4.3 供试品溶液的制备 取加味五子衍宗浓缩丸5 g，粉碎后精密称定，置于50 mL 具塞量瓶中，加入80%甲醇40 mL，超声处理（功率500 W，频率40 kHz）1 h，放冷，加80%甲醇至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，取1 mL 定容至10 mL 容量瓶，吸取上清液，过0.22 μm的微孔滤膜，取续滤液，即得。色谱图见图2。

图2 金丝桃苷对照品及供试品高效液相色谱图

2.4.4.4 线性实验 精密吸取对照品储备液1 mL，分别置于5、10、20、25、50 mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，按上述色谱条件进样，以峰面积和浓度进行线性回归。回归方程为Y=155 59X-1397.3（r=0.9999）。

2.4.4.5 精密度实验 精密吸取质量浓度为3.88 μg/mL的对照品溶液适量，按上述色谱条件，连续进样6 次，测定峰面积，RSD 值为1.70%，结果表明，仪器的精密度良好。

2.4.4.6 稳定性实验 精密吸取同一份供试品溶液，分别在制备后0、2、4、6、8、10 h 按上述色谱条件进样，测定峰面积，RSD 值为1.57%，结果表明，供试品溶液在10 h 内保持稳定。

2.4.4.7 重复性实验 取同一批加味五子衍宗浓缩丸5 g，粉碎，按“2.4.4.3”项下制成供试品溶液，重复进样6 次，测定金丝桃苷含量，RSD 值为1.80%，表明该方法的重复性良好。

2.4.4.8 加样回收率实验 精密量取已知浓度的供试品溶液（2.4956 μg/mL）1 mL，平行6 份，分别精密加入质量浓度为2.4250 μg/mL 的金丝桃苷对照品溶液1 mL，按“2.4.4.3”项下制成供试品溶液，测定金丝桃苷的含量及加样回收率。见表8。

表8 加样回收率实验结果

2.4.4.9 样品含量测定 取3 批加味五子衍宗浓缩丸，每份5 g，按“2.4.4.3”项下方法制成供试品溶液，按“2.4.4.1”项下色谱条件进样，计算3 批加味五子衍宗浓缩丸中的金丝桃苷含量。批号为20070101、20070102、20070103 加味五子衍宗浓缩丸含量分别为0.20、0.19、0.20 mg/g。符合2015 年版《中华人民共和国药典》[7]的规定（金丝桃苷的含量不得少于0.10%）。

3 讨论

浓缩丸是指将处方中的部分药材提取浓缩成稠膏后与剩余的药材细粉混合制成的丸剂[10]，服用量小，易吸收、存储和携带，同时其制备过程中所使用的辅料较其他剂型少，在工业大生产时能节省辅料以减少成本，符合中医用药特点并适用于现代机械化生产[11]。有研究表明，在治疗男性不育症疾病时浓缩丸的药效略优于水蜜丸[12]。因此，本研究旨在不改变处方的基础上，将原方汤剂改制成浓缩丸，以克服汤剂煎煮时间长、易变质、不易携带、服用体积大等缺点。

传统的泛制法制备工艺较为繁琐，周期长，且因生粉直接入药，易导致微生物数量超标，而塑制法的生产效率高，成品均匀度好，不易染菌[13]，还能避免人工操作带来的操作结果的差异性[14]。故本方采用塑制法制丸。清膏相对密度、药蜜比例、药粉细度、干燥时间、干燥温度都是影响制丸的重要因素。清膏相对密度过小时，药粉干燥而难以成团，导致无法制丸；相对密度过大时，制成的软材太软，易产生粘连。药粉的细度主要影响软材的细腻程度，从而影响丸粒的外观性状，药粉过粗，制成的软材粗糙，丸粒不圆整；药粉过细，打粉的难度增加，损失较大[15]。

蜂蜜是良好的药物黏合剂，可以根据调节蜂蜜的含水量来调整蜂蜜的黏性，来适应不同药材的处理需求[16]。此外，在某些方中，蜂蜜还可起到佐、使药的作用[17]。用于制备丸剂的蜂蜜必须经过炼制，通过炼蜜能除去杂质，杀灭细菌，除去水分以增加黏性等[18]。根据炼制的程度，蜂蜜共可以分为嫩蜜、中蜜、老蜜三种，需根据处方的药材性质来选择合适的炼蜜。本研究于初步试验中发现，本处方采用中蜜制丸，所得软材软硬度适中，黏性较好，丸粒表面光滑圆整，故将蜂蜜炼制至中蜜作为黏合剂。

菟丝子是本方的君药，是本方中最重要的药材，具有免疫调节、抗氧化、抗衰老、保肝明目等多种药理作用[19-21]，尤其对肾虚不孕、胎动不安等生殖系统疾病有显著的治疗作用[22]。金丝桃苷既是菟丝子的主要成分也是有效成分，具有抗急性肝损伤、抗抑郁、抗炎症、抗血栓、抗癌等药理作用[23-24]，还能通过抗氧化应激及抗炎作用减轻严重烧伤大鼠早期心肌损伤[25]。金丝桃苷的理化性质较为稳定，在2015 年版《中华人民共和国药典（一部）》[7]中，菟丝子含量测定指定以金丝桃苷为主要测定指标。因此，综合考虑，本浓缩丸选择金丝桃苷作为质量控制的指标。