生、熟大黄对大承气汤泻下作用的比较研究*

曾海生，周歧骥，覃洪含，郭小葆，林 瑶，何思陆△

1 右江民族医学院附属医院，广西 百色533000；2 右江民族医学院

大黄属中药泻下药，始载于《神农本草经》。大黄为唐古特大黄Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.、蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatumL.或药用大黄Rheum officinaleBaill.的干燥根和根茎［1］。大承气汤始载于汉代张仲景的《伤寒论杂病论》，由大黄、枳实、厚朴和芒硝组成，是泻法的代表方剂［2］，具有泻下热结的作用，主治阳明腑实证和里热实证等［3］。目前临床上主要用于治疗急腹症、肠梗阻与胃肠道功能障碍等疾病。研究表明，该方还具有抑制血清内毒素、降低炎性细胞因子水平、提高机体免疫力和调节胃肠激素分泌等作用，对脑、肺等脏器具有明显的保护作用［4-10］。大承气汤中大黄的泻下活性成分为蒽醌类成分，以游离型与结合型两种形式存在［11-14］。有文献报道［15-18］，不同煎煮方法和煎煮时间对大黄及大承气汤中蒽醌类成分的溶出量有显著的影响，且能影响其药效。本研究旨在探讨大黄不同炮制品对大承气汤泻下作用的影响，为临床合理使用生熟大黄提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物72 只清洁级昆明小鼠，体质量（20±2）g，雌雄各半。实验动物质量合格证号：0001757，生产许可证号：SCXK 桂2014-0002，由广西医科大学实验动物中心提供。

1.2 药物及试剂生大黄、枳实、厚朴及芒硝购于广东康美药业有限公司，经广西中医药大学药用植物教研室李斌副教授鉴定，大黄为蓼科植物药用大黄Rheum officinale Baill.的干燥根和根茎，枳实为芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.的干燥幼果，厚朴为木兰科植物厚朴Magnolia officinalis Rehd.et Wils.或凹叶厚朴Magnolia officinalis Rehd.et Wils.var.biloba Rehd.et Wils.的干燥干皮、根皮及枝皮。以上三味中药粉碎过10 目筛。芒硝，中药名，经鉴定为硫酸盐类矿物芒硝族芒硝，为结晶体，主要含十水硫酸钠（Na2SO4·10H2O）。酚酞片（山西亨瑞达制药有限公司，批号：160702）；超微量Na+-K+-ATP 酶试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号20170322）；考马斯亮蓝蛋白试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号20170218）；生理盐水（辰欣药业股份有限公司，批号：1610060721）；试验用水为纯水。见表1。

表1 药材批号与产地

1.3 实验仪器UV-1800 型紫外分光光度计（日本岛津公司）；20110793 型全波长酶标仪（美国，BIOTEK-Epoch）；PYX-190H-B 型育温箱（广东科力有限公司）；ZH-B6 型代谢笼（安徽正华有限公司）；41284881 型离心机（德国，Thermo Fisher）；HWS12型水浴锅（上海一恒公司）等。

1.4 实验方法

1.4.1 药液提取 采用上述药材，按处方比例取厚朴药材粉末24 g，枳实12 g，大黄12 g，芒硝9 g，分别精密称定，厚朴与枳实加纯水500 mL，浸泡30 min 后，加热煮沸后保持微沸30 min，使用500目滤布过滤，剩下的药渣再加纯水500 mL后，浸泡30 min，然后加热煮沸保持微沸30 min，再过滤，合并两次滤液，然后加入大黄粉末，浸泡20 min后，再加热煮沸，保持微沸20 min，使用500 目滤布过滤，药渣再加入纯水300 mL，加热煮沸后保持微沸20 min，滤过，合并滤液，趁热加入芒硝，搅拌使溶解，浓缩成浓度为0.3∶1的药液（含生药0.3 g/mL），置于2～8℃冰箱储存备用。

同“1.4.1”项制备药液方法，将药液浓缩成浓度为0.5∶1的药液（含生药0.5 g/mL），置于2～8℃冰箱储存备用。

1.4.2 分组及给药 将健康昆明小鼠72 只适应性喂养3 天后，随机分为：生大黄大承气汤组（生DCQ 组）低（6 g/kg 灌胃）、高（10 g/kg 灌胃）剂量组，熟大黄大承气汤组（熟DCQ 组）低（6 g/kg 灌胃）、高（10 g/kg 灌胃）剂量组，阳性对照组（酚酞片60 mg/kg灌胃），空白对照组（等量蒸馏水灌胃）共6组，每组12只。

1.4.3 小鼠泻下指标观察［19-20］实验当日小鼠禁食不禁水4 h，空白组蒸馏水灌胃，其余组均给予对应的给药剂量（6 g/kg、10 g/kg），容积20 mL/kg。然后将实验小鼠单独放入代谢笼中（底下铺有滤纸），然后观察泻下情况，按粪便性状分为：水便、溏便、软便、正常。水便和溏便为泻下，分别观察5 h 内各组小鼠的泻下只数、首次泻下时间、泻下总次数和总排便次数，比较生大黄与熟大黄的大承气汤对正常小鼠排便的影响差异性。

1.4.4 小鼠肠道炭末推进率［21］按“1.4.2”项下的方法分组，各组分别给予上述加入墨汁的药液灌胃给药，16 min 后脱颈椎处死，解剖开腹，取出从幽门到回盲部的小肠（盲肠前端），按不加牵引地平铺于干净的玻璃板上，测量其全长和炭末前沿到幽门的距离，计算其与全长的百分比。

炭末推进率=炭末在肠内推进距离（cm）/小肠全长（cm）×100%

1.4.5 小鼠结肠壁细胞Na+-K+-ATPase活性［22-23］按“1.4.2”项下的方法分组给药，连续灌胃给药6天，第6 天灌胃给药30 min 后颈椎脱臼处死，马上从回盲部下端剪取结肠，下列实验操作都在冰水环境中进行，用预冷的蒸馏水反复清洗肠腔内外血液和粪便，用滤纸稍微吸干，精确称取0.2 g，然后加入生理盐水1.8 mL，使用匀浆机，制备成10%质量浓度比的匀浆液，2500 r/min，离心10 min，取上清液0.2 mL 加入0.8 mL 生理盐水稀释成2%体积比的匀浆，所得匀浆液在595 nm处，使用超微量Na+-K+-ATPase 试剂盒和考马斯亮蓝蛋白试剂盒测定其吸光度A，并计算样本的蛋白浓度和ATPase活力。

1.5 统计学方法采用SPSS 21.0 统计学软件进行数据处理，计量资料以（±s）表示，采用单因素方差分析，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 泻下指标首次泻下时间、泻下次数、总排便次数阳性对照组，生DCQ组低、高剂量组，熟DCQ组低、高剂量组均高于空白对照组，差异有统计学意义（P＜0.01），其中以生DCQ 组高剂量组显著。首次泻下时间、泻下次数、总排便次数熟DCQ 组低、高剂量组均低于生DCQ 同剂量组，差异有统计学意义（P＜0.01），其中以熟DCQ 组高剂量组显著。见表2。

表2 各组小鼠泻下指标比较（±s）

表2 各组小鼠泻下指标比较（±s）

注：与空白对照组比较，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01；与生DCQ同剂量组比较，△表示P＜0.05，△△表示P＜0.01；-表示无数值

5 h内总排便次数（次）9.42±1.18**12.54±1.89**7.68±1.75**△△9.72±1.96**△△11.73±2.01*4.08±1.67△△组别生DCQ组低剂量组生DCQ组高剂量组熟DCQ组低剂量组熟DCQ组高剂量组阳性对照组空白对照组鼠数12 12 12 12 12 12首次泻下时间（min）83.28±7.12**59.07±5.81**105.32±15.64**△△79.43±16.49**△△63.06±8.25**-5 h内泻下次数（次）8.96±1.99**9.63±2.78**6.91±1.25**△△7.86±1.87**△△9.32±2.56**-

2.2 小鼠肠道炭末推进率及Na+-K+-ATPase 活性炭末推进率阳性对照组，生DCQ 组低、高剂量组，熟DCQ 组低、高剂量组均高于空白对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）；炭末推进率熟DCQ低、高剂量组炭组均低于生DCQ 同剂量组，差异有统计学意义（P＜0.05）。Na+-K+-ATP 酶活力阳性对照组，生DCQ 组低、高剂量组，熟DCQ 组低、高剂量组均低于空白对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）；ATP酶活力熟DCQ低、高剂量组炭组均低于生DCQ 同剂量组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 各组小鼠炭末推进率及Na+-K+-ATPase活力比较（±s）

表3 各组小鼠炭末推进率及Na+-K+-ATPase活力比较（±s）

注：与空白对照组比较，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01；与生DCQ同剂量组比较，△表示P＜0.05，△△表示P＜0.01

Na+-K+-ATPase活性（U·mg-1prot）1.49±0.85**1.18±0.37**1.77±0.54**△1.59±0.26**△△1.61±0.43**2.82±0.37△△组别生DCQ组低剂量组生DCQ组高剂量组熟DCQ组低剂量组熟DCQ组高剂量组阳性对照组空白对照组鼠数12 12 12 12 12 12炭末推进率（%）79.12±3.61**87.06±3.71**72.13±4.73**△△80.93±3.32**△77.92±5.13**38.61±5.94△△

3 结论

本实验选用经典研究方法，观察实验药物对小鼠泻下作用、炭末推进率及Na+-K+-ATPase 活性的影响。通过与空白对照组、阳性对照组及生、熟大黄的大承气汤组进行比较，探讨生、熟大黄的大承气汤的泻下作用变化差异，为大黄不同炮制品对大承气汤影响的物质基础的研究奠定基础。实验根据相关文献［24］与结合预实验确定给药剂量；酚酞为常用泻药，是临床上常用于治疗便秘的药，能用于正常泻下之用，故本试验选择使用酚酞作为阳性药。

分别使用生、熟大黄的大承气汤其泻下作用总体上虽有一定的差异性，但其变化在一定程度上与大黄的不同炮制品对其方剂的影响存在着某些关系。生DCQ组、熟DCQ组与空白对照组及阳性对照组比较，其对正常小鼠正常泻下作用、炭末推进作用、抑制Na+-K+-ATPase 活性的作用有差异性。有文献报道［25］，大承气汤的泻下功效与总蒽醌成分有关，与空白对照组比较，使用生、熟大黄的大承气汤对正常小鼠泻下作用、炭末推进功能和Na+-K+-ATPase活性抑制率都具显著性。

大黄不同炮制品在经典组方“大承气汤”中所起到泻下功效变化的相关效应，这些变化可能与生大黄和熟大黄的化学成分含量的转移或转化有关，在某些方面上具有一定的联系和规律，至于生大黄与熟大黄对大承气汤在人体内这些变化是否会改变，有待进一步研究探索。

中药的药效物质基础极其复杂，其化学成分有黄酮类、酚酸类、皂苷类、生物碱、鞣质等及蛋白质、多糖、无机元素等。目前，中药方剂配伍的化学成分的研究，大体上是在配伍前后方剂中个别化学成分的定量分析、方剂配伍后成分的含量变化及配伍后多成分定量分析研究［26-33］，而想在中药方剂的药效物质基础上有所突破，就要冲破目前研究方剂所固有的方法和思维模式，需要有创新性的方法和思维及深入的研究。