血清硬骨素在维生素D缺乏性佝偻病诊断中的检测意义

李 嘉，刘晓燕，彭慧云,陈耀武

(1.南华大学附属长沙市中心医院 儿科，湖南 长沙410000；2.郴州市第一人民医院 手足显微外科)

硬骨素(SOST)是一种主要由骨细胞分泌的蛋白质，其主要功能是抑制成骨细胞矿化，进而抑制骨形成[1]。维生素D缺乏性佝偻病患儿早期便会出现骨矿化不足。本研究拟通过分析患维生素D缺乏性佝偻病的婴幼儿血清SOST的水平变化，探讨SOST在佝偻病诊断中的意义。

1 资料与方法

1.1 对象

选取2016年1月至2018年1月来长沙市中心医院儿科就诊的符合维生素D缺乏性佝偻病诊断标准[2]的61例婴幼儿，列入佝偻病组，其中男性30例，女性31例；0-1岁龄患儿19例，1-2岁龄患儿20例，2-3岁龄患儿22例。选取来本院体检的健康婴幼儿51例，其中男性24例，女性27例；0-1岁龄婴儿16例，1-2岁龄幼儿18例，2-3岁龄幼儿17例。排除有骨折史、近期有大量维生素D或激素类药物应用史、肝肾等重要器官功能障碍、先天性疾病的婴幼儿。

1.2 方法

晨起空腹采集静脉血5 ml，静置于4℃冰箱中12 h，待血清析出后，3 000 rpm离心10 min，吸取适量的血清冻于-80℃冰箱中保存待测。标本检测前提前30 min复温。采用罗氏P800全自动生化分析仪检测血清中的钙、磷水平；采用英国IDS公司的ELISA试剂盒检测血清中25-(OH)D的水平；采用美国R&D公司的ELISA试剂盒检测血清中SOST的水平。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 两组血清SOST、25-(OH)D、钙、磷水平比较

佝偻病组患儿的血清SOST、25-(OH)D水平分别为1.44±0.52 ng/mL、45.2±9.43 nmol/mL，显著低于对照组健康婴幼儿的2.53±1.23 ng/mL、92.5±22.3 nmol/mL，其差异有统计学意义(P<0.05)；两组之间血清钙、磷水平差异均无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 两组血清SOST、25-(OH)D、钙、磷水平比较

2.2 年龄和性别对两组血清SOST、25-(OH)D、钙、磷水平的影响

两组中0-1岁龄婴儿血清25-(OH)D水平显著低于1-2岁龄幼儿，其差异有统计学意义(P<0.05)；1-2岁龄幼儿血清25-(OH)D水平显著低于2-3岁龄幼儿，其差异有统计学意义(P<0.05)；两组中0-1岁龄婴儿血清SOST水平显著低于1-2岁龄幼儿，其差异有统计学意义(P<0.05)；1-2岁龄幼儿血清SOST水平显著低于2-3岁龄幼儿，其差异有统计学意义(P<0.05)；两组中0-3岁婴幼儿血清钙、磷水平均无统计学差异(P>0.05)；两组血清SOST、25-(OH)D、钙、磷水平男女之间差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

2.3 治疗前后血清SOST、25-(OH)D、钙、磷水平比较

治疗后佝偻病组血清SOST、25-(OH)D水平显著高于治疗前，具有统计学意义(P<0.05)；钙、磷水平差异均无统计学意义(P>0.05)，见表3。

表2 两组中不同年龄、不同性别的血清SOST、25-(OH)D、钙、磷水平

表3 佝偻病患儿治疗前后血清SOST、25-(OH)D、钙、磷水平比较

2.4 两组中血清SOST与25-(OH)D水平之间的相关性

佝偻病组中血清SOST与25-(OH)D水平之间呈正相关关系(r=0.62,P<0.05)；对照组中血清SOST与25-(OH)D水平之间呈正相关关系(r=0.57,P<0.05)。

3 讨论

维生素缺乏性佝偻病作为一种慢性营养缺乏性疾病，在我国有着较高的发病率，是我国重点防治的儿科四大疾病之一。佝偻病传统的诊断手段包括检测血清中钙、磷、25-(OH)D的含量；手腕部X射线检测等。但这些血清指标缺乏特异性和敏感性；X射线检测虽然可以反映患儿骨组织的改变，但它无法检测疾病早期的变化，一般在佝偻病后期才会表现出异常，即骨组织矿物含量降至30%-40%以下[3-5]。因此，找到一种高特异性的诊断血清指标就显得十分必要。

SOST是一种骨细胞特异性分泌蛋白，对骨形成起负性调节作用。Balemans W等[6]在研究骨硬化症(sclerosteosis)时发现硬骨素缺失后，患者骨量显著增加。Van Bezooijen等[7]发现SOST通过与LRP5/6结合，抑制Wnt/β-catenin信号通路的传导，进而抑制骨形成。Li等[8]发现SOST敲除后的大鼠骨量显著增加。应用SOST单克隆抗体干预后的骨质疏松小鼠骨量显著增加[9]。目前，SOST单克隆抗体Evenity已获美国食品药品管理局(FDA)批准上市，用于治疗绝经后女性伴高骨折风险的骨质疏松症。本研究发现佝偻病组患儿血清SOST水平为1.44±0.52 ng/mL显著低于对照组健康婴幼儿的2.53±1.23 ng/mL。认为这主要是由于维生素D缺乏后，成骨细胞矿化不足，骨细胞形成减少，进而导致SOST分泌减少。同时，还发现无论是佝偻病患儿还是健康婴幼儿，他/她们的血清SOST水平都随着年龄的增加显著上升。这可能是由于儿童时期骨组织处于高代谢水平[10]，骨形成不断增加，进而导致了骨细胞分泌的SOST也不断增加。

25-(OH)D是维生素D的代谢产物，在机体内具有稳定、半衰期长、水平高等特点，能较好的反映体内维生素D的含量，可作为早期发现佝偻病的一项诊断指标[11-12]。本实验数据显示佝偻病组患儿血清25-(OH)D平均水平为45.2 nmol/L显著小于对照组健康婴幼儿的92.5 nmol/L。近期发布的关于维生素D缺乏的评估、治疗及预防方面的临床实践指南推荐：当血清25-(OH)D水平<50 nmol/L时，可诊断为维生素D缺乏[13]。本结果符合当前对维生素D缺乏的定义。血清钙、磷作为传统的诊断维生素D缺乏性佝偻病的生化指标，在本研究中并未见明显的改变，这可能和体内的降钙素和甲状腺素的钙磷调节作用有关[14]。同时，还发现佝偻病组和对照组的血清SOST和25-(OH)D水平均无性别差异，且后两者的水平呈显著正相关，进一步明确了SOST在辅助诊断佝偻病中的重要意义。

随着国民健康意识的提高，目前国内的重度佝偻病患儿已相对少见。但由于临床症状不明显、检测手段不特异等原因，佝偻病的早期诊断还存在着许多的困难。SOST作为骨细胞特异性分泌的蛋白，其在骨形成障碍的维生素D缺乏性佝偻病患儿血清中的变化情况至今尚未见报道。本研究通过检测正常婴幼儿和维生素D缺乏性佝偻病患儿血清中的SOST、25-(OH)D、钙、磷含量，明确了SOST在正常及疾病状态下的变化情况，为维生素D缺乏性佝偻病的筛查提供了有力的依据。