非小细胞肺癌组织中CDKI(P27keap1)和CDK4的表达与患者生存期的相关性研究

李静静 穆 庆 孙贝贝

肺癌是我国发病率和死亡率均最高的恶性肿瘤之一，而该肿瘤中，非小细胞肺癌占比达到约80%，且绝多数患者发病就诊时已处于中晚期，因此其生存率较[1-2]。另外，肺癌发病机制目前尚未完全清楚，这也是患者预后差、治愈率和生存率均低的原因之一。细胞周期蛋白D依赖性激酶CDK4是细胞周期从G1到S相转变的关键调节因子，相关研究表明：多种癌症组织中CDK4异常表达，以及迅速出现的该蛋白药理抑制剂阳性临床数据已将CDK4确认为抗癌药物靶标[3-4]。keap1是抑癌基因的一种，近年来相关研究显示：肺癌组织中keap1基因呈甲基化状态，故其蛋白表达调控受阻，因而表达量显著降低[5]。本研究回顾性分析非小细胞肺癌组织中CDKI(P27keap1)和CDK4的表达，并分析其与患者生存期的相关性，以期为该肿瘤患者的临床诊断及预后评估提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选择2016年5月至2019年5月于本院进行手术切除的83例非小细胞肺癌患者为研究对象，所有患者均经病理学诊断确诊为非小细胞肺癌，共获取非小细胞肺癌组织及癌旁组织83例。其中，男性64例，女性19例；年龄35～76岁，平均年龄(51.06±7.22)岁，病理类型：腺癌36例，鳞癌47例；分化程度：高分化5例，中分化56例，低分化22例；TMN分期：Ⅰ期21例，Ⅱ期31例，Ⅲ期30例，Ⅳ期1例；淋巴结转移46例，无转移37例。本研究获得医院伦理学委员会批准，入选患者均已签署知情同意书。

1.2 入选标准

纳入标准：①所有患者均经临床病理学确诊为非小细胞肺癌；②病理分期Ⅰ～Ⅳ期；③所有患者术前均未能接受过放、化疗及其他药物治疗。排除标准：①伴有主要器官具有重大疾病或严重并发症的患者；②中途退出者；③手术不耐受者。

1.3 方法

免疫组化检测P27keap1和CDK4的表达：采用免疫组化试剂盒(SP法)以及CDK4、keap1蛋白抗体购自上海碧云天生物技术有限公司，具体检测流程根据试剂盒说明书进行操作；阳性结果判定[4]：染色结果采用双盲法，由本院2位病理科医师独立进行评分：①染色程度积分标准：0分：无显色；1分：浅黄色或黄色；2分：棕黄色；3分：棕褐色。②染色比例：0分：<5%；1分：6%～25%；2分：26%～50%；3分：>75%。总积分结果为①×②：0分：阴性(-)；1～4分：弱阳性(+)；5～8分：中等阳性(++)；9～12分：强阳性(+++)。③所有患者出院后均进行随访，随访至2020年5月31日，记录每位患者生存期。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 keap1表达与非小细胞肺癌临床病理参数的关系

不同病理类型非小细胞肺癌患者癌组织keap1表达阳性率无显著差异(P>0.05)，而不同分化程度、TMN分期以及淋巴结转移非小细胞肺癌患者癌组织keap1表达阳性率均存在显著差异(P<0.05)(表1)。

表1 keap1表达与非小细胞肺癌临床病理参数的关系/例

2.2 CDK4表达与非小细胞肺癌临床病理参数的关系

不同病理类型非小细胞肺癌患者癌组织CDK4表达阳性率无显著差异(P>0.05)，而不同分化程度、TMN分期以及淋巴结转移非小细胞肺癌患者癌组织CDK4表达阳性率均存在显著差异(P<0.05)(表2)。

2.3 keap1和CDK4阳性对患者生存期的影响

与keap1阳性非小细胞癌患者相比，阴性患者生存期显著缩短(P<0.05)，与CDK4阳性非小细胞癌患者相比，阴性患者生存期显著延长(P<0.05)(表3)。

2.4 相关性分析

相关性分析结果显示：keap1表达阳性率与非小细胞肺癌患者生存期呈显著负相关(γ<0，P<0.05)，CDK4与非小细胞肺癌患者生存期呈显著正相关(γ>0，P<0.05)，见表4。

表2 CDK4表达与非小细胞肺癌临床病理参数的关系/例

表3 keap1和CDK4阳性对患者生存期的影响

表4 蛋白阳性率与非小细胞肺癌患者生存期相关性分析

3 讨论

肺癌是全球发病率及致死率均高的恶性肿瘤之一，根据其病理学类型可分为小细胞癌和非小细胞癌[6]。据统计，非小细胞肺癌发病患者人数在肺癌中占比高达80%以上，且其存在转移和扩散的风险，包括脑转移和淋巴结转移，相关研究表明该肿瘤早期手术切除治愈几率较大，可提高患者存活率，因此其早期临床诊断及治疗至关重要[7-9]。目前该治疗方式以手术、化疗以及药物联合化疗等方式为主，但近年来随着对非小细胞肺癌发病机制的不断挖掘，分子结合病理的靶向诊断及治疗已成为该肿瘤的热点研究方向[10]。

Keap1是1种胞质蛋白伴侣分子，正常条件下，可通过与NRF3结合将其与E3复合体连接而是泛素化后的NRF2被降解；而当发生氧化应激反应时，其半胱氨酸残基被氧化修饰因而与DLG基序亲和力下降并奋力，抑制了MRF2的降解，从而介导氧化应激反应，研究表明肺癌患者体内的Keap1通常因发生突变的表达量下调[11-12]。本研究结果显示：不同病理类型非小细胞肺癌患者癌组织CDKI(P27 keap1)表达阳性率无显著差异(P>0.05)，而不同分化程度、TMN分期以及淋巴结转移非小细胞肺癌患者癌组织CDKI(P27keap1)表达阳性率均存在显著差异，即低分化程度、高TMN分期以及发生淋巴结转移的非小细胞肺癌患者组织中keap1的阳性率显著降低(P<0.05)，且与keap1阳性非小细胞癌患者相比，阴性患者生存期显著缩短(P<0.05)，另外相关性分析结果显示：keap1表达阳性率与非小细胞肺癌患者生存期呈显著负相关(γ<0，P<0.05)，表明随着非小细胞肺癌的发生和进展，患者癌组织中keap1表达显著下调，且随着非小细胞癌进展，其表达进一步降低，预示的患者生存期的进一步缩短。

CDK4是细胞周期G1期的正调控因子，相关研究显示其在多种癌症组织中表达水平显著高于正常组织，其异常表达可促进肿瘤的进展[13-14]。不同病理类型非小细胞肺癌组织CDK4表达阳性率无显著差异(P>0.05)，而不同分化程度、TMN分期以及淋巴结转移非小细胞肺癌患者癌组织CDK4表达阳性率均存在显著差异(P<0.05)；与CDK4阳性非小细胞癌患者相比，阴性患者生存期显著延长(P<0.05)；相关性分析结果显示，CDK4与非小细胞肺癌患者生存期呈显著正相关(γ>0，P<0.05)。表明CDK4的表达情况与非小细胞肺癌的发生和进展密切相关，其在患者癌组织中显著上调，且随着非小细胞癌进展，其表达进一步升高，预示的患者生存期的进一步缩短。

综上所述，非小细胞肺癌组织中CDKI(P27keap1)和CDK4的表达与该肿瘤的的发生和进展密切相关，并进一步影响患者生存期。