中性粒细胞碱性磷酸酶检验的应用及诊断价值评估

董仁康，刘辉，汤琼健

福建省龙岩市第一医院检验科，福建龙岩 364000

血液疾病在发病早期临床症状并不典型，无特异 性，无法对血液病是否发病或类型进行准确判断，因此，需要利用血浆和血清各项指标检验实施诊断和筛查，然而血液病包含多种类型，也呈现不同严重程度，进而血液各项指标差异性较大，进而漏诊或误诊情况极易发生[1]。在很多细胞中会存在碱性磷酸酶，比如吞噬细胞、网状细胞、中性粒细胞，以上细胞中较为多见，而在其他细胞中较为少见，对碱性磷酸酶实施检验，一般会呈现阴性结果。而在中性粒细胞中，碱性磷酸酶活性却会受到感染程度、病菌种类、细胞功能、细胞成熟度等因素的影响，对其活性进行观察，可有效鉴别和诊断血液疾病[2]。该次研究为对血液疾病中应用价值实施评价，方便选择2019年6月—2020年5月就诊于该机构的血液疾病患者260例和74名健康体检者为研究对象，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

方便选择就诊于该机构的血液疾病患者260例，并选择同期健康体检者74名，分为研究组和对照组，研究组男124例，女136例；年龄6~81岁，平均年龄（35.65±11.58）岁；血液疾病类型：22例慢性淋巴细胞性白血病，28例多发性骨髓瘤，4例睡眠性阵发性血红蛋白尿症，8例真性红细胞增多症，24例骨髓增生异常综合征，12例类白血病反应，36例慢性髓细胞白血病，36例急性淋巴细胞白血病，40例再生障碍性贫血，50例急性髓细胞白血病。所有患者均通过实验室检查、骨髓活检病理检查、涂片细胞学检查（骨髓穿刺）明确诊断。对照组男46名，女28名；年龄6~80岁，平均年龄（35.38±11.78）岁。两组一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。两组均对该次研究知情，并在同意书上签字，医院伦理委员会已经批准和通过该次研究。

纳入标准：①研究组通过临床综合诊断为血液疾病；②对照组无血液疾病。

排除标准：①对中性粒细胞碱性磷酸酶检测造成影响的疾病；②恶性肿瘤；③较差依从性者。

1.2 方法

该次研究所应有的仪器主要包括电子计数器、恒温水浴箱（37℃）、显微镜。试剂为中性粒细胞碱性磷酸酶Ⅰ液、Ⅱ液、固定液。检验方法：在检验前，让患者和健康体检者保证处于空腹状态，采集10 mL静脉血，采集方法为真空采血法，对血涂片进行制备。实施细胞化学染色，染色方法为偶氮偶联法（Kaplow），将固定液滴加到新鲜涂片中，30 s实施水洗，待风干；混合中性粒细胞碱性磷酸酶Ⅰ液和中性粒细胞碱性磷酸酶Ⅱ液，基质液形成，实施风干后，将基质液置入涂片中，在37℃温度下存放30 min；取出连缸，应用流水进行数分钟冲洗，等待风干；利用苏木素，再次染色涂片（风干），1~2 min时间，用水实施冲洗，等待风干，对显微镜油镜进行利用，观察中性细胞（成熟）100个，分析观察结果。

1.3 观察指标

两组观察结果利用5级积分法进行记录，以颗粒在细胞浆中的数量为依据实施分级，共5级，0分：阴性反应；1分：胞浆小于1/2区域呈现灰黑色到棕黑色陈定；2分：胞浆3/4~1/2区域呈现灰黑色到棕黑色沉淀；3分：胞浆全部区域呈现棕黑色或灰黑色沉淀，较低密度；4分：胞浆全部区域呈现深黑色团块沉淀，较高密度，胞核被覆盖。

1.4 统计方法

采用SPSS 23.0统计学软件进行数据分析，符合正态分布的计量资料用（±s）表示，两组间比较采用独立样本t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

研究组中各类型患者中性粒细胞碱性磷酸酶积分与对照组相比，真性红细胞增多症、多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞性白血病、再生障碍性贫血、类白血病反应、急性淋巴细胞白血病患者的中性粒细胞碱性磷酸酶积分均较高；研究组睡眠性阵发性血红蛋白尿症、骨髓增生异常综合征、慢性髓细胞白血病、急性髓细胞白血病患者中性粒细胞碱性磷酸酶积分则明显较低，差异有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

表1 两组中性粒细胞碱性磷酸酶积分对比[(±s)，分]

表1 两组中性粒细胞碱性磷酸酶积分对比[(±s)，分]

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3 讨论

血液疾病在临床上作为一种常见的疾病类型，一般在发病早期无典型临床症状，且检测血液指标时，相应的指标差异性不明显，进而难以实施准确的诊治，极易造成漏诊和误诊情况发生[3-4]。在中性粒细胞中碱性磷酸酶作为一种标志性酶，在中性粒细胞（成熟）中多见，由特殊颗粒（胞质）中被释放出来的碱性条件，可对单磷酸酯（酚）水解和各类醇发挥催化作用[5]。在一定程度上，碱性磷酸酶（中性粒细胞）活性可反映粒细胞功能和成熟度，病菌种类和感染程度也对其造成影响[6]。一旦活化中性粒细胞，会提升碱性磷酸酶积分和阳性率[7]。一旦细菌感染严重，慢性淋巴细胞性白血病、再生障碍性贫血、类白血病反应、急性淋巴细胞白血病患者活性急性变化会发生，一旦发生多发性骨髓瘤和真性红细胞增多症，碱性磷酸酶活性明显增强，睡眠性阵发性血红蛋白尿症、骨髓增生异常综合征、慢性髓细胞白血病患者碱性磷酸酶活性降低[8-9]。不同类型血液性疾病在血液学改变和临床表现方面相似之处较多，极易发生混淆，在发病早期诊断也较为困难，极易发生误诊情况[10]。中性粒细胞碱性磷酸酶在中性成熟粒细胞中存在，即分叶核粒细胞核中性杆状核粒细胞，进而，中性成熟粒细胞则呈现阳性结果[11]。血液疾病不同中性粒细胞碱性磷酸酶的活性也具有差异性，同时，在生理因素影响下也会改变酶活性[12]。中性粒细胞碱性磷酸酶的活力可反映成熟粒细胞功能和成熟程度。中性粒细胞活化后，中性粒细胞碱性磷酸酶积分和阳性率也会升高。与健康人相比，急性白血病患者阳性率积分降低，而骨髓增值性疾病，中性粒细胞碱性磷酸酶阳性率积分明显升高，进而中性粒细胞碱性磷酸酶可有效鉴别急性白血病表型[13]。而慢性血液疾病患者，中性粒细胞碱性磷酸酶积分降低，但是针对原发性血小板增多症、真性红细胞增多症、骨髓纤维化、慢性中性粒细胞白血病等骨髓增殖性疾病患者中性粒细胞碱性磷酸酶积分呈现升高情况[14]。相关研究显示，中性粒细胞成熟度可利用细胞特异性激酶p55c拟fgr进行反映，进而可能中性粒细胞与其具有相关性[15]。相关研究表明，以上机制可能为细胞特异性激酶p55c拟fgr在慢性粒细胞白血病患者中降低，而骨髓增值性其他疾病该指标升高[16]。比较慢性粒细胞白血病不同时期，慢性期的特征为中性粒细胞碱性磷酸酶积分为0或降低。因此，很多研究实行中性粒细胞碱性磷酸酶染色，而实行鉴别诊断。骨髓增生异常综合征和再生障碍性贫血均为造血干细胞疾病，其预后和本质具有明显的差异性，再生障碍性贫血作为良性疾病，为造血功能衰竭，而骨髓增生异常综合征为恶性克隆性疾病，其特征为白血病趋势转化、骨髓增生异常。因此，需利用中性粒细胞碱性磷酸酶进行鉴别，以实施有效治疗。再生障碍性贫血相比骨髓增生异常综合征，中性粒细胞碱性磷酸酶积分明显提升。再生障碍性贫血由于中性粒细胞颗粒提升，细胞返祖，同时在激素、感染治疗的影响下会持续提升中性粒细胞碱性磷酸酶活性[17]。再生障碍性贫血不管处于局灶性非典型期还是早期，中性粒细胞碱性磷酸酶均明显增加。进而，再生障碍性贫血以中性粒细胞碱性磷酸酶积分不断升高为早期标准。相关研究显示，再生障碍性贫血，在治疗前后、不典型、典型、晚期、早期，中性粒细胞碱性磷酸酶活性状态均为极高峰点，表现呈现敏感性和特异性，与其他贫血疾病具有差异性[18]。进而再生障碍性贫血以中性粒细胞碱性磷酸酶为敏感、特异性指标。中性粒细胞碱性磷酸酶活性可对骨髓增生异常综合征、再生障碍性贫血进行鉴别。缺铁性贫血、骨髓增生异常综合征、特发性血小板减少性紫癜和健康人相比中性粒细胞碱性磷酸活性无明显差异性。该次研究中研究组选择各种血液疾病患者，主要包括慢性淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤、睡眠性阵发性血红蛋白尿症、真性红细胞增多症、骨髓增生异常综合征、类白血病反应、慢性髓细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、再生障碍性贫血、急性髓细胞白血病，从研究结果中表明，研究组真性红细胞增多症、多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞性白血病、再生障碍性贫血、类白血病反应、急性淋巴细胞白血病患者的中性粒细胞碱性磷酸酶积分均明显提升，而睡眠性阵发性血红蛋白尿症、骨髓增生异常综合征、慢性髓细胞白血病患者中性粒细胞碱性磷酸酶积分则明显降低，因此，可见碱性磷酸酶活性可对血液疾病患者进行有效反映，可促进诊断准确率提升。甘露双等[19]研究中选择血液疾病患者50例和健康体检者50名，比较中性粒细胞碱性磷酸酶阳性积分，结果显示，健康体检者阳性积分为（40.25±11.27）分，而特发性血小板减少性紫癜、缺铁性贫血、再生障碍性贫血、慢性淋巴细胞性白血病患者中性粒细胞碱性磷酸酶阳性积分分别为（74.43±18.54）分、（50.71±10.65）分、（58.29±21.52）分、（26.65±10.54）分、（23.29±18.55）分，与该次研究健康体检者阳性积分为（47.4±0.3）分，再生障碍性贫血、慢性淋巴细胞性白血病患者中性粒细胞碱性磷酸酶阳性积分分别为（58.2±10.6）分、（55.8±7.1）分，基本一致。针对临床症状在早期并不典型的血液疾病，或相似临床症状的血液疾病，可对碱性磷酸酶活性进行观察，以鉴别疾病类型[20]。以积分的上升和下降可对血液疾病进行鉴别。

综上所述，中性粒碱性磷酸酶活性可在血液疾病诊断中发挥辅助作用，可对疾病类型进行鉴别，应用价值较高。