肠道菌群及血清炎症因子在酒精性肝病发展中的作用

曹 轶，高广甫，夏兴洲，李冲慧

(郑州大学第五附属医院消化内科，郑州 450000)

酒精性肝病(alcoholic liver disease，ALD)是由于长期大量饮酒导致的肝脏疾病。初期阶段通常表现为脂肪肝,如不及时干预可发展为ALD和酒精性肝硬化，甚至引发肝癌，有较高的发病率、病死率，严重威胁人类的健康，是世界性严重公共卫生问题[1-3]。据流行病学调查[4]显示，近年来我国与欧美发达国家ALD发病率呈逐年上升趋势。在我国中西部以及南方地区，成人患病率高达4.3%～6.5%，乙醇已成为继病毒性肝炎后导致肝损害的第二大病因。有研究[5]显示，乙醇不仅通过其代谢产物乙醛对肝脏造成直接损害，还可诱发肠道菌群紊乱失衡和机体免疫功能低下，导致肠道细菌移位，进入机体循环，激发全身炎症反应，诱发严重并发症。本研究旨在观察ALD患者肠道菌群与血清炎症因子的表达，为ALD的早期诊断与治疗,延缓或逆转肝纤维化及肝硬化的发生提供新思路。

1 对象与方法

1.1 对象 选取2018年9月—2019年8月在郑州大学第五附属医院接受治疗的ALD门诊或住院的男性患者60例为ALD组，同期选取在本院体检的30例男性健康体检者作为对照组。2组均排除嗜肝病毒感染以及药物性、中毒性和自身免疫性肝损伤，在1个月内均未服用抗生素、酸奶等。ALD纳入标准符合(2018年更新版)非酒精性脂肪性肝病防治指南诊断标准[1]，本研究经院伦理委员会批准且患者知情同意。2组受试者年龄、体质量指数、空腹血糖、总胆固醇、甘油三酯比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。见表1。

1.2 方法

1.2.1 肠道菌群培养及检测方法 采用微生物学方法定量分析粪便中的双歧杆菌、粪肠球菌、大肠埃希杆菌、肠球菌含量，结果以每克粪便湿重中菌落形成单位的对数值表示(lgCFU·g-1)。

1.2.2 血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)指标检测 采用美国Beckman AU5800全自动生化分析仪检测，试剂盒由美康生物科技股份有限公司提供，批号：180904201、190604302、190803201；参考值：ALT(0～50 U·L-1)；AST(0～40 U·L-1)；TBIL(0～20 μmol·L-1)。取受试者空腹静脉血5 mL，低温4 ℃ 3 000 r·min-1离心15 min，取上层血清进行检测。

表1 2组受试者一般资料比较

1.2.3 血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)检测 采用美国Beckman XL流式细胞仪检测。试剂盒由江西赛基生物技术有限公司提供，批号：20190901；参考值：TNF-α(0.00～7.41 pg·mL-1)；IL-6(0.00～2.32 pg·mL-1)，其操作由专人严格按照说明书进行；标本制备，于上述血生化同批采静脉血4 mL，以3 000 r·min-1离心15 min后,将分离血清置于密封冻存管中，-70 ℃保存待测。

2 结果

2.1 2组受试者肝功能指标比较 ALD组ALT、AST、TBIL水平均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

2.2 2组受试者血清炎症因子水平比较 ALD组TNF-α、IL-6水平高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表2 2组受试者肝功能指标比较

表3 2组受试者血清炎症因子水平比较

2.3 2组肠道菌群含量比较 ALD组肠球菌、粪肠球菌、大肠埃希杆菌含量高于对照组，双歧杆菌含量低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 2组受试者肠道菌群含量比较

3 讨论

酒精具有嗜肝性，近90%由肝脏氧化代谢，ALD是一种慢性进行性疾病，其主要病因是乙醇过度摄入，目前治疗除戒酒、补充营养、药物治疗、肝移植等方法外，仍缺乏有效的药物治疗手段。ALD的发病机制可能主要与酒精代谢相关的氧化应激损伤、蛋氨酸代谢异常、肠道菌群失调与细菌移位、炎症介质相关损伤、营养失调、叠加病毒感染等有关。其中菌群失调是ALD发生发展的重要因素[6]。在正常人体中，肠道菌群处于动态平衡，维持着肠道的正常生理功能。有研究[7]证实,长期摄入酒精后，酒精及其代谢产物通过引起肠道菌群数量改变，肠道通透性增加，细菌位移等方式，造成肠道菌群紊乱，激活机体免疫应答，诱导肝脏产生促炎症因子，进而促进ALD的发生与发展。肠道菌群失调与炎症因子的过度表达在ALD发生、发展中起重要作用[8]。本研究结果显示，ALD组ALT、AST水平及TBIL含量均高于对照组，同相关研究[9]结果相似。本研究发现，ALD组除双歧杆菌含量低于对照组外，肠球菌、粪肠球菌、大肠埃希杆菌均高于对照组，进一步验证了酒精可以诱导肠道菌群失调，失调情况与肝损伤的严重程度成正比，肝损伤越严重，肠道菌群失调情况越严重，从而使肝病恶化，与相关研究[10-11]结果相符。本研究结果显示，ALD组TNF-α、IL-6水平高于对照组，其原因可能是ALD患者因长期饮酒，免疫力下降，慢性腹泻导致营养不良，渗透性增加，肠道菌群失调，肠黏膜屏障功能下降，出现肠源性的内毒素血症，而内毒素对肝脏的库普弗细胞(Kupffer细胞)产生刺激，促进炎症细胞因子过量表达，进一步加剧对肝脏的损伤作用，从而导致ALD的恶化[12]。

总之，通过本研究进一步验证了酒精可以诱导肠道菌群失调，ALD能导致机体血清炎症因子过量表达，二者协同在ALD病情的发生与发展中起重要作用。由于条件限制，本次样本有限，还有很多研究尚未完成，准备下一步将进行动物造模扩大样本量，对ALD患者肠道菌群中的双歧杆菌进行高通量测序定量分析，为ALD的早期发现与治疗提供可靠理论依据。