磷脂酰肌醇3-激酶p110α/β在甲状腺乳头状癌组织中的表达及与预后的相关性

杨晓华 吴淑华

甲状腺乳头状癌占甲状腺恶性肿瘤的80%～90%，受肿瘤转移、分期等影响，预后较差[1]，且易发生淋巴结转移[2]。根据甲状腺乳头状癌的综合症状，及早发现预后检测指标对于改善预后意义重大。磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K)作为信号传导蛋白激酶，可通过不同途径被多种细胞因子激活，活化后影响下游信号通路从而进行信号传导，参与细胞增殖、分化、凋亡、转移等多种生理过程[3]；作为经典肿瘤信号通路重要调控因子，在甲状腺乳头状癌中激活PI3K可促进甲状腺乳头状癌细胞增殖和侵袭，从而加重疾病进程[4]。其中PI3Kp110α、PI3Kp110β作为PI3K催化亚单元α、β的蛋白产物，在细胞中广泛存在，正常表达时能够调控DNA合成，促进细胞的正常发育。有研究表明，大肠癌中呈高表达，与大肠癌发生发展密切相关[5]。我们检测甲状腺乳头状癌病人癌组织中PI3Kp110α、PI3Kp110β表达情况，探讨其与预后的关系。

对象与方法

一、对象

2008年1月～2013年7月甲状腺乳头状癌病人60例(甲状腺乳头状癌组)，结节性甲状腺肿60例(结节性甲状腺肿组)，其他非癌病例中正常甲状腺组织60例(正常组)。甲状腺乳头状癌、结节性甲状腺肿均经病理检查确诊。纳入标准：(1)均符合诊断标准；(2)首次治疗，且均未接受过化疗；(3)临床资料完整。排除标准：(1)甲状腺乳头状癌合并结节性甲状腺肿；(2)合并其他恶性肿瘤疾病；(3)合并内分泌相关疾病及严重的心脑血管疾病；(4)妊娠期。

二、方法

收集甲状腺乳头状癌病人一般资料，包括年龄、性别、肿瘤大小、淋巴结转移情况、TNM分期。

1.样品收集及保存：甲状腺乳头状癌病人癌组织、结节性甲状腺肿病人甲状腺肿块以及正常组的正常甲状腺组织，经手术切除术后样本至4%多聚甲醛中固定，固定后石蜡包埋并切片，室温保存待用。

2.PI3Kp110α、PI3Kp110β蛋白表达检测：免疫组化法检测各组PI3Kp110α、PI3Kp110β的表达情况。脱蜡后柠檬酸高压热修复，分别滴加一抗PI3Kp110α、PI3Kp110β后4℃过夜，滴加二抗，DAB显色，苏木素复染、盐酸酒精分化，中性树胶封片。染色强度与阳性细胞的百分率相结合判定免疫组化染色结果。染色强度：不着色0分，淡黄色1分，棕黄色2分，黄褐色3分。阳性细胞所占百分比：阳性细胞数<5%计0分，5%≤阳性细胞数<30%计1分，30%≤阳性细胞数<60%计2分，≥60%计3分。两者乘积为染色总分，阴性(-)：0分，弱阳性(+)：1～4分，中度阳性(++)：5～8分，强阳性(+++)：9～12分。

3.随访：甲状腺乳头状癌病人自术后随访5年，截止随访时间2018年8月，最短随访时间为14个月，最长随访时间为60个月，中位随访时间为(52.63±5.81)个月。生存时间计算为手术至截止随访为止，或因复发、转移等原因造成复发而预后变差时间。

三、统计学分析

应用SPSS25.0、GraphPad软件分析数据计数资料以例(%)表示，采用χ2检验；采用Cox回归分析影响甲状腺乳头状癌病人预后的因素；Kaplan-Meier生存曲线分析甲状腺乳头状癌病人PI3Kp110α、PI3Kp110β阳性组和阴性组生存情况，行Log-rank检验；Spearman法分析甲状腺乳头状癌病人PI3Kp110α与PI3Kp110β的相关性。P<0.05为差异有统计学意义。

结果

1.3组PI3Kp110α、PI3Kp110β阳性表达比较见表1。分别与正常组、结节性甲状腺肿组相比，甲状腺乳头状癌组PI3Kp110α、PI3Kp110β阳性率升高，差异有统计学意义(P<0.05)。

表1 3组PI3Kp110α、PI3Kp110β表达比较(例，%)

2.甲状腺乳头状癌病人PI3Kp110α、PI3Kp110β阳性表达与临床病理特征的关系见表2。甲状腺乳头状癌病人癌组织PI3Kp110α、PI3Kp110β阳性表达均与年龄、性别无明显相关性(P>0.05)，与肿瘤大小、淋巴结转移情况、TNM分期相关性明显相关(P<0.05)。

3.影响甲状腺乳头状癌预后不良的因素：单因素分析显示，PI3Kp110α、PI3Kp110β、淋巴结转移、TNM分期均为影响甲状腺乳头状癌预后不良的危险因素(P<0.05)。多因素分析显示，PI3Kp110α、PI3Kp110β、淋巴结转移、TNM分期均是影响甲状腺乳头状癌预后不良的独立危险因素(P<0.05)。见表3。

4.PI3Kp110α、PI3Kp110β与甲状腺乳头状癌病人预后关系：60例病人术后随访，其中14例病人出现复发，无失访病例。PI3Kp110α、PI3Kp110β阳性累计生存率明显低于PI3Kp110α、PI3Kp110β阴性累计生存率(Log-rank=8.738、5.767，P=0.003、0.016均<0.05)。见图1。

表2 甲状腺乳头状癌病人PI3Kp110α、PI3Kp110β阳性表达与临床病理特征关系(例，%)

表3 影响甲状腺乳头状癌预后不良的因素

注：A.PI3Kp110α；B.PI3Kp110β

5.甲状腺乳头状癌病人癌组织中PI3Kp110α与PI3Kp110β的相关性分析：Spearman法分析显示，甲状腺乳头状癌病人癌组织中PI3Kp110α与PI3Kp110β呈正相关(r=0.791，P=0.000<0.05)。见图2。

讨论

甲状腺乳头状癌属内分泌器官恶性肿瘤，是内分泌系统中造成死亡的重要原因，严重影响病人生存质量[6]。甲状腺乳头状癌预后影响因素较多，早期症状不明显，尚无公认的肿瘤免疫学指标评估预后[7]。因此，及早发现甲状腺乳头状癌预后评估指标，根据预后情况及早干预，对于提高5年生存率具有重要意义。

图2 甲状腺乳头状癌病人癌组织中PI3Kp110α与PI3Kp110β的相关性

PI3K在肿瘤发生发展中发挥重要作用，具体分型为Ⅰ型PI3K，Ⅰ型PI3K根据特异性的酶底物及激活机制的不同分为ⅠA型和ⅠB型，其中ⅠA型PI3K由一个调节亚基p85α和一个催化亚基p110组成[8]。PI3Kp85α本身有较强的致癌作用，在甲状腺乳头状癌癌组织中水平高于增生组织，可作为甲状腺乳头状癌和甲状腺良性病变的诊断依据之一[9]。PI3Kp110由p110α、p110β、p110δ三种亚基构成，PI3Kp110α在垂体腺瘤中研究较多，作为一种致癌基因，可导致组织过度生长如纤维脂肪过度生长、节段性过度生长、皮肤异常、血管异常、肿瘤、脊柱侧凸等，加重疾病进程[10]；在甲状腺乳头状癌中表达上调，可能参与甲状腺乳头状癌的病理过程[11]。PI3Kp110β作为PI3Kp110另一亚基，其在维持肿瘤抑制基因第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因缺失的肿瘤细胞增殖中发挥促癌作用，高表达病人预后较差[12]。本研究发现，与正常组、结节性甲状腺肿组相比，甲状腺乳头状癌组PI3Kp110α、PI3Kp110β阳性率升高，高表达PI3Kp110α可以激活信号通路并促进细胞的增殖、迁移和侵袭过程，抑制PI3Kp110α表达可降低恶性肿瘤恶性生物学行为，可能成为治疗疾病的靶点[13]，提示绒毛状腺瘤、锯齿状腺瘤、伴癌的腺瘤中均高表达，其高表达可能是腺瘤发展为腺癌的危险因素；PI3Kp110β与细胞凋亡因子B细胞淋巴癌基因-2关系密切，且促进肿瘤细胞增殖、抑制肿瘤细胞凋亡,促进细胞体外侵袭能力，加重疾病进程[14]。提示PI3Kp110α、PI3Kp110β可能影响细胞增殖、迁移、侵袭过程从而影响疾病。PI3Kp110α、PI3Kp110β阳性表达均与肿瘤大小、淋巴结转移情况、TNM分期相关性较明显，提示PI3Kp110α、PI3Kp110β的高表达在甲状腺乳头状癌中可能影响癌细胞迁移从而增加TNM分期，加重疾病。且PI3Kp110α、PI3Kp110β阳性表达增加甲状腺乳头状癌预后不良的风险，在临床上检测甲状腺乳头状癌病人癌组织中PI3Kp110α、PI3Kp110β水平可在一定程度上预测预后状况。进一步研究发现，PI3Kp110α与PI3Kp110β呈正相关，提示甲状腺乳头状癌癌组织中PI3Kp110α与PI3Kp110β可能共同处于激活状态影响细胞迁移，加重疾病。

甲状腺乳头状癌病人癌组织中PI3Kp110α、PI3Kp110β阳性表达升高，二者与淋巴结转移、TNM分期关系密切，可作为甲状腺乳头状癌病人预测预后的指示性因子。在临床上抑制PI3Kp110α、PI3Kp110β表达情况可能作为治疗靶点。由于本研究受例数限制，结果可能与实际存在一定偏差。