HPLC法测定毛竹笋中核苷类成分的含量

2021-02-07陈笑天李聪胡慧明杜文鹏邓雅琼李斌江西中医药大学南昌330004南昌大学第二附属医院南昌330006

江西中医药大学学报 2021年1期

★陈笑天李聪胡慧明杜文鹏邓雅琼李斌（.江西中医药大学南昌 330004；.南昌大学第二附属医院南昌 330006）

毛竹笋系禾本科竹亚科刚竹属（Phyllostachys）植物毛竹Phyllostachys edulis（Carr.）Lehaie 竹或秆基上的芽萌发分化而成的膨大的芽和幼嫩的茎［1］。毛竹笋既是营养丰富的食材，又具有较高的药用价值。毛竹笋含有丰富的蛋白质、氨基酸、纤维素、微量元素等化学成分，具有促进胃肠蠕动、助消化等药理作用，且对肥胖、高脂血、高血压、肿瘤等疾病具有预防作用［2-5］。核苷类成分具有重要的生理功能，是生物细胞维持生命的重要物质。为了有效控制毛竹笋的质量，在参考有关文献的基础上［6-11］，选取毛竹笋中4个核苷类成分尿嘧啶、尿苷、胸腺嘧啶、腺苷作为指标，测量毛竹笋中核苷类成分的含量。

1 仪器与试药

安捷伦1260高效液相色谱仪，配四元泵、VWD检测器；上海亚荣旋转蒸发仪；梅特勒托利多万分之一分析天平；昆山超声仪器KQ2200B型超声波清洗机。

毛竹笋2018年春季采自南昌梅岭，由江西中医药大学赖学文教授鉴定为禾本科竹亚科刚竹属植物毛竹的竹笋。尿嘧啶、尿苷、胸腺嘧啶、腺苷对照品购自中国药品生物制品检定研究院。甲醇为色谱纯，水为超纯水。

2 实验方法

2.1 色谱条件色谱柱：Hypersil C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流速；0.5 mL/min；柱温：30 ℃ ；流动相：甲醇 - 水，梯度洗脱：0～10 min，3 % 甲醇；10～25 min，3 %～5 % 甲醇；25～50 min，5 %～30 %甲醇；50～80 min，30 %～60 % 甲醇。4 种成分的分离度均大于1.5。4种对照品及样品的色谱图见图1。

图1 4种对照品及竹笋样品的HPLC图

2.2 对照品溶液制备分别精密称取尿嘧啶10.2 mg、尿苷 10.0 mg、胸腺嘧啶 9.8 mg、腺苷 10.2 mg，分别置于100 mL容量瓶中，超纯水溶解定容，摇匀，即得到4种对照品溶液。

2.3 供试品溶液制备将毛竹笋粉碎处理，准确称取 10 g，置 250 mL 具塞锥形瓶中，加入 100 mL 95 %乙醇，超声提取，共3次。合并提取液，用旋转蒸发仪减压浓缩并定容至100 mL容量瓶中，即得毛竹笋供试品溶液。

2.4 方法学考察

2.4.1 线性关系考察精密吸取2.2项下的4种对照品溶液，分别稀释2、5、10、20倍，连同对照品原液组成5组不同浓度的对照品液，过滤后精密吸取20 μL注入高效液相色谱仪，以对照品进样量X为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线。结果见表1。

表1 4种化合物的线性方程

2.4.2 精密度试验精密吸取2.2项下的4种对照品溶液,连续进样6次，测得尿嘧啶、尿苷、胸腺嘧啶、腺苷的精密度RSD分别为0.89 %，0.62 %，1.05 %，0.76 %，结果显示仪器精密度良好。

2.4.3 重复性试验取毛竹笋样品5份，按2.3项下方法制备供试品溶液，分别测定，计算峰面积。结果显示尿嘧啶、尿苷、胸腺嘧啶、腺苷的RSD分别为 1.73 %，1.47 %，2.15 %，1.66 %，说明本法重复性良好。

2.4.4 稳定性试验取新制备的供试品溶液，分别在0，4，8，12，18，24h进样，结果显示尿嘧啶、尿苷、胸腺嘧啶、腺苷的RSD分别为1.91 %，1.66 %，2.35 %，1.45 %，表明供试品溶液在 24 h 内稳定。2.4.5 加样回收率试验按2.3项下方法制备毛竹笋样品溶液3份，在定容前分别加入4种对照品溶液各2、4、6 mL，在上述色谱条件下测定，计算回收率，结果显示尿嘧啶、尿苷、胸腺嘧啶、腺苷的平均回收率（n=6）分别为 98.13 %，1.15 %；97.55 %，0.89 %；RSD 分别为97.90 %，1.48 %；98.61 %，1.92 %。

2.5 样品含量测定精密量取按2.2项下方法制备的对照品溶液与按2.3项下方法制备的供试品溶液，按上述色谱条件进样测定，进样量为20 μL，尿嘧啶、尿苷、胸腺嘧啶、腺苷测定结果分别为129.10，86.08，23.28，151.35 mg/kg。