APP下载

肠道病毒71型感染手足口病患儿血清Th17 Treg细胞表达与病情程度相关性及预后评估

2021-02-06富凡春陆许贞沈亚王柯尹富冯峰

浙江临床医学 2021年1期
关键词:静置百分比外周血

富凡春 陆许贞 沈亚 王柯尹 富冯峰

手足口病(HFMD)是一种多发于<5岁儿童的常见传染病,主要是由肠道病毒71型(EV-A71)和柯萨奇A组16型(CV-A16)病毒感染引起,重症患者病死率高[1],严重危害儿童的身体健康。HFMD发病机制主要为,EV-A71或CV-A16病毒与感染者咽部及肠道上皮表面SCARB2和PSGL-1受体结合,经内吞作用进入上皮细胞,入侵人体各个系统,引发组织和器官炎症反应,进一步导致相应的临床表现[2]。研究表明,T淋巴细胞亚群参与HFMD病情发展及预后[3]。Th17细胞是一种可分泌白介素17(IL-17)的T细胞亚群,在机体自身免疫反应和防御反应中起重要作用。Treg细胞是一种调节机体自身免疫反应的细胞,其功能异常可引起自身免疫性疾病[4]。本文探讨Th17和Treg细胞在HFMD患儿血清中的表达情况,并分析其与病情严重程度的相关性。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2018年1月至2020年3月本院确诊HFMD患儿80例,HFMD诊断参照国家卫生健康委员会发布的手足口病诊疗指南(2018年版)[5]。根据此指南将患儿分为轻症组42例,重症组38例。轻症组患儿男22例,女20例,平均月龄(29.76±16.96)个月。重症组患儿男21例,女17例,平均月龄(31.42±15.91)个月。选择30例同期体检健康患儿为对照组,其中男

17例,女13例,平均月龄(30.98±19.75)个月。各组患儿性别、年龄等一般资料比较,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。对HFMD患儿进行3个月随访,治疗后体温正常,皮疹减少或消失,无遗留后遗症的76例患儿为预后良好组,存在后遗症的4例患儿为预后不良组,其中1例为遗留斜视,3例为肢体肌力下降。入组患儿临床表现和体征与手足口病诊断标准一致,咽拭子EV71特异性核酸检测阳性或血清EV71特异性IgM抗体阳性。均排除有器质性或免疫性疾病。

1.2 方法 所有HFMD患儿在入院第1天采集外周血2 ml,置入含有肝素的抗凝血管中,用于Th17和Treg细胞含量检测。对照组体检儿童外周血采集方法与HFMD患儿相同。(1)采用流式细胞仪检测外周血Th17细胞含量。取2 ml抗凝全血,采用Ficoll密度梯度离心法分离患儿外周血单核细胞,计数后将细胞的密度用DMEM培养基调整至2×106个/ml,取2 ml的细胞悬液加入至6孔板中,再加入1 μg/ml离子霉素、100 ng/ml的佛波酯和1 g/ml的莫能菌素刺激,于37℃、5% CO2培养箱中培养8 h,收集细胞。用PBS重悬细胞,取100 μl的细胞悬液,加入CD3-PC抗体5 μl和CD8-FITC抗体5 μl,混匀后室温避光静置30 min,PBS洗1次,再加入100 μl破膜剂A,混匀后室温避光静置15 min,1500 r/min离心5 min,收集沉淀。PBS洗1次,加入10μl IL-17-PE抗体和100 μl破膜剂B,混匀后室温静置30 min,PBS洗2次。用500 μl PBS重悬细胞,上机,用流式细胞仪检测外周血CD3+CD8-IL-17+Th17细胞的百分比。(2)采用流式细胞仪检测外周血Treg细胞含量。取100 μl的抗凝全血加入至流式管中,再加入CD4-PE抗体5 μl和CD25-PC5抗体5 μl,混匀后室温避光静置15 min,PBS洗1次,再加入100 μl破膜剂A,混匀后室温避光静置15 min,1500 r/min离心5 min,收集沉淀。用3 ml Fix/Prem缓冲液洗1次。加入20 μl Foxp3 McAb-FITC和100 μl破膜剂B,混匀后室温静置20 min,加入3 ml Fix/Prem缓冲液,1500 r/min离心5 min,收集沉淀。用500 μl PBS重悬细胞,上机,用流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的百分比。对HFMD患儿进行3个月随访,分析预后良好组和预后不良组患儿出院前最后一次收集外周血中Th17细胞和Treg细胞的含量。

1.3 统计学方法 采用SPSS 22.0统计软件。计量资料用(±s)表示,多组间比较用单因素方差分析,LSD多重比较;两组间比较采用t检验。计数资料用[n(%)]表示,组间比较用χ2检验。采用Spearman等级相关分析Th17和Treg细胞含量与HFMD患儿病情严重程度的相关性,Rs值>0.7表示高度相关,0.4

2 结果

2.1 各组患儿Th17细胞含量比较 见图1。

图1 三组患儿CD3+ CD8- IL-17+ Th17细胞百分比比较

2.2 各组患儿Treg细胞含量比较 见图2。

图2 三组患儿CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞百分比比较

2.3 各因子与病情严重程度的相关性分析 Th17细胞百分比与病情严重程度呈中度正相关(Rs=0.489,P=0.009),Treg细胞百分比与病情严重程度呈低度负相关(Rs=-0.307,P=0.031)。见图3。

图3 Th17和Treg细胞含量与HFMD病情严重程度的相关性分析

2.4 不同预后患儿血清Th17细胞含量比较 见图4。

2.5 不同预后患儿血清Treg细胞含量比较 见图5。

图4 CD3+ CD8-IL-17+ Th17细胞百分比与HFMD患儿预后关系

图5 CD4+ CD25+ Foxp3+Treg细胞百分比与HFMD患儿预后的关系

3 讨论

HFMD是一种全球性常见传染病,好发于婴幼儿,重症病例患儿大多均由EV-A17病毒感染引起,HFMD重症患儿的病情恶化迅速,其病死率高。因此早发现、早治疗是挽救HFMD患儿生命的重要措施。HFMD患儿多伴随免疫系统的功能紊乱,因此临床对其治疗,除抗病毒治疗外,给予免疫调节性药物常可显著改善病情[6]。

Th17属于T淋巴细胞亚群,是由CD4+T细胞在经过抗原呈递细胞的刺激后分化形成的效应T细胞,主要分泌致炎细胞因子IL-17,对于引发炎症反应具有关键性作用。本资料显示,轻症组和重症组患儿血清Th17细胞百分比显著高于对照组,表明Th17细胞含量随HFMD病情严重程度的增加而增加。此外,Spearman相关性分析显示Th17细胞含量与病情严重程度呈中度正相关。提示Th17细胞在HFMD的发病过程中起促进作用,这与何媛等[7]研究结果一致。推测Th17细胞在HFMD发病中的作用机制可能与其分泌的致炎因子IL-17密切相关,IL-17经Th17细胞分泌后,进一步激活T细胞,并刺激成纤维细胞、内皮细胞、上皮细胞等细胞产生IL-8、粒细胞-巨噬细胞刺激因子、IL-6等多种炎症因子,诱导炎症的产生[8]。IL-17还可与其受体结合,激活MAPK信号途径及NF-B信号途径引发炎症。此外,IL-17还可介导中性粒细胞的动员过程引发组织炎症反应。这些研究均表示Th17分泌的IL-17可以通过多种途径诱导机体炎症反应,本资料中Th17细胞含量随HFMD病情严重程度的增加而增加,提示在HFMD病情发展过程中,由Th17细胞分泌的IL-17致炎因子诱导的一系列炎症反应可能在HFMD病情进展过程中起重要作用,因此临床在治疗期间,除抗病毒治疗外,还应考虑抗炎治疗,这与王佳[9]提出的HFMD治疗方案一致。

Treg细胞属于T淋巴细胞亚群,是由CD4+T细胞在经过抗原呈递细胞的刺激后分化形成的效应T细胞,主要执行的是免疫抑制的效应。本研究中与轻症组和重症组患儿血清Treg细胞百分比低于对照组,表明Treg细胞含量随HFMD病情严重程度的增加而降低,这与以往研究结果一致[10]。此外,Spearman相关性分析显示Treg细胞含量与病情严重程度呈低度负相关。Treg细胞主要通过主动调节正常机体中自身反应性T细胞的过度活化和增殖,进而调控机体的免疫反应,是维持机体免疫平衡的重要细胞。本资料中Treg细胞含量随HFMD病情严重程度的增加而降低,提示在HFMD病情发展过程中,维持机体免疫稳态的Treg细胞含量降低,进而导致免疫功能的紊乱。但Treg细胞含量降低的机制尚不清楚,推测可能与细胞凋亡和细胞坏死有密切关系,具体机制还有待进一步研究。

本资料结果显示,预后不良患儿血清中Th17细胞含量高于预后良好患儿,预后不良患儿血清中Treg细胞含量低于预后良好患儿,提示Th17细胞和Treg细胞含量在评估HFMD的预后方面具有一定价值,当Th17细胞和Treg细胞含量未恢复至正常水平时,可能导致HFMD患儿预后不良。

综上,外周血Th17细胞含量随HFMD病情严重程度的增加而增加,与HFMD病情严重程度呈正相关,与预后呈负相关。外周血Treg细胞含量随HFMD病情严重程度的增加而降低,与HFMD病情严重程度呈负相关,与预后呈正相关。以Th17细胞和Treg细胞为靶点对HFMD的治疗及预后评估具有重要的意义。

猜你喜欢

静置百分比外周血
外周血B细胞耗竭治疗在狼疮性肾炎中的应用进展
外周血G6PD活性检测对于感染高危型人乳头瘤病毒宫颈癌患者的诊断预后价值
乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞与临床特征的关系
电动汽车静置场景的能耗性能评价方法研究
什么是外周血管超声检查
居家省心小知识
居家省心小知识
两种脂肪纯化方法对自体脂肪移植隆乳术的临床效果影响
趋势攻略之趋势线:百分比线
环保车型最多的美国城市