福建省规模化鸡场禽偏肺病毒感染情况的血清学调查

陈秀琴，郑 敏，黄梅清，陈少莺，吴南洋

(福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心，福建福州 350013)

禽偏肺病毒(Avian metapneumovirus,aMPV)首次于20世纪70年代末在南非被分离到[1]，属于副黏病毒科肺病毒亚科肺病毒属[2]。aMPV主要感染火鸡和鸡，鸭[3]、鸵鸟[4]和野禽[5]也可感染。火鸡感染后表现为打喷嚏，鼻漏，眶下窦肿胀和下颌水肿[6]。aMPV可感染任何日龄的鸡群[2]，是导致鸡肿头综合征(Swollen head syndrome,SHS)的重要发病诱因，感染鸡主要临床症状为眶周围窦和眶下窦肿，斜颈[7]，病死率2%～5%，若继发其他病毒或细菌感染，易导致病死率升高[8]。aMPV能够在输卵管定植，蛋鸡和种母鸡感染aMPV可导致产蛋率和孵化率下降，对于火鸡，产蛋率下降大于50%[6]，且影响蛋品质，感染鸡出现短暂的呼吸道症状。根据aMPV基因和抗原的不同，可将其分为A、B、C、D等4个亚型[8]。这4个亚型在世界各地均有报道[9-10]，其中，A和B亚型最早被报道，且流行范围最广，D亚型很罕见，于2000年首次在法国被报道[10-11]。1998年,我国首次在黑龙江某肉鸡场分离到aMPV[12]，福建还未分离到该病毒。目前，我国流行的aMPV以B亚型为主[13-14]。aMPV疫苗已经研发出来，包括灭活疫苗和弱毒疫苗，并已经在欧洲的养殖场使用[11]。

目前尚未有关于福建省规模化鸡场aMPV感染情况的报道，本研究旨在用血清学方法调查福建省鸡群感染aMPV的现状，为今后深入开展aMPV的流行病学研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 血样来源及处理 共采集1 020份血样，分别采自福州市、莆田市、泉州市、漳州市、龙岩市和南平市的规模化鸡场，且均未免疫接种aMPV疫苗，其中蛋鸡血样716份，肉鸡血样232份；父母代种鸡血样613份，商品代鸡血样335份。血样详细信息见表1。

表1 福建省规模化鸡场血样采集详细信息

每个鸡场随机抽取一定数量的健康鸡进行翅下静脉采血，5 000 r/min离心10 min分离血清，置于-20 ℃保存待用。

1.1.2 种鸡信息 种鸡包括5个品种，分别为京红蛋鸡、海兰蛋鸡、本地鸡1、本地鸡2和本地鸡3。海兰蛋鸡的采血时间为3月份、4月份和8月份，其他4个品种鸡的采血时间均为11月份和12月份。本地鸡1的日龄为366日龄，其他4个品种均为100多日龄。

1.1.3 主要仪器和试剂盒 ELx800光吸收酶标仪和洗板机，美国伯腾仪器有限公司(BioTek)产品；酶联免疫吸附试验(ELISA)禽偏肺病毒抗体检测试剂盒，美国Idexx公司产品，该试剂盒可检测A、B和/或C亚型aMPV抗体。

1.2 方法

1.2.1 操作步骤及结果判定 加100 μL阴性和阳性对照血清至相应的孔中，加100 μL已稀释500倍的血清样品至相应的孔，在室温孵育30 min;用350 μL蒸馏水洗涤每个孔3次;每孔加入100 μL抗鸡/抗火鸡的酶标抗体，在室温孵育30 min;用350 μL蒸馏水洗涤每个孔3次;每孔加100 μL TMB底物溶液，在室温孵育15 min;每孔加100 μL终止液终止反应;在650 nm测量吸光度值(OD值)。

终点抗体滴度(1∶500)与S/P的关系式如下所示：

log10滴度=1.09(log10S/P)+ 3.36

2 结果

2.1 不同地区aMPV抗体阳性率比较

共检测福建省福州、莆田、泉州、漳州、龙岩、南平6个地区的鸡群血清样品1 020份，aMPV抗体阳性数为634份，平均阳性率为62.2%(634/1 020)，6个地区的鸡群均已感染aMPV，抗体阳性率最高为100%，最低为32.0%(表2)。

表2 不同地区鸡群aMPV感染状况的血清学调查结果

2.2 蛋鸡和肉鸡aMPV抗体阳性率比较

采集的蛋鸡血样中，aMPV抗体阳性数为422份，阳性率为58.9%(422/716)。肉鸡血样中aMPV抗体阳性数为140份，阳性率为60.3%(140/232)，蛋鸡的aMPV抗体阳性率比肉鸡略低。

2.3 不同类型鸡群aMPV抗体阳性率比较

采集的父母代鸡群血样中，阳性319份，阳性率为52.0 %(319/613)，商品代鸡群阳性243份，阳性率为72.5%(243/335)(图1)。结果表明，父母代鸡群的抗体阳性率更低。

图1 不同类型鸡群aMPV抗体阳性率

2.4 不同种鸡的抗体滴度比较

分别对京红种鸡、海兰种鸡和本地种鸡共5个品种进行aMPV抗体阳性率比较(图2)。由图2可知，本地鸡1的抗体滴度最高，log10滴度明显高于京红、海兰和本地鸡2(P<0.05)。

图2 不同种鸡的抗体滴度

2.5 不同周龄的种/蛋鸡的血清检测结果

将种鸡和蛋鸡按照周龄的不同分为1～6周龄、7～21周龄和22～79周龄三个阶段进行aMPV抗体滴度和抗体阳性率比较(表3)。由表3可知，随着鸡群周龄的增长， aMPV的log10滴度和抗体阳性率逐渐升高。

表3 不同周龄鸡群aMPV的抗体滴度和阳性率比较

3 讨论

由于鸡感染aMPV后无明星临床症状，且病毒在靶器官的存在时间很短，因此分离aMPV很困难[2]。aMPV感染不易通过临床确诊，通常是采用ELISA等血清学方法来诊断[6]。本研究对福建地区的规模化鸡场进行aMPV血清学调查，发现部分地区的抗体阳性率高达100%，最低也有32.0%。郭龙宗等[15]对胶东地区不同日龄的种鸡进行aMPV抗体检测，发现多个鸡群的抗体阳性率达到100%；贠炳岭等[16]对黑龙江、吉林、河北、山东等地区的种鸡群进行aMPV血清学调查，发现调查的4个祖代种鸡场中，有3个的抗体阳性率达到100%，9个父母代肉种鸡场均不同程度地感染aMPV。国外的文献也报道，青年母鸡和种鸡普遍感染aMPV，总抗体阳性率高达96%[3]。

本研究发现，父母代和商品代鸡群及多个品种的种鸡群均可感染aMPV，说明aMPV感染鸡群不具有品种差异性。张丽华等[17]也报道，灵山土鸡等6个品种的种鸡群均存在aMPV感染。本研究中，不同父母代鸡群aMPV抗体阳性率低于商品代鸡群。这可能与鸡场的养殖模式密切相关。种鸡采用笼养模式，而商品代鸡群中的肉鸡采用平养模式，笼养模式不易滋生微生物，有利于防疫[18]。本地鸡1 aMPV抗体的log10滴度明显高于其他3个品种，可能是由于本地鸡1的日龄最大(366日龄),而其他3个品种均为100多日龄，也有可能与养殖场的饲养管理相关。

aMPV可感染不同日龄的鸡群[16]。本研究同时发现，随着鸡群日龄的增长， aMPV抗体的log10滴度和抗体阳性率逐渐升高。据报道，aMPV抗体随着鸡周龄的增长，出现增长、衰减后又增长的现象[17]。这与本研究不一致，可能是由于他们共检测了5～7周龄 、12～18周龄 、21～27周龄 、29～30周龄 、35～40周龄 和43～50周龄6个时间段的鸡群抗体，发现鸡群的平均抗体滴度在21～27周龄达到最大值，而本研究对22～79周龄的鸡群没有再分阶段检测抗体。

近年来，国内越来越多地区的鸡群均已感染aMPV，表明我国鸡群已经普遍感染aMPV。虽然aMPV感染鸡群直接导致的死亡率低，但是继发大肠埃希氏菌、支原体等感染导致的死亡率增高不容忽视。关于aMPV的传播途径报道较少，但早期的研究发现，从雏火鸡可分离到aMPV，且在感染aMPV的产蛋火鸡的输卵管检测到大量的aMPV，说明aMPV可通过蛋传播[11]。养殖场需要进一步加强饲养管理，采取严格的生物安全措施，对青年鸡、产蛋鸡和种鸡进行疫苗免疫，通过多途径有效预防aMPV感染。