一体化加工生白术饮片对大黄诱导的脾虚模型小鼠的影响

2021-01-20徐建中栾会玲孙乙铭黄晶晶

浙江中西医结合杂志 2021年1期

徐建中栾会玲业康孙乙铭黄晶晶金捷

白术最早记载于《神农本草经》，其性温，味甘、苦，主入脾胃，具有健脾燥湿，益气，利尿，止汗，安胎的作用，被称为“补气健脾第一要药”，有“十方九术”之说[1]。本研究通过大黄诱导的小鼠脾虚模型，观察白术一体化加工炮制的三种生白术饮片对脾虚模型小鼠基本机能状态、脾脏指数、胸腺指数以及胃蛋白酶活性的影响，进一步比较白术的不同一体化加工炮制工艺对治疗脾虚作用的影响。

1 实验材料

1.1 动物 ICR 小鼠120 只，SPF 级，雌性，体质量18～22g，由浙江省实验动物中心提供，合格证号20200622Abzz0118065189，饲养于清洁级动物房内，温度20～26℃，相对湿度40%～70%，光照明暗交替各12h，通风≥15 次/h；动物使用设施条件合格证号：SYXK（浙）2018-0011。喂饲全价营养颗粒饲料，饲料由浙江省实验动物中心饲料生产基地供应。饮水为城市自来水，净水器过滤后装入消毒饮水瓶内自由饮用。实验方案符合《浙江省实验动物管理办法》对动物伦理的要求。

1.2 药物三种一体化加工炮制的生白术饮片（产地：浙江磐安，自制），分别为：鲜白术80℃杀青1h 后于50℃烘至半干后切片、烘干；传统加工条件下囱灶烘至半干后切片、烘干；传统加工生白术饮片。汤剂的制备：称取上述三种不同的一体化加工炮制生白术样品各50g，第1 煎加400mL 水浸泡1h，微沸煎煮60min，第2 煎加入250mL 水，煎煮微沸25min，过滤，合并滤液，水浴浓缩，制成水煎液1g/mL。大黄按照常规的制备方法煎煮成含药材为1g/mL 的大黄水煎液。

1.3 仪器电子天平（慈溪市天东衡器厂）；JA2003 型电子天平（宁波市鄞州华丰电子仪器厂）；T-28 电子体温计（松下电器）；BAO-150A 精密鼓风干燥箱（施都凯仪器设备（上海）有限公司）；L-550台式低速大容量离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）。

2 实验方法

2.1 动物造模、分组及给药按照随机数字表法根据动物体质量随机抽取15 只小鼠作为正常对照组，其余小鼠均进行脾虚证造模。参考文献[2]建立脾虚小鼠模型：按25mL·kg-1·d-1的药量，每天1g/mL 大黄水煎液对小鼠进行灌胃，连续灌胃8 天。小鼠出现毛发枯槁、疏散，便软甚至便溏、体质量及体温下降等表现即为造模成功。正常对照组同时灌服等体积生理盐水。造模成功的小鼠按照随机数字表法根据其体质量随机分为七组，分别为模型组、传统加工低剂量组和高剂量组，传统加工至半干切片低剂量组和高剂量组，以及80℃杀青后半干切片低剂量组和高剂量组，每组15 只。从第9 天开始，模型组与正常对照组给予等体积生理盐水，传统加工低剂量组给予10g（生白术水煎液）·kg-1·d-1，传统加工高剂量组给予20g（生白术水煎液）·kg-1·d-1；传统加工至半干切片低剂量组给予10g（生白术加工品水煎液）·kg-1·d-1，传统加工至半干切片高剂量组给予20g（生白术加工品水煎液）·kg-1·d-1；80℃杀青后半干切片低剂量组给予10g（鲜白术80℃杀青水煎液）·kg-1·d-1，80℃杀青后半干切片高剂量组给予20g（鲜白术80℃杀青水煎液）·kg-1·d-1，连续给药7 天。

2.2 观察指标

2.2.1 胸腺指数及脾脏指数实验开始前、造模结束后次日给药前及给药结束次日，采用实验用电子秤称每组小鼠的体质量，以及同时采用数字温度计探测每组体温。给药结束次日脱颈椎处死小鼠，取出脾脏和胸腺，观察形态，称重并记录。胸腺指数及脾脏指数的计算公式：胸腺（脾脏）指数（mg/g）=胸腺（脾脏）重量（mg）/体质量（g）。

2.2.2 胃蛋白酶测定[3]采用麦特（Mett）氏毛细玻管法。第一步，制备蛋白管：用注射器把鸡蛋清注入10cm 长、内径1mm 的干净玻璃毛细管中，注意管内无气泡。其次，放入100℃沸水中煮1min，此时蛋白凝固，用镊子取出，备用。实验时，将胃取出，沿胃大弯剪开，合并内容物放进离心管中，并加入生理盐水10mL，离心，取上清液5mL，和10mL 0.05mol/L Hcl溶液混合加入培养皿中，调节PH 为2，放进蛋白管10 根，防止水分蒸发，盖好玻盖，放入37℃恒温箱中孵育24h，然后取出蛋白管，用尺测量每根蛋白管两端透明部分的长度（mm）（此表示已被消化了的蛋白质部分），求其平均值。

2.3 统计学方法应用SPSS 11.0 统计软件处理实验数据，结果以均数±标准差（）表示，多组间比较采用单因素方差分析，各组原始数据符合方差齐性要求时，组间比较显著性检验用LSD 检验；各组原始数据不符合方差齐性要求，组间比较显著性检验用Dunnett T3 检验；P<0.05 表示差异有统计学意义。

3 实验结果

3.1 不同一体化加工生白术饮片对脾虚模型小鼠体质量和体温的影响给药后，与正常对照组比较，模型组小鼠体质量显著降低（P<0.05）；与模型组比较，三种生白术饮片处理组小鼠体质量均有不同程度增加，其中，传统加工的生白术饮片低、高剂量组和传统加工半干切片低剂量组小鼠体质量改善显著（P<0.05）。模型组小鼠体温在给药后明显低于正常对照组（P<0.05）；与模型组比较，不同一体化加工的生白术饮片组小鼠体温显著改善（P<0.05），不同加工方法处理组间差异均无统计学意义（P>0.05）。见表1。

3.2 不同一体化加工生白术饮片对脾虚模型小鼠胸腺指数与脾脏指数的影响模型组小鼠较正常对照组胸腺指数出现显著性降低（P＜0.05），与模型组比较，各给药组小鼠胸腺指数虽有不同程度的增加，但差异无统计学意义。模型组小鼠较正常对照组脾脏指数显著性降低（P＜0.05）；与模型组比较，除传统加工半干切片低剂量组的脾脏指数稍降低外，其余组的脾脏指数均有不同程度的增加，其中80℃杀青后半干切片高剂量组小鼠脾脏指数改善显著（P＜0.05），不同加工方法处理组间差异无统计学意义（P>0.05）。见表2。

3.3 白术不同炮制品对脾虚模型小鼠胃蛋白酶活性的影响给药后，与正常对照组比较，模型组小鼠胃蛋白酶活性明显降低（P<0.05）；与模型组比较，三种生白术饮片低剂量组活性均降低，高剂量处理组小鼠胃蛋白酶活性增高，其中以80℃杀青后半干切片的高剂量组最显著（P<0.05），明显高于传统加工处理高剂量组和传统加工半干切片高剂量组（P 均<0.05）。其他各组蛋白酶活性差异不显著（P>0.05）。见表3。

表1 给药后各组小鼠体质量和体温比较（）

注：正常组为健康小鼠，予生理盐水；模型组为脾虚模型小鼠，予生理盐水；传统加工高低剂量组为脾虚模型小鼠分别给予20g/kg 和10g/kg 生白术水煎液；传统加工半干切片高低剂量组为脾虚模型小鼠分别给予20g/kg 和10g/kg 生白术加工品水煎液；80℃杀青后半干切片高低剂量组为脾虚模型小鼠分别给予20g/kg 和10g/kg 鲜白术80℃杀青水煎液；与正常对照组比较，aP<0.05；与模型组比较，bP<0.05；与传统加工半干切片高剂量组比较，cP<0.05

表2 给药后各组小鼠胸腺指数和脾脏指数比较（mg/g，）

4 讨论

传统的生白术饮片加工时主要为“除去杂质，洗净，润透，切厚片，干燥”，炮制过程中要用水润透处理，我们采用了一体化加工炮制工艺，将白术产地初加工与生白术饮片的炮制结合在一起，减少了中间加工步骤，避免了药材再加工过程中有效成分的损失。

本实验结果表明，造模后脾虚小鼠体质量增长明显减缓，且体温无明显升高，说明脾虚模型造模成功。而经不同一体化加工的生白术饮片治疗后脾虚证小鼠的体质量和体温增长加快，以传统加工生白术饮片高低剂量组，以及传统加工后半干切片低剂量组效果更明显，说明不同一体化加工生白术饮片能不同程度地改善脾虚证模型小鼠的脾虚状态。

表3 给药后各组小鼠胃蛋白酶活性比较（mm，）

胸腺与脾脏结构的正常与否与机体的免疫功能密切相关。胸腺指数与脾脏指数数值高低的变化可以反映机体免疫功能的状态[4]。本研究中，造模后脾虚小鼠胸腺指数较正常对照组出现明显萎缩（P<0.05），白术不同一体化加工制品的高低剂量组胸腺指数较模型组无显著性改善（P>0.05），80℃杀青后半干切片的高剂量组小鼠脾脏指数较模型组具有显著性增长（P<0.05），说明80℃杀青后半干切片能增加白术健脾的功效。长期服用大黄，可造成消化功能紊乱，将导致胃蛋白酶活降低。本实验中，模型组小鼠胃蛋白酶活性显著低于对照组（P<0.05），给药后，80℃杀青后半干切片高剂量组胃蛋白酶活性显著升高，且蛋白酶活性明显高于传统加工处理高剂量组和传统加工半干切片高剂量组（P<0.05）。可能原因是80℃杀青后半干切片处理的生白术饮片中内酯类成分白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ总含量较高（白术内酯总量为0.094%，其中白术内酯Ⅰ为0.056%；传统加工的生白术饮片白术内酯总含量为0.060%，其中白术内酯Ⅰ为0.035%；传统加工半干切片白术内酯总含量为0.081%，其中白术内酯Ⅰ为0.048%，另文发表）的缘故。研究表明，白术内酯Ⅰ能促进脾虚大鼠胃肠道消化吸收功能，是白术健脾的有效成分之一[5]。白术内酯Ⅰ通过抗炎作用而对慢性萎缩性胃炎（CAG）大鼠的胃黏膜起保护作用[6]。

综上所述，白术的三种一体化加工饮片均能不同程度地改善脾虚证模型小鼠的脾虚状态，增加其体温及体质量，同时对免疫器官萎缩也具有一定的改善作用，其中80℃杀青后半干切片高剂量组药效较为明显，说明该工艺对提高白术的健脾药效具有促进作用。