保护地韭菜灰霉病生物防治试验

石朝鹏 刘存辉 尹姗姗 孙作文*

〔1 山东省植物保护总站，山东济南 250100；2 全国农技推广服务中心防治处，北京 100125；3 齐鲁工业大学（山东省科学院）生态研究所，山东济南 250103；4 沂水县农业技术推广中心，山东沂水 276400〕

韭菜灰霉病俗称白点病、腐烂病（茂春，2015），由半知菌亚门葡萄孢属葱鳞葡萄孢菌引起（何忠全 等，2012）。韭菜灰霉病是韭菜上发生普遍且为害严重的重要病害，保护地低温高湿的环境条件有利于该病的发生，轻则减产10%～30%，重则毁棚绝收（黄福奇，2003）。检索中国农药信息网可知，我国防治韭菜灰霉病的合法登记农药主要有嘧霉胺和腐霉利，规定腐霉利的安全间隔期为30 d。但是保护地韭菜单茬生长期一般为25～40 d，因此设施韭菜生产中一旦施用腐霉利，农药残留超标风险极高，如山东省市场监督管理局通告的2019 年第18 期抽检的21 批次食品不合格情况，因韭菜腐霉利残留超标的就有3 批次，占14.3%。

为了在生产源头解决韭菜腐霉利残留超标问题，研究者探索减少化学农药的使用或者使用生物菌剂代替化学农药来防治韭菜灰霉病的绿色防控技术。枯草芽孢杆菌是一种高效的生防菌剂（闫杨 等，2019），能产生抗生素（张桂英 等，2004；Stein，2005）、酶类（顾真荣 等，2001）、抗菌蛋白（谢栋和胡剑，1998；何红 等，2003）等多种抗菌物质，对茄子灰霉病（Liu et al.，2011）、番茄灰霉病（乔俊卿 等，2017；李宝庆 等，2019）、葡萄灰霉病（伏波 等，2016）、黄瓜灰霉病（曹春娜 等，2009）等多种灰霉病有防治效果。木霉是世界公认的高效生防菌株，在植物病害的防治中发挥了重要作用（顾少华，2010）。早在1932 年，Weinding 就发现木霉对多种植物病原菌存在寄生作用（郭润芳 等，2001）。经过几十年的研究，前人已发现木霉作为生防菌对蔬菜（刘任和卢兆金，2003；杨春林 等，2008；毕文慧 等，2018）、水稻（李敏 等，2009）、棉花（Sivan，1989）、水果（张富荣 等，2018）及中药材（李琼芳 等，2007）等多种植物病害均有防治作用。木霉可通过抗生作用、竞争作用和重寄生作用、诱导植物增强抵抗力等多种机制对植物病原真菌产生拮抗作用。木霉在代谢过程中会分泌一些抗菌物质，如大分子的抗菌蛋白、酶类物质和抗生素等小分子多糖物质，在病原微生物的抑制作用中发挥主要作用（张衡宇，2011）。陈列忠等（2007）在1 株枸骨内生真菌哈茨木霉中分离得到的单端孢霉烯化合物，对番茄早疫病和黄瓜立枯病病原菌具有体外抑制活性。哈茨木霉适应性广、生长和繁殖速度快，可以迅速利用营养和占据空间，从而抑制病原真菌的生长（惠有为 等，2003）。王莉衡等（2014）发现芦荟内生真菌哈茨木霉LH-7 能够明显抑制多种植物病原真菌生长及孢子萌发。哈茨木霉还可以诱导植物产生抗性，通过直接或间接产生某些化学物质，激发植物的防卫反应（Ahraed et al.，2000）。马佳等（2014）发现哈茨木霉SH2303 能够防治玉米小斑病，该菌株处理的玉米叶片在接种玉米小斑病菌后36 h，体内防御反应酶系苯丙氨酸解氨酶（PAL）和超氧化物歧化酶（SOD）活性达到峰值。

目前国外已有商品化的木霉制剂，如美国的哈茨木霉T22（Topshield）（Harman，2000）和以色列的哈茨木霉T39（Trichodex）（Zimand & Elad，1996），可以防治由灰葡萄孢（Botrytis cinerea）引起的灰霉病、白粉病等多种叶部病害。本试验选用枯草芽孢杆菌和木霉进行试验，研究其对韭菜灰霉病的防治效果。鉴于木霉种类繁多，本试验先选择了5 种木霉为试验对象，进行田间药效试验，筛选出对韭菜灰霉病防治效果最好的木霉株系，再与枯草芽孢杆菌进行协同防治试验，调查防效，从而为使用绿色防控技术防治韭菜灰霉病提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验药剂

参试5 种木霉（Trichodermaspp.）：深绿木霉20111、哈茨木霉C61、哈茨木霉LTR-2、哈茨木霉21990、深绿木霉23617（活体孢子≥2 亿个 ·g-1），为山东省科学院生态研究所环境微生物团队研制中试产品；枯草芽孢杆菌（可湿性粉剂，活芽孢1 000 亿个·g-1），购于武汉科诺生物科技股份有限公司。

1.2 试验基地基本情况

试验在山东省沂水县天沐农业专业合作社大棚内进行，筛选试验和协同防治试验韭菜品种均主要为汉中韭，养根平茬后第1 茬韭菜供应春节市场，该茬韭菜灰霉病严重，故所有试验针对该茬韭菜进行灰霉病防治。施肥、浇水及除草等农事操作按当地生产习惯进行，且所有大棚均一致。

1.3 试验设计

1.3.1 木霉筛选试验 试验在简易式冬暖大棚内进行，共设置5 个木霉处理，每处理3 次重复，每小区面积为84 m2（12 m×7 m），采用随机区组设计，并设置空白对照（图1）。5 种木霉制剂均采用300 倍液，用药量为750 g·hm-2，用水量为450 L ·hm-2，木霉制剂和水混匀后，使用智能电动喷雾器对植株和地面喷雾，尽量均匀全面。在韭菜刚出土时开始喷药，每隔7 d 喷1 次，共喷2 次。第1 次喷药时间为2019 年1 有3 日，第2 次喷药时间为1 有10 日。

1.3.2 哈茨木霉21990 和枯草芽孢杆菌协同防治试验 试验选用4 个拱棚（高2 m，宽7 m），前一年因韭菜灰霉病暴发毁棚绝产，其中3 个棚为试验棚，1 个棚为对照棚。2019 年12 有17 日韭菜扣棚当日随水冲施哈茨木霉21990，用量为45 kg ·hm-2，待韭菜长至5 cm左右时（2019年12有27日），采用智能电动喷粉机喷施枯草芽孢杆菌，用量为3 kg·hm-2；对照棚不做任何处理。

1.4 调查时间

1.4.1 调查时间和次数 木霉筛选试验：分别于2019 年1 有3 日、1 有10 日和1 有17 日进行3 次病害调查。

哈茨木霉21990 和枯草芽孢杆菌协同防治试验：2020 年1 有10 日进行第1 次病害调查，1 有17 日进行第2 次病害调查。

1.4.2 调查方法 采用5 点取样法进行取样，每点随机调查3～5 株，对每株韭菜全部叶片进行调查。韭菜灰霉病病叶分级标准：0 级，无病斑；1 级，单叶片有病斑1～3 个；3 级，单叶片有病斑4～6 个；5 级，单叶片有病斑7～10 个；7 级，单叶片有病斑11～20 个，部分密集成片；9 级，单叶片有病斑密集，占叶片面积1/4 以上。按《农药田间药效试验准则（一）杀菌剂防治蔬菜灰霉病》（农业部农药检定所，2000）计算病情指数和防效。

1.5 计算方法

先用Microsoft Office Excel 2010软件进行数据统计，再用SPSS 17.0 软件进行LSD 方差分析。

2 结果与分析

2.1 安全性

试验期间对各处理韭菜进行系统观察，与对照相比，各处理均未出现明显药害，说明试剂用量对供试韭菜安全，无不良反应。

2.2 木霉筛选试验

第1 次和第2 次病害调查时，空白对照和各处理韭菜均未发生灰霉病；第3 次调查时部分韭菜发生灰霉病。调查结果如表1 所示：深绿木霉20111、哈茨木霉C61、哈茨木霉LTR-2、哈茨木霉21990 和深绿木霉23617 对韭菜灰霉病的防效 分 别 为13.62%、68.93%、64.00%、91.72% 和87.23%。其中，哈茨木霉21990 的防效最高，因此选择哈茨木霉21990 与枯草芽孢杆菌进行协同防治试验。

2.3 哈茨木霉21990 与枯草芽孢杆菌协同防治试验

第1 次调查时处理棚韭菜灰霉病病情指数为0，未发生明显病害，对照棚的病情指数为13.77（表2）。第2 次调查时，处理棚发生灰霉病，病情指数为9.71，对照棚病情指数为37.44，哈茨木霉21990与枯草芽孢杆菌协同防治，对韭菜灰霉病的防效为74.07%。

表1 木霉对韭菜灰霉病的田间防效

表2 哈茨木霉21990 与枯草芽孢杆菌协同防治试验结果

3 讨论

在木霉筛选试验中采用喷雾方法，在韭菜生产棚室低矮一侧实施起来比较困难，所以在哈茨木霉21990 与枯草芽孢杆菌协同防治试验中，哈茨木霉施用方法为在韭菜扣棚当日浇水时冲施，枯草芽孢杆菌采用智能电动喷粉机喷施，能使药剂均匀遍布整个棚室空间，方便快捷，省工省时。

协同防治试验棚为三膜栽培拱棚，空气湿度极高，2019 年1 有按此栽培模式，韭菜灰霉病发生严重，全部毁棚绝收。2019 年12 有使用哈茨木霉21990 与枯草芽孢杆菌协同防治，对韭菜灰霉病的防效为74.07%。防治韭菜灰霉病除了使用生物菌剂外，调控环境因素也很重要，通过改善栽培条件，提高棚内温度，降低棚内湿度，从而降低灰霉病发生风险和发生程度，减轻防治压力。

4 结论

本试验筛选出了对韭菜灰霉病防治效果较高的哈茨木霉21990；探索出了防控韭菜灰霉病操作方便的实施方案，即“一冲一喷”，在韭菜扣棚前随水冲施哈茨木霉21990，待韭菜长到5 cm 左右时喷施枯草芽孢杆菌，大面积田间试验防效为74.07%。在韭菜棚室湿度较高，灰霉病发生风险极高的条件下，获得较高的防效，有效保证了韭菜生产安全，同时从源头上有效解决因使用腐霉利防治韭菜灰霉病造成的残留超标问题，确保韭菜质量安全。