研究间接免疫荧光法筛查抗核抗体与特异性抗体检测的相互关系

罗学斌

（广西柳州市工人医院医学检验科，广西 柳州 545005）

抗核抗体（ANA）检测在自身免疫疾病诊疗过程中发挥着非常重要的作用，间接免疫荧光法（IIF）为检测抗核抗体的金标准，该检测方式具有较高的检测敏感度，在ANA检测筛选实验中有着广泛的应用[1]。现纳入23600例2017年～2018年在我院进行抗核抗体检测的患者，旨在分析间接免疫荧光法筛查抗核抗体结果与特异性抗体检测结果之间的相互关系，如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

随机抽取23600例2017年～2018年在我院进行抗核抗体检测的患者，诊断标准：经实验室检查等并结合患者临床症状确诊；纳入标准：所选患者意识正常且自愿参与本次研究。排除标准：重复送检标本。男性11976例，女性11624例，年龄18～87周岁，平均年龄（55.46±10.32）岁。确诊自身免疫性疾病（结缔组织疾病、干燥综合征、类风湿关节炎、系统性红斑狼疮）患者9447例，将之纳入甲组。疑似自身免疫性疾病患者8503例，将之纳入乙组。5650例非自身免疫性疾病患者并将之纳入丙组。本次研究在获得医院伦理委员会批准后开展。

1.2 方法

清晨在患者空腹状态下抽取肘部静脉血3～5 ml并对血液标本进行离心处理，分离出血清后制成标本并进行检验。应用IIF法筛查血清标本，应用LIA法检测特异性抗体[2]。通过HEp-2细胞细胞抗原片检测血清标本中ANA，首先稀释血清标本并与抗原基质片反应30 min，应用PBS吐温缓冲液流水冲洗后浸泡5 min，加入荧光标记二抗，在无光环境下持续孵育30 min，然后再次采用PBS吐温缓冲液流水冲洗，浸泡5 min后加入甘油封片，应用荧光显微镜观察[3]。阳性标准：抗体滴度≥1:100。应用LIA检测ANAs特异性抗体，首先稀释血清标本，然后使其与膜条上靶抗原反应30 min，洗涤3次之后加入1.5n抗人IgG并反应30 min，再洗涤3次，加入底物液并反应15 min，应用蒸馏水清洗膜条并终止反应，分析显色结果灰度值。阴性：灰度值≤5；临界值：6-10；阳性：灰度值≥11[4]。

1.3 统计学分析

应用SPSS 23.0统计学软件处理和分析相关数据，百分率（%）表示计数资料，均数±标准差（±s）表示计量资料，应用独立样本t检验进行组间对比，通过x2检验进行组间对比，P＜0.05，组间存在显著性差异。

2 结 果

2.1 LIA-ANAs及IIF-ANA结果总体分布及相关性分析

IIF阳性标本检测结果符合率为77.95%，IIF阴性标本检测结果符合率为59.65%，两种检测方法抗核抗体检测符合率为70.15%，见表1。

表1 LIA-ANAs及IIF-ANA结果总体分布及相关性分析

2.2 LIA灰度情况及疾病间关系分析

IIF-/LIA±与IIF-/LIA+患者共计4061例，甲、乙、丙各组患者占比分别为44.45%、41.02%、14.53%，甲组患者占比明显较丙组患者高，P＜0.05，见表2。

表2 LIA灰度情况及疾病间关系分析[n（%）]

3 讨 论

ANA检测在自身免疫性疾病诊治中发挥着非常重要的作用，IIF法检测ANA能够针对整个细胞周期、细胞骨架、细胞浆以及细胞核等成自身抗体进行检测，属于实验室常用ANA筛选方法，但是该检测方式具有自动化程度低以及操作标准化难度大等缺点，导致应用受限[5]。

ANAs特异性抗体及靶抗原纯化技术不断提高，液相芯片技术、化学发光法、LIA以及ELISA等标准化程度及自动化程度均较高的新型抗体检测方法也不断涌现。此次研究中，IIF阳性标本检测结果符合率为77.95%，IIF阴性标本检测结果符合率为59.65%，两种检测方法抗核抗体检测符合率为70.15%。可知IIF-ANA及LIA-ANAs检测结果存在一定的差异，因此两种检测方式不能相互替代。以HEp-2细胞，猴肝细胞作为抗原基质进行ANA检测时，不同固定方法、基质中抗原含量过低或者抗原分布不均等因素均会影响特定抗原并造成部分特异性抗体出现漏检现象[6]。IIF-/LIA±与IIF-/LIA+患者共计4061例，甲、乙、丙患者占比分别为44.45%、41.02%、14.53%，甲组患者占比明显较丙组患者高，P＜0.05，表明ANAs 特异性抗体检测无法被ANA IIF 检测取代。

综上所述，应用IIF筛查抗核抗体容易出现出现特异性抗体漏诊现象，单纯检测特异性抗体容易出现抗核抗体漏诊风险，实施综合检测有助于提高诊断准确率。