179例血红蛋白Westmead 基因型和表型研究

梁凯玲 秦丹卿 黄演林 王继成 梁杰 姚翠泽 杜丽

(广东省妇幼保健院 医学遗传中心，广东 广州 511442)

α-地中海贫血是由于α-珠蛋白基因发生缺失或者突变导致的遗传性溶血性贫血，包括缺失型和非缺失型两类。中国南方人群中最常见的非缺失型a-地中海贫血包括Hb Constant Spring(Hb CS)、Hb Quong Sze(Hb QS)和Hb Westmead(Hb WS)，其中Hb WS(HBA2:c.369C>G)频率最高。Hb WS是一种轻度不稳定的血红蛋白变异体，由于α2珠蛋白基因的122位密码子CAC突变为CAG[CD122(CAC>CAG)]，使此位密码子编码的组氨酸变成谷氨酰胺所致[1]。为探讨Hb WS不同基因型和血液学表型之间的关系，本研究回顾性分析了179例Hb WS的基因分型和血液学特征，现报告如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象 收集2018年1月至2019年12月于广东省妇幼保健院进行α和β地中海贫血基因诊断检测后，确诊为Hb WS的携带者共179例，其中男性64例，女性115例，年龄1～45岁。筛选α和β地中海贫血基因结果为阴性的50例样本作为正常对照组1(男女各25例)；筛选东南亚缺失型α-地贫杂合子25例样本作为对照组2(男性13例，女性12例)。

1.2 方法

1.2.1 血液学表型分析 采用 Sysmex XN-5000型五分类血细胞分析系统进行血常规检测，主要的红细胞参数包括血红蛋白(hemoglobin，HGB)、平均红细胞体积(mean corpuscular volume，MCV)、平均红细胞血红蛋白量(mean corpuscular hemoglobin，MCH)。采用法国Sebia公司的CAPILLARYS 2 FLE-XPIERCING全自动毛细管电泳仪进行血红蛋白组分分析，筛查指标包括血红蛋白A(hemoglobin A，Hb A)、血红蛋白A2(hemoglobin A 2，Hb A2)、血红蛋白F(hemoglobin F，Hb F)等。

1.2.2 地中海贫血基因分析 使用中国厦门致善生物公司试剂盒磁珠法进行外周血基因组DNA的提取；应用PCR—流式荧光杂交法检测常见的3种缺失型α地贫,常见的3种α珠蛋白基因点突变及17种β珠蛋白基因点突变(基因诊断试剂由中山大学达安基因股份有限公司提供)。

1.2.3 统计学分析 应用SPSS软件对血液学参数进行统计学分析，两样本均数比较采用单因素方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 179例Hb WS基因型分组 将179例Hb WS携带者患者按照基因型分为4组，具体如下：Hb WS 杂合子组即αWSα/αα共140 例(78.21%)；Hb WS杂合子复合α-地贫组9例(5.03%)，包括αWSα/ -α3. 7(6例)和αWSα/ -α4. 2(3例)；Hb WS杂合子复合东南亚缺失型α-地贫组即--SEA/αWSα共18 例(10.06%)；Hb WS合并轻型β-地贫组12例(6.70%)，包括αWSα/αα合并βCD41-42/βN(4例)、αWSα/αα合并βCD17/βN(2例)、αWSα/αα合并βIVS-II-654/βN(2例)、αWSα/αα合并β-28/βN(1例)、αWSα/αα合并βCD26/βN(1例)、αWSα/αα合并βCD71-72/βN(1例)以及αWSα/合并βCD41-42/βN(1例)

2.2.1 αWSα/αα组和正常对照组间的相关血液学参数比较结果 两组间的HGB、MCV和MCH的差异有统计学意义(P<0.05)，而Hb F、Hb A和Hb A2 的差异没有统计学意义。

2.2.2 αWSα/-α组和αWSα/αα组间的相关血液学参数比较分析结果 两组间MCH的差异有统计学意义(P<0.05)，而HGB、MCV 、Hb F、Hb A和Hb A2 的差异没有统计学意义(P>0.05)；αWSα/-α组与--SEA/αα对照组间比较结果显示两组间MCV、MCH和Hb A2 的差异有统计学意义(P<0.05)，而HGB、Hb F和Hb A的差异没有统计学意义。

2.2.3 --SEA/αWSα组与--SEA/αα对照组间的相关血液学参数比较分析结果 两组间HGB、MCV、MCH和Hb A2的差异有统计学意义(P<0.05)，而Hb F和Hb A的差异没有统计学意义。

2.2.4 αWSα/αα合并轻型β-地贫组的血液学指标分析 MCV、MCH均降低,大部分表现为小细胞低色素性贫血， HGB正常或轻微降低， Hb A2均升高，Hb F正常或轻微升高；1例孕妇患者的HGB低于90g/dL；1例αWSα/αα合并βCD26/βN基因型出现异常血红蛋白Hb E。

表1 4组不同基因型Hb WS的血液学参数与对照组比较分析

3 讨论

Hb WS是由于α2珠蛋白基因突变产生的一种轻度不稳定的血红蛋白变异体，Hb WS杂合子属于静止型α-地中海贫血，基因型为αWSα/αα。本研究中的140例αWSα/αα型患者，临床上无贫血表现或有轻度贫血，出现轻度贫血表现的主要是孕妇人群，考虑为妊娠期贫血导致，并非Hb WS杂合子所引起；该组基因型的血液学指标基本正常，符合静止型α-地贫表型特征。这类患者和健康人无明显区别，但以往的研究[2]表明这类患者在发热、服用磺胺类药物时容易发生溶血导致轻微的贫血。临床上仅凭血常规和血红蛋白电泳筛查容易导致此类静止型α-地贫的漏诊。在本研究中，9例Hb WS杂合子合并(-α3.7/)或(-α4.2/)，HGB值均正常，MCV和MCH降低，表现为小细胞低色素症，但其血液学参数变化较小，血常规和血红蛋白电泳各项指标与- -SEA/αα对照组比较表现得更轻微，这和曾劲伟等[3]的报道一致。Hb WS杂合子合并轻型β-地贫，主要表现为小细胞低色素性贫血，血红蛋白电泳参数Hb A2升高，Hb F正常或者轻微升高，与轻型β-地贫临床表型相似，只通过常规的血液学筛查易漏诊和误诊,在临床工作中需注意鉴别[4]。颜绵生等[5]认为尽管Hb WS的突变发生在α2基因上，但引起α珠蛋白链合成减少的变化程度可能较小，轻型β-地贫的血液学指标受Hb WS杂合子的影响不显著，轻型β-地贫的临床表型容易遗漏Hb WS杂合子的存在。在本次分析的12例Hb WS合并轻型β-地贫病例中，临床表现大部分无贫血或者轻微贫血，只有1例孕妇患者为中度贫血，HGB为84 g/dl，考虑为妊娠状态加重贫血症状。

东南亚缺失型α-地贫是中国南方最常见的缺失型α-地贫，携带此基因的杂合子个体无临床症状，血红蛋白正常或有轻度贫血，MCV和MCH降低。当东南亚缺失型α-地贫合并α+-地中海贫血称为血红蛋白H病，该基因型地中海贫表型和贫血程度差异大。此类基因型主要是由于4个α基因中3个发生了缺陷，导致α链合成降低，产生多余的β链，α链和β链比例失衡，红细胞受损导致慢性溶血性贫血[1]。本次研究中的18例Hb WS杂合子合并东南亚缺失型α-地贫也是血红蛋白H病的一种，HGB正常或轻微下降，MCV和MCH降低，大多数血液学参数与东南亚缺失型杂合子比较有统计学差异，但其临床表型又较其他基因型的血红蛋白H病为轻，电泳未见Hb H区带等其他异常血红蛋白。本研究中此种Hb H病的表型特征与此前的报道一致[6]。

在本次研究的所有两两比较组之间，MCH的差异均具有统计学意义，依此推断在静止型α-地贫筛查指标中，MCH具有较高的灵敏度，此前也有学者[7]建议临床采用MCH作为静止型α-地贫筛查的重要指标。

Hb WS是最常见的非缺失型α-地贫点突变类型，无论是单独存在还是合并其他地贫基因型，该突变对血液学表型影响均较小，临床需注意对该突变类型的检测，避免漏诊和误诊。此外，此基因型携带者应避免服用磺胺类药物和预防感染，以减少溶血的发生。本研究分析Hb WS不同基因型对血液学表型的影响,为地贫遗传咨询和临床诊断提供参考依据。