HPLC法测定三种防风中升麻素苷及5-O-甲基维斯阿米醇苷含量

王 萍，雷钧涛，刘玉波 (.长春中医药大学药学院，吉林 长春 07；2.吉林医药学院药学院，吉林 吉林 20；.吉林市林业科学研究院，吉林 吉林 20)

本品为伞形科植物防风(Saposhnikoviadivaricata(Turcz.)Schischk.)的干燥根，具有祛风解表、胜湿止痛、止痉的作用[1]。研究表明，防风中所含有的升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、升麻素、亥矛酚苷等色原酮类成分，是发挥药效作用的主要物质基础，具有解热、抗炎、镇痛等多方面的药理作用[2]。因此，本研究以高效液相色谱法同时测定三种不同地区防风中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量，为防风的深入研究提供基础。

1 实验材料

1.1 实验药品

3种分别来源于吉林省吉林市、白城市和内蒙古赤峰市的防风药材，均经吉林医药学院雷钧涛教授鉴定为药典品种。升麻素苷(中国成都菲普德生物有限公司，>98%，JOT-10173)；5-O-甲基维斯阿米醇苷(中国成都菲普德生物有限公司，>98%，JOT-10152)；色谱甲醇(Fisher公司)。

1.2 实验仪器

高效液相色谱仪(LC-20A型，日本岛津公司)；超声波清洗器(KQ-5200E型，中国昆山市超声仪器有限公司)。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

升麻素苷对照品及5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品各5 mg，精密称定，分别加甲醇制成60 mg/L的溶液，备用。

2.2 供试品溶液制备

取防风药材细粉约0.25 g，精密称定，放于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10.0 mL，水浴回流2 h，放冷，滤过，滤液放于容量瓶中，用甲醇定容至10.0 mL。

2.3 色谱条件

按2015版《中国药典》方法，色谱柱：Apollo C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱温为35 ℃；流动相为甲醇∶水(45∶55)；检测波长为254 nm。

2.4 线性关系考察

2.4.1升麻素苷线性关系考察

自动进样器分别吸取60 mg/L的升麻素苷对照品溶液1、2、5、10、15、20 μL进入液相色谱仪中，按照2.3色谱条件测定。依据测得数据，以升麻素苷质量为横坐标，以升麻素苷色谱峰吸收峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算线性回归方程为y=1 738 044.84x-3 442.10，R2=1。升麻素苷在0.06～1.20 μg范围内具有良好的线性关系。

2.4.25-O-甲基维斯阿米醇苷线性关系考察

自动进样器分别吸取60 mg/L的5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液1、2、5、10、15、20 μL，进入液相色谱仪中，按照2.3色谱条件测定。依据测得数据，以5-O-甲基维斯阿米醇苷质量为横坐标，以5-O-甲基维斯阿米醇苷色谱峰吸收峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算线性回归方程为y=1 981 912.03x-2 128.38，R2=1。5-O-甲基维斯阿米醇苷在0.06～1.20 μg范围内具有良好的线性关系。

2.5 精密度试验

2.5.1升麻素苷精密度试验

精密吸取60 mg/L的升麻素苷对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，重复6次，按照2.3色谱条件测定，以升麻素苷峰面积计算精密度，RSD=0.11%。

2.5.25-O-甲基维斯阿米醇苷精密度试验

精密吸取60 mg/L的5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，重复6次，按照2.3色谱条件测定，以5-O-甲基维斯阿米醇苷峰面积计算精密度，RSD=0.30%。

2.6 稳定性试验

取供试品溶液，分别于0、4、8、16、20、24 h注入液相色谱仪，进样量为10 μL，按照2.3色谱条件测定，记录峰面积，以升麻素苷峰面积计算其稳定性，RSD为0.32%，以5-O-甲基维斯阿米醇苷峰面积计算其稳定性RSD值为0.30%。

2.7 重复性试验

精密称取同一批防风粉末，按2.2方法处理，并按2.3色谱条件测定，进样10 μL，计算样品中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷含量，以升麻素苷含量计算RSD值为0.22%，以5-O-甲基维斯阿米醇苷计算RSD值0.12%。

2.8 加样回收率实验

精密称取已知升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷含量的防风药材供试品6份，分别精密加入升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品，按2.3色谱条件测定，按照含量测定项下操作，分别计算回收率。升麻素苷平均回收率为101.68%，RSD值为1.33%;5-O-甲基维斯阿米醇苷平均回收率率为99.77%，RSD值为1.03%。

2.9样品中含量测定

分别取不同产地防风药材，按上述2.3色谱条件测定，11种防风药材中升麻素苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷含量如表1。升麻素苷的保留时间为5.799 min，5-O-甲基维斯阿米醇苷的保留时间为13.273 min。

表 1 3种防风药材中两种成分的含量(mg/g)

3 讨 论

由含量测定结果可知，各地区防风含量有所差异，以含量为指标可知含量大小顺序为白城>赤峰>吉林。由于防风的品种不仅复杂多样，而且性状鉴定困难，且混淆的品类多，使得药材质量参差不齐[3]。历代名著中对防风产地的记载主要包括陕西、黑龙江、山东、河南、江苏、浙江及湖北北部等地。现在防风的主要产区为东北和内蒙古，质量也以东北黑龙江的为最佳。到目前为止，防风的产区变化很大，主要是防风的产地由南向北移，由关内移到了关外的东北和内蒙古地区[4]。本实验中选取东北地区两种防风和内蒙地区一种防风进行对比，可以看出其中吉林白城种子较优。本实验也证明了不同地区防风品种药典中所规定的含量相差较多。为了栽培与种植需要，需要加大样本量进行逐步分析。