抗帕宁汤剂对帕金森病大鼠多巴胺能神经元保护作用

刘立峰，赵佳琪 (北华大学:.基础医学院，.医学技术学院，吉林 吉林 132013)

中医将帕金森病(Parkinson’s disease,PD)归为“颤症”“拘挛”“振掉”以及“痉症”等疾病范畴[1]，认为是肝肾亏虚、气血不足、风气内动所致，主要是从补肾活血息风的角度进行治疗，在临床中取得一定成效[2]。以此为理论依据选取滋补肝肾的熟地、枸杞，祛风的全蝎，息风定颤的天麻等药材自拟抗帕宁汤剂方，建立PD大鼠模型，观察抗帕宁汤剂对PD模型大鼠行为学的影响，并探讨其作用机制，以期为抗帕宁汤剂临床治疗PD奠定理论与实验基础。

1 资料与方法

1.1 材 料

动物为清洁且健康、不限性别的Wister大鼠，体重250 g左右，周龄8～10周。

自拟抗帕宁汤剂配比：将熟地、枸杞、珍珠母、天麻、肉苁蓉、胆南星、全蝎等按6∶6∶5∶4∶3∶3∶1的比例称重后加水煎制，灭菌环境下4 ℃保存。对于全蝎等不宜煎煮的中药材以粉碎等方式混入溶液中。美多巴(上海罗氏制药，国药准字H10930198)。

1.2 方 法

采用MPTP偏侧纹状体两点注入法制备PD模型大鼠，随机分为模型组,美多巴组,抗帕宁汤高、中、低剂量组,每组10只。3个组别抗帕宁汤剂量依次是15、7.5、3.75 g/(kg·d)。并设假手术组为对照组，灌胃治疗1个月。观察各组大鼠治疗前后诱导的行为学变化及对纹状体单胺类神经递质、中脑酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的影响。

1.3 观察指标

①旋转行为检测：大鼠灌胃前以及灌胃后的14、28 d，分别对各个组别的大鼠注射APO，引起其旋转行为。观察用药后各组大鼠从第10分钟到第40分钟的旋转行为及旋转次数。

②神经递质检测：每组均取10只大鼠，断头取出脑组织，快速将双侧纹状体取出，称重后标记，放入到液化氮之中，储存在-70 ℃的冰箱中。测定前于室温中逐渐融化,放入到冷处理过的0.4 mmol/L高氯酸液中，配成100 g/L的溶液，搅匀离心，取约50 μL上清液为样本。利用液相色谱设备对各组大鼠的单胺递质进行检测。

1.4 统计学方法

2 结 果

2.1 抗帕宁汤对PD大鼠旋转行为的影响

抗帕宁汤剂高剂量组和低剂量组经过灌胃1个月后，其旋转行为见显著改善，中剂量组在灌胃2周及1个月后，其旋转行为也见显著改善，P均<0.05，具体见表1。

2.2 多巴胺能神经递质的检测结果

抗帕宁汤剂3种剂量的大鼠纹状体的多巴胺、二羟苯乙酸及高香草酸的含量均显著提升，其中以中剂量的组别增加的幅度最高，具体表2。

表 1 不同组别大鼠治疗前后旋转圈数

表 2 不同组别大鼠纹状体单胺类神经递质水平比较

3 讨 论

PD是困扰老年人群的常见中枢神经疾病，随着年龄的增高其发病率增加。患者的肢体震颤，机体各项功能退化，对其生存质量造成严重影响[3]。目前中医领域主要是从补肾活血息风的角度进行治疗，按照这一思路,本研究对症自拟抗帕宁汤剂方探讨对PD的治疗[4-5]。方中包括熟地、枸杞、珍珠母、天麻、肉苁蓉、胆南星、全蝎等多味药材。其中熟地、枸杞、肉苁蓉具有补益肝肾的作用，珍珠母、天麻、胆南星等平肝熄风且可定颤止痉，加上具有祛风功效的虫类药材全蝎，诸药合效共同起到滋补肝肾、息风活血的功效，正对该病的病因。为进一步明确这一方剂对于PD的临床效果，研究制作PD模型大鼠，选取不同剂量的抗帕宁汤方剂开展相关临床实验。大鼠旋转行为改变情况与中脑、多巴胺以及TH密切相关，反映出神经元坏死程度，可以作为帕宁汤对神经元的保护作用的指标。TH是多巴胺的主要合成调节因素，与多巴胺的关系密切,通过多巴胺等神经递质检测可了解抗帕宁汤对于神经元的保护作用。研究结果显示，抗帕宁组各剂量的旋转行为及神经元递质等情况均显著好于模型组，且中剂量组的效果更为理想。

综上，抗帕宁汤能够有效改善PD模型大鼠旋转行为，并提升纹状体中多巴胺和其代谢物水平，有助于保护多巴胺能神经元,并且采用中剂量时期效果最显著。