不同产地苦参质量评价

王梦桐,孙莹莹,荣树良,朱键勋,李 勇,林 喆*

(1.长春中医药大学药学院,吉林 长春 130117;2.梅河口市泽泉中草药种植专业合作社,吉林 梅河口 135014)

苦参为豆科植物苦参Sophora flavescens Ait.的干燥根。春、秋二季采挖,除去根头和小支根,洗净,干燥,或趁鲜切片,干燥[1]。近年来,国内外对苦参的研究十分广泛,涵盖化学、活性、质量、药理作用、临床应用等,通过近几年来的研究表明,苦参的化学成分主要有生物碱类和黄酮类[2-4]。生物碱中苦参型生物碱为主要活性成分,有多方面的药理作用,如抗心律失常、抗菌、抗炎、抗风湿、抗肿瘤、抗过敏、抗病毒及生物反应调节作用等[5-10]。因此,本研究以扩大苦参药用资源为目标,对吉林产区栽培苦参进行含有量测定,并依据2020 年版《中国药典》 苦参项下相关内容与方法,同河北、河南、甘肃、内蒙古、山西等常用5 个产区的苦参药材中苦参碱和氧化苦参碱进行含有量对比,以期为6 个产地苦参的质量评价提供实验依据,进而实现对苦参药用资源的进一步扩大和科学合理应用。

1 材料

1.1 仪器 高效液相色谱仪(日本岛津公司)；XS205 型电子分析天平(瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司)；ST-2000 旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；KQ200B 型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 试剂与药物 苦参碱对照品(批号110805-201709)、氧化苦参碱对照品(批号110780-201508) 均购自中国食品药品检定研究院。乙腈、无水乙醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯；水为超纯水。

1.3 样品 苦参样品于2017 年10 月采收于内蒙古、河南、甘肃、河北、山西、吉林梅河口6 个地区,经长春中医药大学药学院林喆教授鉴定为豆科植物苦参Sophora fla-vescens Ait.的干燥根。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Platisil NH2色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相乙腈-无水乙醇-3% 磷酸溶液(8∶1∶1)；检测波长220 nm；体积流量1.0 mL/min；进样量对照品溶液5 μL,供试品溶液10 μL；理论板数按氧化苦参碱峰计算不低于2 000。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液 采用2020 年版《中国药典》 一部苦参项下含有量测定方法制备对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液 采用2020 年版《中国药典》 一部苦参项下含有量测定方法制备供试品溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 系统适用性试验 取“2.2” 项下对照品溶液和供试品溶液适量,在“2.1” 项色谱条件下进样测定,记录色谱图,见图1。苦参碱标准品液相色谱图中苦参碱保留时间为17 min,氧化苦参碱保留时间29 min,理论板数均大于2 000。

2.3.2 线性关系考察 精密吸取“2.2.1” 项下对照品溶液100、200、300、400、500、600 μL 至10 mL 量瓶中,乙腈-无水乙醇(80∶20) 定容至刻线,在“2.1” 项色谱条件下进样,以色谱峰面积积分值为纵坐标(Y),对照品浓度为横坐标(X),分别进行线性回归,得回归方程分别为苦参碱Y=298 782X+607.14 (r=0.999 8)、氧化苦参碱Y=400 655X -5 890.3 (r=0.999 0),分别在0.04～0.37、0.12～1.83 μg 范围内线性关系良好。

图1 苦参中苦参碱、氧化苦参碱HPLC 色谱图

2.3.3 精密度试验 取质量浓度为50 μg/mL 苦参碱和0.15 mg/mL 氧化苦参碱对照品溶液,在“2.1” 项色谱条件下分别连续进样6 次,测定峰面积。测得RSD 为1.95%,表明仪器精密度良好。

2.3.4 重复性试验 取山西苦参样品约0.5 g,按“2.2.2” 下方法制备供试品溶液5 份,在“2.1” 项色谱条件下进行含有量测定,测得RSD 为1.56%,表明该方法重复性良好。

2.3.5 稳定性试验 取山西苦参样品,按“2.2.2” 下方法制备供试品溶液,在“2.1” 项色谱条件下,分别于0、2、4、6、8、10、12 h 进样测定峰面积,测得氧化苦参碱和苦参碱RSD 分别为1.68%、1.27%,表明供试品溶液在12 h 内稳定性良好。

2.3.6 加样回收率试验 取山西苦参样品0.3 g 共18 份,分两大组,两大组分3 小组分别精密加入苦参碱、氧化苦参碱对照品相当于样品浓度的80%、100%、120%。按“2.2.2” 项下方法制备供试品溶液,另取“2.2.1” 项下苦参碱、氧化苦参碱对照品溶液进样测定照,并计算苦参碱、氧化苦参碱低、中、高3 个浓度的加样回收率。结果表明,苦参碱加样回收率为97.9%～101.0%,平均回收率99.9%,RSD 为1.05%；氧化苦参碱加样回收率为97.8%～101.9%,平均回收率100.1%,RSD 为1.19%。

2.4 样品含有量测定 取6 个产区的苦参样品,粉碎成粉末,过3 号筛。精密称取0.3 g,河北、河南、甘肃、内蒙古、山西5 个产地各3 份；吉林梅河口产地取3 批样品,每批3 份,共9 份。按“2.2.2” 项下方法制备供试品溶液。另取“2.2.1” 项下苦参碱、氧化苦参碱对照品溶液进样测定,在“2.1” 项色谱条件下进样,测得6 个不同产区供试品的中苦参碱、氧化苦参碱总含有量均大于1.2%,结果符合2020 年版《中国药典》 规定,见表1。

表1 不同产区样品中苦参碱、氧化苦参碱含有量测定结果（%，n=3）

3 讨论

2020 年版《中国药典》 一部项下规定苦参中苦参碱、氧化苦参碱总量不得低于1.2%[1]。实验结果表明,6 个产地苦参药材饮片均符合《中国药典》 标准,其中河南含有量最高。

各产地间含有量及两者相对含有量存在较大差异,除产地影响外,也可能与采收季节和生长年限有关[11],苦参碱与氧化苦参碱之间是否会随着时间推移而相互转化,或转化成其他物质还有待进一步研究。2 种生物碱的药理作用存在差别[12-15],虽然饮片符合《中国药典》 含有量要求,但在临床应用过程中药效不稳定及能否真正达到某种特定药效仍有待商榷。同时两者均有一定毒性[16],其毒性与剂量的关系尚不明确。

苦参为常用传统中药,主要药效物质基础为生物碱与黄酮类,具有多种生物活性,而且苦参碱和氧化苦参碱并非专属性有效成分,在质量评价方法中增加苦参指纹图谱鉴定,建立真正的质量评价标志物,以期进一步提高苦参饮片质量的评价标准。