HPV E6/E7 mRNA和HPV DNA在宫颈病变诊治中应用价值的研究

刘浩，黄风琴，郭智俊，黄嘉颖，周海莹，董文文，梁景星，朱智逊，梁栋伟

(广东省人民医院南海医院(佛山市南海区第二人民医院)，广东 佛山)

0 引言

宫颈癌作为女性常见的恶性肿瘤之一，主要归因于子宫颈上皮瘤变。据流行病学数据统计，全球每年宫颈癌新发病例数大约为50万例[1]，而对于宫颈癌患者进行早期诊断，是预防和控制病情恶化的重要环节。既往，临床常采用LCT以及TCT检查方法对宫颈疾病进行诊断，但是上述两法容易因操作等主观因素造成假阳性以及漏检情况的出现[2]。近年来，受益于基因检测技术的迅猛发展，HPV E6/E7 mRNA以及HPV DNA检测法应运而生[3]，但鉴于各临床检测机构标准不一，对于HPV E6/E7 mRNA以及HPV DNA的选择尚未形成一致结论。故基于此，笔者通过系统探究HPV E6/E7 mRNA和HPV DNA在宫颈病变诊治中应用价值，以期为临床宫颈病变的诊断提供理论指导以及参考借鉴。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本研究选取2016年7月至2017年7月于我院行宫颈病变筛查的受试者300例作为研究对象，300例患者年龄22-58岁，平均年龄(36.4±8.8)岁。所有患者均明确研究意义，并自愿签署知情同意书。

1.2 纳入标准与排除标准

纳入标准：1)行LCT、HPV E6/E7 mRNA和HPV DNA检测的患者；2)明确研究意义，并且自愿签署知情同意书的患者；3)年龄在22-58岁之间的患者。

排除标准：1)行子宫切除术、宫颈手术或曾行盆腔放射治疗史的患者；2)合并患有严重器质性疾病的患者；3)妊娠期患者；4)不自愿签署知情同意书的患者。

表1 不同细胞病理学分级检出率比较

表2 不同细胞病理学分级诊断情况比较

1.3 方法

1.3.1 HPV E6/E7 mRNA检测

所有宫颈细胞标本3000r/min离心5min弃去上清，加入灭菌水重悬后加入细胞裂液(lysis mixture与proteinase K按1:800混合)，65℃孵育60min裂解细胞，加入终止液终止反应。然后经过杂交捕获mRNA、信号放大、底物发光反应用Quanti-Virus TM冷光仪检测，经Diacarta公司软件转换后自动判断HPV E6/E7 mRNA 拷贝数值。

1.3.2 HPV DNA检测

HPV DNA采用导流杂交基因芯片分型检测。宫颈标本通过PCR技术扩增获得DNA，使用凯普Hybri Max 医用核酸分子快速杂交仪进行HPV DNA 杂交分析。

1.3.3 LCT检测

超薄液基细胞学检测(LCT)宫颈脱落细胞经LCT离心制片机处理制片，固定、染色后经细胞学诊断医师依据2001年国际癌症协会推荐的泊赛斯达系统(TBS)分类标准进行阅片判读。

1.4 观察指标

通过比较各组细胞标本HPV E6/E7 mRNA和HPV DNA的敏感度、特异性、阳性预测值以及阴性预测值等指标差异以期系统评估HPV E6/E7 mRNA和HPV DNA在宫颈病变诊治中的临床应用潜力。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 不同细胞病理学分级检出率比较

对于WNL组以及ASCUS组而言，HPV DNA的检出率均高于HPV E6/E7 mRNA，差异具有统计学意义(P＜0.05)，而对于LSIL组以及HSIL而言，差异并无统计学意义(P＞0.05)(表1)。

2.2 不同细胞病理学分级诊断情况比较

研究结果表明，对于LSIL组以及HSIL组而言，HPV E6/E7 mRNA的阳性预测值、阴性预测值以及准确度均显著高于HPV DNA(P＜0.05)。研究结果表明，HPV E6/E7 mRNA对于诊断LSIL以及HSIL，具有更大的优势。

3 讨论

宫颈癌作为女性常见恶性肿瘤之一，其发病率仅次于乳腺癌[4]。目前临床普遍认为高危型HPV的持续感染是发展成宫颈癌的重要原因，故对高危型HPV进行早期诊断具有重要的临床意义。既往，临床对于宫颈癌的诊断常采用HPV E6/E7 mRNA以及HPV DNA 两大方法，但是临床对于上述两法的选择并不统一。因此，为进一步提高HPV E6/E7 mRNA以及HPV DNA的诊断效果，笔者对上述两法的临床诊断价值进行了系统评估。

研究结果表明，较之于HPV DNA而言，HPV E6/E7 mRNA具有更高的诊断价值(表1，表2)。HPV E6/E7 mRNA是一个新的HPV检测指标，是宫颈宿主细胞感染 HPV的最直接证据，相比LCT的细胞学检测，能够更早发现致病因素，早发现、早治疗，减少发病率[5]。事实上，曾有研究明确表示，患者宫颈组织中HPV E6/E7表现出较强的癌基因活性，HPV E6/E7 mRNA表达异常往往与宫颈细胞癌变相关[6]。在本研究中，对于断LSIL以及HSIL组而言，HPV E6/E7 mRNA具有较大的诊断优势，该现象与之前研究结果一致。

综上，本研究系统证实了HPV E6/E7 mRNA对于宫颈癌变诊断具有较大的优势，值得在临床大力推广。