刍议药包材的异常毒性检查和实验动物福利

高保栓 康 莉 刁立琴 付 钊

(河北省医疗器械与药品包装材料检验研究院,石家庄 050061)

直接接触药品的包装材料和容器(简称药包材)按材质不同可分为塑料类、金属类、玻璃类、陶瓷类、橡胶类和其他类(如纸、干燥剂)等,也包括由两种或两种以上的材料复合或组合而成的复合膜和铝塑组合盖等[1]。药包材作为药品的一部分,其本身的质量、安全性等对药品质量、临床使用安全性有着十分重要的影响。国家药包材标准包括药包材标准(YBB标准)和产品注册标准(企业标准)。目前,塑料类、金属类及复合膜等国家药包材标准均规定了异常毒性检查[2]。但是,发现在2015版YBB标准中异常毒性试验方法有的增加了空白对照,有的未增加空白对照;甚至存在着许多企业注册标准与相关的YBB标准不一致,国内各省的同类药包材注册标准不统一现象。显然,增加空白对照试验就意味着增加实验动物的使用数量。如果没有科学依据,就违背了实验动物福利的“3R”(减少、替代、优化)基本原则[3-4]。因此,我们对于2015版YBB标准中异常毒性试验设立空白对照的意义和必要性进行了探讨,对于保障实验动物福利及有效实施具有一定的积极意义。

1 对异常毒性的认识

1.1 异常毒性概念[1]

异常毒性有别于药物本身所具有的毒性特征,是指由生产过程中引入或其他原因所致的毒性。

异常毒性检查法系给予动物一定剂量的供试品溶液,在规定时间内观察动物出现的异常反应或死亡情况,检查供试品中是否污染外源性毒性物质以及是否存在意外的不安全因素。

1.2 异常毒性检查法

试验用动物:质量合格的动物,在试验前及试验的观察期内均应按正常饲养条件饲养。做过本试验的动物不得重复使用。

1.2.1 非生物制品试验:《中华人民共和国药典》[1]规定:除另有规定外,取(中国药典未作规定,一般使用清洁级或SPF级动物试验)小鼠5只,体质量18～22 g,每只小鼠分别(中国药典未作规定,一般采用尾静脉注射)静脉给予供试品溶液0.5 mL。 应在4～5 s内匀速注射完毕。除另有规定外,全部小鼠在给药后48 h内不得有死亡;如有死亡时,应另取体质量19～21 g的小鼠10只复试,全部小鼠在48 h内不得有死亡。试验未规定设立动物空白对照。

1.2.2 生物制品试验:《中华人民共和国药典》[1]规定:除另有规定外,异常毒性试验应包括小鼠试验和豚鼠试验,试验中应设同批动物空白对照。按照规定的给药途径缓慢注入动物体内。小鼠试验和豚鼠试验均采用腹腔注射给药法进行,要求在观察期内,动物应全部健存,且无异常反应,到期时每只动物体质量应增加,判定供试品符合规定。

1.3 急性全身毒性和异常毒性的区别

1.3.1 概念:药包材的急性全身毒性试验系将一定剂量的供试品溶液由静脉注入小鼠体内,在规定时间内观察小鼠有无毒性反应和死亡情况,以判定供试品是否符合规定[5]。

1.3.2 急性全身毒性检查法[5]:供试用(YBB00042003-2015未作规定,一般使用清洁级或SPF级动物试验)小鼠,体质量17～23 g。将小鼠随机分为试验组和对照组,每组5只,放入固定器内,自尾静脉分别注入供试品溶液和空白对照液,注射速度为0.1 m L/s,注射剂量为50 m L/kg体质量。注射完毕后,观察小鼠即时反应,试验后待观察小鼠喂养方法同试验前,并于 4、24、48、72 h观察和记录试验组和对照组动物的一般状态、毒性表现和死亡动物数,在72 h时称量动物体质量。整个观察期内,试验组动物的反应不大于对照组动物,则判定供试品合格。

1.3.3 两种毒性试验法的区别:药包材的急性全身毒性和异常毒性的区别见表1。

表1 药包材两种毒性试验法的区别Table 1 Difference of two methods for toxicity test of pharmaceutical packaging materials

2 新旧药包材标准在异常毒性检查方面的变化

将新版国家药包材标准(即2015版YBB标准)与原版YBB标准(国家食品药品监督管L局2002～2006年陆续颁布的《直接接触药品的包装材料和容器标准汇编》,共6辑)进行比较,发现部分品种的异常毒性试验增加了空白对照,详见表2～表5。

表2 塑料瓶类药包材新旧标准的变化比较Table 2 Comparison of the changes of new and old standards for plastic bottls for pharmaceutical packaging

表3 金属类药包材新旧标准的变化比较Table 3 Comparison of the changes of new and old standards for metals for pharmaceutical packaging

表4 复合膜、硬片类药包材新旧标准的变化比较Table 4 Comparison of the new and old standards for laminated films and sheets for pharmaceutical packaging

表5 铝塑组合盖类药包材新旧标准的变化比较Table 5 Comparison of the changes of the new and old standards for aluminum-plastics combination caps for pharmaceutical packaging

3 讨论

3.1 药包材作为药品的一部分[2],应属于非生物制品。《中华人民共和国药典》2015版四部异常毒性检查法中非生物制品试验并没有规定设立空白对照。

3.2 由表2～表5可以看出,2015版YBB标准除了滴眼剂瓶和聚乙烯/铝/聚乙烯复合药用软膏管原标准就有空白对照外,其他塑料瓶和复合膜类均新增加了空白对照,而药用铝箔和硬片类等却没有增加空白对照,甚至药用低密度聚乙烯膜、袋未增加空白对照,与同材质的低密度聚乙烯药用滴眼剂瓶原标准就有空白对照也不一致。

3.3 根据异常毒性的毒性特征,检查的是药包材样品是否污染外源性毒性物质以及是否存在意外的不安全因素,关注的是否引起小鼠死亡,这是不同于急性全身毒性试验的关键点。况且,众所周知氯化钠注射液是临床输液常用的生L盐水,一般来说,不可能引起动物死亡。因此,增加以生L盐水为动物空白对照必要性值得商榷。

近年来,国内外实验动物福利的发展在很多领域令人可喜。早在1959年,英国动物学家威廉·拉塞尔和微生物学家雷克斯·伯奇就在《人道主义实验技术原L》中提出L念:科学、合L、人道地使用实验动物及鉴别和减少“非人道”的动物实验。目前,已成为国际社会普遍认可的实验动物福利“3R”基本原则,即替代(replacement)、减少(reduction)和优化(refinement)原则。为了规范实验动物工作,保障实验动物福利,据了解我国的《实验动物福利法》现正在加紧制订中。倡导“减少”“替代”“优化”的“3R”原则,更要求科学、合L、人道地使用实验动物。作为从事实验动物工作的人员,如何最大限度地保障实验动物的福利,值得大家思考和关注!

针对药包材的异常毒性检查,如果不能科学、合L的安排试验,随意增加动物空白对照,直接增加了实验动物小鼠的使用数量,显然不符合“白对照原则。异常毒性试验中没有必要地设立动物空白对照,将使成千上万的小鼠白白为人类做出牺牲和贡献,实验动物作为人类的替难者,这是不人道、不公平的。因此,建议在相关的药包材标准修订、更新时考虑舍去异常毒性试验的空白对照,将对有效地保障和实施实验动物福利产生积极的影响。