全自动酶免仪和免疫发光仪检测乙肝两对半定量的研究进展

周家顺

（广西钦州市灵山县中医医院 检验科，广西 灵山 535400）

0 引言

乙肝两对半[1]亦称乙肝五项，分别为：①乙肝表面抗原（HBsAg）、②乙肝表面抗体（抗-HBs）、③乙肝e抗原（HBeAg）、④乙肝e抗体（抗-HBe）、⑤乙肝核心抗体（抗-HBc）。乙型肝炎是常见传染病之一，我国约有9300万人携带乙肝病毒[2]，准确的检测乙肝两对半，对于乙型肝炎患者有着重要的意义。全自动酶免仪[3]采用时间分辨免疫荧光技术检测乙肝两对半，具有灵敏度高、特异性强、结果稳定等优点。本文对全自动酶免仪和免疫发光仪检测乙肝两对半定量[4]的研究进展综述如下。

1 乙肝两对半检测的历史

20世纪50年代末，Baruch Blumber经过几年的努力，他终于确定了在澳大利亚土著人血液中发现的乙肝病毒表面抗原（HbsAg）即澳抗。Baruch Blumberg博士和Millman Irving博士一起，发现了乙型肝炎检测方法。以后又发现了抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc，上述五项统称乙肝两对半。检测两对半，历经定性、半定量和定量方法，目前应用较多的是定量检测。时间分辨免疫荧光法定量[5]检测乙肝两对半，具有灵敏度高、特异性强、结果稳定等优点，更好反映乙肝病毒在体内的变化。

2 全自动酶免仪器定量检测乙肝两对半的原理

全自动酶免仪检测原理[6]：使用稀土离子（Eu3+）作为示踪物，通过Eu3+与具有双功能结构的螯合剂以及抗原形成稀土离子-螯合剂-抗原螯合物。当标记抗原、待测抗原共同竞争抗体，形成免疫复合物，将结合部分与游离部分分开后，时间分辨免疫荧光仪可以检测复合物中的荧光强度，从而确定待测抗原的量。

3 免疫发光仪检测原理

以酶标记物质进行免疫反应[7]，免疫反应物再作用于发光底物发光，用发光仪测定抗原或抗体含量。

4 全自动酶免仪检测乙肝两对半参考范围

4.1 HBsAg检 测[8]＜0.50 ng/mL，HBsAg含 量 正 常；HBsAg≥0.50 ng/mL，HBsAg含量高于正常，人体被感染乙肝。

4.2 抗-HBs＜10 mIU/mL，抗-HBs含量正常；抗-HBs≥10 mIU/m，表明机体有抗体，不被传染。

4.3 HBeAg＜0.50 DRU/mL，HBeAg含 量 正 常；HBeAg≥0.50 DRU/mL，预示乙肝有传染性，含量越多，HBeAg传染性越强。

4.4 抗-HBe＜1.50 DRU/mL，HBeAb含量正常；抗-HBe≥1.50 DRU/mL，抗-HBe含量异常，表明乙肝传染性低。

4.5 抗-HBc定量[9]＜ 0.10 DRUU/mL，抗-HBc含量正常；抗-HBc≥0.1 DRU/mL，表示机体感染过乙肝病毒。

5 免疫发光仪检测乙肝两对半参考范围

5.1 当免疫发光仪测定HBsAg＜0.50 ng/mL，HBsAg含量正常；HBsAg≥0.50 ng/mL，HBsAg含量异常。

5.2 抗-HBs＜10 mIU/mL，HBsAb含量正常；抗-HBs≥10 mIU/mL，表面抗体含量高于正常。

5.3 HBeAg＜0.50 DRU/mL，HBeAg含量正常；HBeAg≥0.50 DRU/mL，HBeAg含量异常。

5.4 抗-HBe＜1.50 DRU/mL，抗-HBe含量正常；抗-HBe≥1.50 DRU/mL，抗-HBe含量异常。

5.5 抗-HBc＜ 0.10 DRUU/mL，抗-HBc含量正常；抗-HBc≥0.10 DRUU/mL，抗-HBc含量异常。

6 检测两对半实验室方法

6.1 检测两对半实验室方法有三种，一是定性检测，另外两种是半定量和定量检测。

6.2 两对半常规定性检测。国产乙肝金标法和酶联免疫吸附试验，检测的结果只有阴性和阳性，但是结果反映不了体内乙肝病毒的含量，实验室主要用于筛查。

6.3 半定量检测。结果是标本检测值与临界值的比值，半定量的单位是：S/CO，S代表检测光密度值（OD值），CO代表检测的临界值，若S/CO≥1判为阳性，＜1为阴性，半定量检测的灵敏度和准确性比定性检测好，但结果不准确，只能大致检测抗原、抗体在血清中的浓度。

6.4 定量检测。还可以准确检测出抗原、抗体的含量。全自动酶免仪采用时间分辨免疫荧光法定量检测乙肝两对半，该仪器具有灵敏度高、特异性强、结果稳定等优点，是目前应用较多的仪器。

7 全自动酶免仪和免疫发光仪检测乙肝两对半定量的研究

7.1 免疫发光仪发光过程短，本底较高。仪器故障率较高，试剂稳定性差，试剂价格高等缺点。

7.2 全自动酶免仪专业使用一次性针，零污染，保证实验结果安全性及准确性；每个微板位可独立控制孵育，振荡，提高了实验室的规范化程度，实验结果更准确。

7.3 用全自动酶免仪和免疫发光仪对160例临床标本同时检测，按照规程操作，参加室内室间质评均符合要求[10]。全自动酶免仪的应用实现了自动化检测，具有灵敏度高，结果稳定，零污染，试剂稳定等优点，是检测两对半被公认是较好的仪器。

8 全自动酶免仪检测乙肝两对半定量的临床意义

8.1 乙肝两对半定量分析的临床意义[11]

8.1.1 HBsAg：它的出现是感染乙肝病毒的标志。在感染乙肝病毒2-6个月，在血清中检测到超出正常含量，表明是急性乙肝、慢性乙肝患者。

8.1.2 抗-HBs：是对乙肝病毒保护性抗体。高于正常值表明既往感染过乙肝病毒，但已经排除病毒，产生了保护性抗体[12]。

8.1.3 HBeAg：乙肝患者体内可查出e抗原，超出正常数值说明乙肝病毒在体内复制。

8.1.4 抗-HBe：高于正常数值表明患者的传染性降低，病毒复制降低或缓解。

8.1.5 抗-HBc：它的含量高于正常数值，表明乙肝病毒正在复制[16]。

8.2 全自动酶免仪和免疫发光仪检测乙肝两对半定量课题有关高于正常值的类型及意义

8.2.1 HBsAg、抗-HBc表示急性感染；或者是慢性携带者，病毒复制力低下，传染弱；或者处于恢复期。

8.2.2 HBsAg、HBeAg、抗-HBc俗称大三阳[14]，表示着急性感染；或者是慢性携带者，反映体内病毒数量多，病毒复制活跃，传染性强。

8.2.3 HBsAg、抗-HBe、抗-HBc俗称小三阳[15]，过去认为小三阳患者的传染已显著降低。但是临床上肝功能异常，同时伴有乙肝病毒含量高于正常，表明乙肝小三阳不一定预后就好，这是乙肝病毒变异。

8.2.4 HBsAg、抗-HBs：①亚临床型HBV感染早期；②不同亚型HBV二次感染。

8.2.5 抗-HBs：健康人群接种乙肝疫苗后产生保护性抗体；有些人群也会在接触乙肝病毒后自动产生乙肝病毒表面抗体，乙肝病毒表面抗体是对乙肝病毒免疫和保护性抗体。

8.2.6 抗-HBs、抗-HBe：乙肝病毒感染后已恢复。

8.2.7 抗-HBs、抗-HBc：感染过乙肝病毒，现已完全恢复，保护性的抗体已经出现，对乙肝病毒已具有抵抗力。

8.2.8 抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc机体处于恢复期，保护性的抗体已经存在，但e抗体不能长期的存在，e抗体不久也会消失，若e抗体半年后不消失，说明体内病毒已发生病变，需要给予重视，加强治疗。

8.2.9 抗-HBs、HBeAg、抗-HBc：非典型性或亚临床型乙肝病毒感染。

8.2.10 抗-HBe、抗-HBc：既往感染乙肝病毒，现处于恢复期。HBsAg已经消失，但保护性的抗体还没有出现，对HBv没有抵抗力。

8.2.11 抗-HBc：可以作为急性感染的窗口期，它是乙肝病毒核心抗原的总抗体，含量高于正常值时表示乙肝病毒既往感染或现在感染。

综上所述，两种仪器在检测准确性等方面均较好，而全自动酶免仪检测具有灵敏度高、特异性强、结果稳定、零污染、试剂稳定等优点，全自动酶免仪定量检测乙肝两对半显示了良好的应用前景，值得基层医院推广应用。