青蒿琥酯治疗肺孢子菌肺炎的实验研究①

黄 笛，吴健林，周冬生

(桂林医学院第二附属医院感染性疾病科，广西 桂林 541199)

近年来，伴随着HIV 感染者不断增加，抗肿瘤、放化疗以及器官移植的广泛开展以及其他原因所致先天或后天性免疫机能缺陷者的增多，肺孢子菌肺炎(Pneumocystis pneumonia，PCP)的发病率呈明显上升趋势[1]。PCP的临床病症进展迅速，若未能及时治疗，病死率几乎达100%。目前，尚无一种抗PCP 的高效低毒药物治疗方案。即使及时应用复方磺胺甲恶唑、糖皮质激素等治疗，其病死率亦超过30%，而且存在着一些问题，如药物不良反应严重、抗药性增加、治疗后易复发或再感染等[2]。因此，研发更为有效的抗PCP或预防PCP药物显得尤为重要。青蒿琥酯有多方面的药理作用，具有多靶点或广谱化疗的特色。笔者探讨青蒿琥酯治疗大鼠卡氏肺孢子菌肺炎模型，通过病原学及病理学改变观察其疗效，为卡氏肺孢子菌肺炎的治疗提供的依据。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

无特殊病原级雌性SD大鼠40只，体质量(140±25)g，购自桂林医学院动物实验中心，分笼饲养在湿度为40%、温度为28 ℃左右的动物实验室内，自由进食、进水。PC包囊悬液购自亿源医疗有限公司，槲皮素购自上海佳和生物科技有限公司，地塞米松磷酸钠注射液和盐酸四环素购自西南制药厂。

1.2 方法

SD大鼠分4组，每组10只：A为免疫功能正常大鼠组；B为PC刺激免疫功能正常大鼠组；C为PCP模型组；D为青蒿琥酯治疗组。C、D组2次/周，共6周，每次每只皮下注射地塞米松2.5 mg诱发建立肺孢子菌肺炎的动物模型，A、B注射同体积的生理盐水，B、C、D组通过大鼠鼻腔滴入1×104CFU/ml 的液氮冻存复苏的PC包囊悬液0.1 ml，D组加青蒿琥酯60 mg·kg-1·d-1进行干预。所有大鼠的饮水中加入1 g/L盐酸四环素预防继发性细菌性感染。

1.3 观察指标

1.3.1 肺组织病理 第8周末处死大鼠，先取大鼠肺组织行肺组织活检，明确PC包囊的存在，再经10%甲醛溶液固定24 h后，常规脱水、石蜡包埋，切片厚度约4 μm。切片常规HE染色，脱水、透明、封片。

1.3.2 GMS 染色检测PC包囊 取实验鼠肺组织做肺叶横断印片，环6亚甲基4胺银(GMS)染色，每个印片随机计数10 个油镜视野的PC包囊数，判断PC感染程度。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 大鼠肺组织病理变化

在观察结束后处死大鼠，取大鼠肺组织制作大鼠肺组织冰冻切片行HE染色观察肺组织的病理变化。A组大鼠肺组织均正常，肺泡空隙明显，肺泡间质未见充血、增宽，肺泡内无渗出和炎性细胞浸润，见图1a。B组大鼠肺组织基本正常，肺泡空隙明显，肺泡间质少许充血、增宽，肺泡内少许渗出和炎性细胞浸润，见图1b。C组大鼠均为重度间质性肺炎，肉眼观肺部大量充血，质地较实，大量炎性细胞浸润，见图1c。D组大鼠肺泡壁充血较C组明显减少，肺泡中大量的浆液性渗出物已基本上被吸收，肺泡间质中炎性细胞减少，见图1d。

图1a

2.2 大鼠的肺孢子菌感染程度比较

A组内未发现PC包囊，见图2a。B组偶见少许PC包囊，印片包囊均数(1.3±1.1)，见图2b。C组大鼠的肺组织印片中PC感染率非常高，印片包囊均数(8.6±2.1)，见图2c。D组感染卡氏肺孢子菌的程度较C组低，但较B组高，印片包囊均数(6.4±1.7)，见图2d。C、D组包囊数高于B 组，差异有统计学意义(P<0.05)。D组包囊数低于C组(P<0.05)。

图2a

3 讨论

肺孢子菌肺炎是肺孢子菌(Pneumocystis，PC)引起的急性肺炎，是一种发生于免疫功能低下患者的严重肺部机会性感染。其在正常人体可以共生或以正常菌群的形式定植于人的呼吸道，在不同人群中肺孢子菌定植率也不同，在健康成年人定植率为0～20%，HIV患者中定植率为31%～68%[3]。当人体免疫机能受损或免疫功能低下时引起致命的肺孢子菌肺炎。笔者的研究中，正常对照组(A组)和PC刺激对照组(B组)大鼠不管是在肺部损伤程度，还是肺组织印片中PC感染率都非常低，说明免疫功能正常的大鼠能有效抵御肺孢子菌的侵袭，再次证实了PC为一种致病性很弱的机会感染性真菌。

评价疗效最直接有效的指标是检测肺内的肺孢子菌负荷，经 GMS 染色观察的肺印片中肺孢子菌包囊数是经典有效的方法[4]。本实验在行HE 染色观察肺组织的病理变化前，先取各组大鼠肺组织行肺组织活检，结果显示模型组大鼠肺组织中可见大量肺孢子菌的包囊或滋养体，证实大鼠肺组织损伤由PC感染引起，病理学观察显示模型组肺实变明显，炎性细胞及炎性渗出物大量聚集于肺泡腔及肺泡间质内；青蒿琥酯治疗组肺印片包囊数明显减少，肺炎性损伤明显改善，说明青蒿琥酯不仅有抗肺孢子菌作用，还大大减轻了卡氏肺孢子菌所引起的肺部结构损伤。

青蒿琥酯是从菊科艾属植物黄花蒿中分离出的一种有抗疟作用的成分，青蒿琥酯作为临床上有效的抗疟新药，自20世纪80年代研制成功以来，广大学者对青蒿琥酯抗疟之外的药理作用及作用机制不断地扩大和深入，发现青蒿琥酯有多方面的药理作用，具有多靶点或广谱化疗的特色，具有抗疟、抗肿瘤、抗弓形虫、抗孕、平喘、对抗内毒素血症等作用[5-8]。研究还表明青蒿琥酯有抗肺孢子菌的作用，其通过破坏PC膜系结构，引起PC包囊及滋养体胞浆内出现空泡、线粒体肿胀、核膜破裂、内质网肿胀、囊内小体溶解破坏等超微结构的改变[9]。

本研究显示青蒿琥酯不仅有抗肺孢子菌作用，还减轻了卡氏肺孢子菌所引起的肺部结构损伤。而且，青蒿琥酯具有相对安全的药物特性[10]，这将为肺孢子菌肺炎的治疗提供一条新的途径和选择。