黄精地上部位化学成分及其胰脂肪酶抑制活性研究

王亚凤，张祖湘，何瑞杰，阳丙媛，王 磊，黄永林

广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所 广西植物功能物质研究与利用重点实验室，桂林 541006

黄精是百合科多年生草本植物，我国广大地区均有分布，目前已发现该属植物40余种，我国约有31种，种质资源丰富[1]。黄精为我国传统补益类中药，药理活性广泛，具有降血糖、降血脂、抗炎、抗肿瘤、调节免疫等作用[2]，具有很好的开发与应用价值。黄精属植物的主要化学成分有糖类、皂苷、黄酮类、生物碱、木脂素等[3]。黄精多糖是中药黄精的主要药理活性成分，现代临床常用于治疗糖尿病、动脉硬化等疾病，中药黄精的另一类主要药理活性物质是甾体皂苷，可改善慢性应激所致的抑郁症[4,5]。黄精化学成分多样，药理活性广泛[6,7]，但是作为多年生草本植物，关于黄精的地上部位化学成分的研究较少，地上部位并未得到有效利用。作为植株重要组成的地上部位的化学成分具有很好的研究价值，同时作为广西具有较大开发潜能的药用植物资源，全面系统地推进黄精的物质基础研究，将为黄精的综合开发利用提供科学依据和方法指导，具有十分重要的理论意义和经济价值。胰脂肪酶是人体内脂肪水解过程中的重要酶，抑制胰脂肪酶的活性可以降低人体内对脂肪的吸收和水解，进而达到减重的作用[19,20]。已发现多种天然化合物具有胰脂肪酶抑制活性，例如，黄酮类，酚酸类等，但是目前关于黄精中碳苷黄酮类化合物胰脂肪酶的抑制活性还未见报道[19,20]。本研究对黄精地上部位80%乙醇提取物中分离鉴定的多个化合物，进行了猪胰脂肪酶抑制剂活性筛选，以期找到有较好胰脂肪酶抑制活性的单体化合物。

1 材料与方法

1.1 仪器与材料

Brucker Avance 500 MHz超导核磁共振波谱仪(瑞典Bruck公司)；LCMS-IT-TOF (日本Shimadzu公司)；N-1100旋转蒸发仪(东京理化公司)；CF810C冷却水循环(日本Yamato公司)；半制备液相色谱仪(北京赛谱锐思)；WFH-203紫外分析仪(上海精科实业有限公司)；酶标仪(瑞士TECAN)；GF254 薄层色谱硅胶(德国Merck公司)；Sephadex LH-20(25～100 μm;GE Healthcare Bio-Science AB,Uppsala,Sweden)；Toyopearl HW-40F(TOSOH Co.,Tokyo,Japan)；MCI gel CHP 20P(75～150 μm;Mitsubishi Chemical,Tokyo,Japan)；Diaion HP20ss 75-150 μm;Mitsubishi Chemical,Tokyo,Japan)；Toyopearl Butyl-650C(TOSOH Co.,Tokyo,Japan)。奥利司他(美国MCE)；4-甲基伞形酮油酸酯(美国Sigma)；猪胰脂肪酶(美国Sigma)；磷酸盐缓冲盐水(北京Solarbio)；实验所用试剂甲醇、乙醇等均为分析纯(AR)。

样品于2018年9月采集于广西桂林，经唐辉研究员鉴定为百合科黄精属植物黄精(Polygonatumsibiricum)，凭证样品存放于广西植物功能物质研究与利用重点实验室。

1.2 实验方法

1.2.1 提取分离

黄精新鲜叶子1.91 kg，阴干，切碎后用70%乙醇在室温下浸泡提取2次，每次7天，过滤，合并滤液并减压浓缩回收乙醇，得到水溶液，水溶液经Sephadex LH-20凝胶柱层析(9.5 cm × 50 cm，25～100 μm)，甲醇-水(0%→100% MeOH，20%为一个梯度，每一梯度2 L及60%的丙酮2 L)进行梯度洗脱，得到8个部分(Fr.1～8)。其中Fr.5(15.8 g)经HP20ss柱层析(0%→100% MeOH，10%为一个梯度)得到10个流份(Fr5.1～10)；Fr51(1.35 g)经Sephadex LH-20，HP 20ss，Toyopearl Butyl-650C(0%→100% MeOH，10%为一个梯度)进行梯度洗脱得到化合物4(118 mg)、化合物5(70 mg)、化合物6(58 mg)和化合物10(19 mg)。Fr.55(1.52 g)经Sephadex LH-20，Toyopearl Butyl-650C柱层析(0→100% MeOH，10%为一个梯度)进行梯度洗脱，ODS C18柱层析等度洗脱(30% MeOH)得到化合物1(21 mg)、3(13 mg)、9(11 mg)。Fr.1(45.0 g)经HP20ss柱层析(4 cm × 40 cm，75～150 μm)甲醇-水(0%→100% MeOH，10%为一个梯度，每一梯度0.5 L)进行梯度洗脱，过滤掉黄精多糖，再经Sephadex LH-20，MCI gel CHP 20P得到化合物2(42 mg)、9(0.72 g)和11(42 mg)。Fr.2经HP20ss，Sephadex LH-20(0%→100% MeOH，10%为一个梯度)进行梯度洗脱得到化合物7(18 mg)。Fr.3经HP20ss(0%→100% MeOH,10%为一个梯度)进行梯度洗脱得到化合物8(0.98 g)。Fr.6(7.02 g)经HP20ss、Toyopearl HW-40F、ODS C18(0%→100% MeOH，10%为一个梯度)进行梯度洗脱得到化合物13(15 mg)。Fr.7(6.34 g)经MCI gel CHP 20P、ODS C18(0%→100% MeOH，10%为一个梯度)进行梯度洗脱得到化合物12(13 mg)、14(9 mg)。

1.2.2 抑酶活性筛选

采用猪胰脂肪酶抑制剂活性筛选模型对化合物2、3、6、7、8、10、11、13进行活性测试，实验方法参照相关文献[19,20]，以奥利司他(orlistat)为阳性对照，以4-甲级伞形酮油酸酯(4-MUO)为底物。将胰脂肪酶溶解于PBS缓冲液配置成1 mg/mL的溶液，离心取上清液备用。准确称取1 mmol 4-MUO溶解于10 mL PBS缓冲液配置成0.1 mmol/mL溶液备用。准确称取10 mmol样品溶解于PBS缓冲液并定容至1 mL备用。取25 μL不同浓度的样品与25 μL胰脂肪酶溶液孵育五 min后再加入50 μL 4-MUO底物，反应20 min后加入100μL 0.1 mol/mL柠檬酸钠溶液终止反应，在320 nm激发波长和450 nm发射波长下测量吸光度，抑制率的计算公式为：胰脂肪酶抑制率=[1-(A样品-A样品对照)/(A空白-A空白对照)]×100%，式中，A样品为加入样品和活性酶反应后的吸光值；A样品对照为加入样品和失活酶反应后的吸光值；A空白为加入活性酶和PBS反应后的吸光值；A空白对照为加入失活酶和PBS反应后的吸光值，所有反应组中均有4-MUO。

2 结果与讨论

2.1 结构鉴定

化合物1白色无晶形粉末;HR-ESI-MS：m/z193.048 5 [M-H]-，相对分子质量为194.057 9，分子式为C10H10O4。1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.61(1H，d，J=15.9 Hz，H-7)， 7.19(1H，d，J=2.0 Hz，H-2)，7.08(1H，dd，J=8.2，2.0 Hz，H-6)，6.83(1H，dd，J=8.4，2.9 Hz，H-5)，6.33(1H，d，J=15.9 Hz，H-8)，3.91(3H，s，H-OCH3);13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：169.6(C-9)，149.1(C-4)，148.0(C-7)，145.5(C-3)，126.4(C-1)，122.6(C-6)，115.1(C-5)，114.6(C-8)，110.4(C-2)，55.1(C-OCH3)。以上波谱数据与文献[8]报道的一致，故鉴定化合物1为咖啡酸甲酯。

化合物2白色无晶形粉末;HR-ESI-MS：m/z353.088 8 [M-H]-，相对分子质量为354.095 1，分子式为C16H18O9。1H NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：7.42(1H，d，J=15.9 Hz，H-7′)，7.05(1H，d，J=2.1 Hz，H-2′)，6.98(1H，dd，J=8.2，2.1 Hz，H-6′)，6.77(1H，d，J=8.2 Hz，H-5′)，6.17(1H，d，J=15.9 Hz，H-8′)，5.08(1H，td，J=7.1，4.1 Hz，H-3)，3.93(1H，dt，J=7.1，3.4 Hz，H-5)，3.57(1H，dt，J=7.5，3.7 Hz，H-4)，2.06～1.78(4H，m，H-2，6);13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：175.5(C-7)，166.3(C-9′)，148.7(C-4′)，146.0(C-7′)，145.4(C-3′)，126.1(C-1′)，121.9(C-6′)，116.2(C-5′)，115.1(C-8′)，114.8(C-2′)，74.1(C-1)，71.3(C-4)，71.0(C-5)，68.8(C-3)，37.7(C-6)，36.9(C-2)。以上波谱数据与文献[9]报道的一致，故鉴定化合物2为绿原酸。

化合物3黄色晶形粉末;HR-ESI-MS：m/z433.103 8 [M+H]+，相对分子质量为432.105 6，分子式为C21H20O10。1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.68(2H，d，J=7.9 Hz，H-2′，6′)，6.86(2H，d，J=8.3 Hz，H-3′，5′)，6.43(1H，d，J=5.0 Hz，H-3)，6.38(1H，d，J=4.2 Hz，H-8)，4.90(1H，d，J=9.9 Hz，H-1″)，4.25(1H，t，J=9.0 Hz，H-4″)，3.94 (1H，dd，J=12.4，2.2 Hz，H-6″a)，3.80(1H，dd，J=12.2，5.4 Hz，H-6″b)，3.54(2H，dt，J=9.0，4.7 Hz，H-3″，5″)，3.48(1H，dp，J=7.7，2.4 Hz，H-2″);13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：182.5(C-4)，164.6(C-2)，163.4(C-7)，161.1(C-5)，157.2(C-9)，157.1(C-4′)，128.0(C-2′，6′)，121.6(C-1′)，115.7(C-3′，5′)，107.6(C-6)，103.7(C-10)，102.3(C-3)，94.1(C-8)，81.1(C-5″)，78.7(C-1″)，73.8(C-2″)，71.2(C-3″)，70.3(C-4″)，61.4(C-6″)。以上波谱数据与文献[10]报道的一致，故鉴定化合物3为异牡荆素。

化合物4黄色晶形粉末;HR-ESI-MS：m/z449.094 2 [M+H]+，相对分子质量为448.100 5，分子式为C21H20O11。1H NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：7.42(1H，dd，J=8.3，2.3 Hz，H-6′)，7.40(1H，d，J=2.3 Hz，H-2′)，6.90(1H，d，J=8.3 Hz，H-5′)，6.68(1H，s，H-3)，6.50(1H，s，H-8)，4.60(1H，d，J=9.8 Hz，H-1″)，4.06(1H，t，J=9.2 Hz，H-4″)，3.73～3.68(2H，m，H-3″，6″a)，3.42(1H，dd，J=11.9，6.1 Hz，H-6″b)，3.24～3.11(2H，m，H-2″，5″);13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：182.3(C-4)，164.2(C-2)，163.8(C-7)，161.1(C-5)，156.7(C-9)，150.2(C-4′)，146.2(C-3′)，121.9(C-1′)，119.4(C-6′)，116.5(C-5′)，113.7(C-2′)，109.3(C-6)，103.9(C-10)，103.3(C-3)，94.0(C-8)，82.0(C-5″)，79.4(C-1″)，73.5(C-2″)，71.0(C-3″)，70.7(C-4″)，61.9(C-6″)。以上波谱数据与文献[11]报道的一致，故鉴定化合物4为异荭草素。

化合物5黄色晶形粉末;HR-ESI-MS：m/z449.042 5 [M+H]+，相对分子质量为448.100 6，分子式为C21H20O11。1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：7.55(1H，dd，J=8.4，2.2 Hz，H-6′)，7.49(1H，s，H-2′)，6.89(1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，6.67(1H，s，H-3)，6.29(1H，s，H-6)，4.70(1H，d，J=9.8 Hz，H-1″)，3.88～3.78(2H，m，H-5″，6″a)，3.57(1H，dd，J=12.0，6.4 Hz，H-6″b)，3.40(1H，t，J=9.2 Hz，H-4″)，3.28(2H，t，J=8.8 Hz，H-3″，2″);13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：182.5(C-4)，164.6(C-2)，163.1(C-7)，160.9(C-5)，156.5(C-9)，150.1(C-4′)，146.3(C-3′)，122.5(C-1′)，119.9(C-6′)，116.2(C-5′)，114.5(C-2′)，105.0(C-10)，104.5(C-8)，102.9(C-3)，98.6(C-6)，82.4(C-5″)，79.2(C-1″)，73.9(C-2″)，71.3(C-3″)，71.2(C-4″)，62.1(C-6″)。以上波谱数据与文献[12]报道的一致，故鉴定化合物5为荭草素。

化合物6黄色无晶形粉末;HR-ESI-MS：m/z581.172 2 [M+H]+，相对分子质量为580.142 8，分子式为C26H28O15。1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.59(2H，d，J=7.6 Hz，H-2′，6′)，7.15(1H，d，J=8.3 Hz，H-5′)，6.78(1H，s，H-3)，6.74(1H，s，H-6)，4.90(2H，m，H-1″，1‴)，4.15(1H,dd，J=12.4，2.2 Hz，H-6″a)，4.01(1H，dd，J=12.5，5.5 Hz，H-6″b)，3.97～3.02(9H，m，糖上质子);13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：182.6(C-4)，164.8(C-2)，163.6(C-7)，160.5(C-5)，157.4(C-9)，149.5(C-4′)，145.4(C-3′)，122.1(C-1′)，119.2(C-6′)，115.6(C-5′)，112.9(C-2′)，107.8(C-6)，105.3(C-1‴)，103.7(C-10)，102.5(C-3)，93.6(C-8)，81.1(C-2″)，80.4(C-5″)，78.4(C-3″)，76.1(C-3‴)，74.1(C-2‴)，72.1(C-1″)，70.1(C-4″)，69.5(C-4‴)，65.4(C-5‴)，61.4(C-6″)。以上波谱数据与文献[13]报道的一致，故鉴定化合物6为荭草素 2″-O-木糖甙。

化合物7黄色无晶形固体;HR-ESI-MS：m/z595.162 7 [M+H]+，相对分子质量为594.168 4，分子式为C27H30O15。1H NMR(600 MHz，(CD3)2CO)δ：7.42(1H，d，J=2.2 Hz，H-2′)，7.39(1H，dd，J=8.4，2.3 Hz，H-6′)，6.95(1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，6.60(1H，s，H-3)，6.59(1H，s，H-8)，4.90(1H，d，J=9.9 Hz，H-1″)，4.44(1H，d，J=7.8 Hz，H-1‴)，3.85～3.08(12H，m，糖上质子);13C NMR(125 MHz，(CD3)2CO)δ：182.6(C-4)，164.6(C-2)，163.5(C-7)，159.7(C-5)，157.2(C-9)，149.5(C-4′)，145.5(C-3′)，122.3(C-1′)，119.4(C-6′)，115.9(C-5′)，113.3(C-2′)，107.8(C-6)，104.5(C-1‴)，103.9(C-10)，103.0(C-3)，94.5(C-8)，80.9(C-5″)，80.2(C-2″)，78.3(C-3″)，76.1(C-3‴)，75.9(C-5‴)，74.5(C-2‴)，72.0(C-4‴)，69.9(C-1″)，69.7(C-4″)，61.2(C-6″)，61.1(C-6‴)。以上波谱数据与文献[12]报道的一致，故鉴定化合物7为木犀草素6-C-β-D-吡喃半乳糖基(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物8黄色无晶形粉末;HR-ESI-MS：m/z611.257 7 [M+H]+，相对分子质量为610.153 4，分子式为C27H30O16。1H NMR(600 MHz，(CD3)2CO)δ：7.73(2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′)，6.89(2H，d，J=8.3 Hz，H-3′，5′)，6.56(1H，s，H-8)，6.53(1H，s，H-3)，4.92(1H，d，J=9.8 Hz，H-1″)，4.47(1H，d，J=7.9 Hz，H-1‴)，4.51～3.13 (12H，m，糖上质子);13C NMR(125 MHz，(CD3)2CO)δ：182.6(C-4)，164.5(C-2)，163.2(C-7)，160.9(C-5)，157.2(C-9)，157.1(C-4′)，128.4(C-2′，6′)，121.6(C-1′)，116.1(C-3′，5′)，107.7(C-6)，104.4(C-1‴)，104.0(C-10)，102.7(C-3)，94.6(C-8)，80.8(C-5″)，80.1(C-2″)，78.3(C-3″)，76.1(C-3‴)，75.9(C-5‴)，74.4(C-2‴)，72.0(C-4‴)，69.9(C-1″)，69.7(C-4″)，61.3(C-6″)，61.3(C-6‴)。以上波谱数据与文献[12]报道的一致，故鉴定化合物8为芹菜素6-C-β-D-吡喃半乳糖基(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物9黄色油状固体;C26H28O14，1H NMR(500 MHz，(CD3)2CO)δ：7.89～7.80 (2H，m，H-2′，6′)，6.96(2H，d，J=8.0 Hz，H-3′，5′)，6.62(1H，s，H-8)，6.58(1H，s，H-3)，4.88(1H，d，J=9.8 Hz，H-1″)，4.33(1H，s，H-1‴)，3.91～2.80(11H，m，糖上质子);13C NMR(125 MHz，(CD3)2CO)δ：182.5(C-4)，164.4(C-2)，164.0(C-7)，161.2(C-5)，157.3(C-9)，157.3(C-4′)，128.4(C-2′，6′)，121.7(C-1′)，116.1(C-3′，5′)，107.9(C-6)，105.5(C-1‴)，103.7(C-10)，102.7(C-3)，94.2(C-8)，80.9(C-5″)，80.7(C-2″)，78.4(C-3″)，76.0(C-3‴)，74.0(C-2‴)，72.1(C-1″)，69.9(C-4‴)，69.4(C-4″)，65.3(C-5‴)，61.2(C-6″)。以上波谱数据与文献[13]报道的一致，故鉴定化合物9为芹菜素-6-C-β-D-吡喃木糖基(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物10黄色胶状固体;HR-ESI-MS：m/z611.108 9 [M+H]+，相对分子质量为610.155 6，分子式为C27H30O16。1H NMR(500 MHz，(CD3)2CO)δ：7.43(1H，d，J=2.2 Hz，H-2′)，7.40(1H，dd，J=8.4，2.2 Hz，H-6′)，6.95(1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，6.61(1H，d，J=4.6 Hz，H-3)，4.89(1H，d，J=9.9 Hz，H-1‴)，4.42(1H，d，J=7.8 Hz，H-1″)，3.85～2.92(12H，m，糖上质子);13C NMR(125 MHz，(CD3)2CO)δ：182.6(C-4)，164.6(C-2)，163.3(C-7)，160.2(C-5)，157.2(C-9)，149.6(C-4′)，145.6(C-3′)，122.3(C-1′)，119.4(C-6′)，115.9(C-5′)，113.3(C-2′)，107.9(C-6)，104.5(C-3)，103.9(C-10)，102.9(C-8)，80.9(C-2″)，80.3(C-5″)，78.4(C-3″)，76.2(C-3‴)，75.9(C-5‴)，74.5(C-2‴)，72.0(C-1″)，72.0(C-1‴)，69.9(C-4″)，69.7(C-4‴)，61.2(C-6‴)，61.2(C-6″)。以上波谱数据与文献[14]报道的一致，故鉴定化合物10为荭草素-6-C-β-D-葡萄糖苷。

化合物11黄色无晶形粉末;HR-ESI-MS：m/z595.106 9 [M+H]+，相对分子质量为594.158 5，分子式为C27H30O15。1H NMR(600 MHz，(CD3)2CO)δ：7.80(2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′)，6.93(2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′)，6.58(1H，s，H-8)，6.57(1H，s，H-3)，4.90(1H，d，J=9.9 Hz，H-1″)，4.45(1H，d，J=7.9 Hz，H-1‴)，3.85-3.01(12H，m，糖上质子);13C NMR(125 MHz，(CD3)2CO)δ：182.6(C-4)，163.7(C-2)，163.7(C-7)，161.1(C-5)，157.2(C-9)，157.2(C-4′)，128.5(C-2′，6′)，121.7(C-1′)，116.1(C-3′，5′)，107.9(C-6)，104.5(C-3)，103.8(C-10)，102.8(C-8) 80.9(C-2″)，80.1(C-5″)，78.3(C-3″)，76.1(C-3‴)，75.9(C-5‴)，74.4(C-2‴)，72.0(C-1″)，72.0(C-1‴)，69.8(C-4″)，69.4(C-4‴)，61.2(C-6″)，61.2(C-6‴)。以上波谱数据与文献[13，14]报道的基本一致，故鉴定化合物11为异牡荆素8-C-β-D-葡萄糖苷。

化合物12黄色无晶形粉末;HR-ESI-MS：m/z299.062 0 [M-H]-，相对分子质量为300.063 3，分子式为C16H12O6。1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：7.57(1H，d，J=2.2 Hz，H-2′)，7.55(1H，s，H-6′)，6.94(1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，6.88(1H，s，H-3)，6.52(1H，d，J=1.8 Hz，H-8)，6.20(1H，d，J=1.4 Hz，H-6)，3.89(3H，s，H-OCH3);13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：182.3(C-4)，164.6(C-2)，164.2(C-7)，161.9(C-5)，157.8(C-9)，151.2(C-3′)，148.5(C-4′)，122.0(C-1′)，120.9(C-6′)，116.5(C-5′)，110.7(C-2′)，104.2(C-10)，103.7(C-3)，99.3(C-6)，94.5(C-8)，56.5(C-OCH3)。以上波谱数据与文献[15]报道的基本一致，故鉴定化合物12为金圣草黄素(chrysoeriol)。

化合物13黄色晶形粉末;HR-ESI-MS：m/z447.096 8 [M-H]-，相对分子质量为448.100 5，分子式为C21H20O11。1H NMR(500 MHz，(CD3)2CO)δ：7.44(1H，d，J=2.1 Hz，H-2′)，7.34(1H，dd，J=8.4，2.1 Hz，H-6′)，6.99(1H，d，J=8.3 Hz，H-5′)，6.46(1H，d，J=2.1 Hz，H-6)，6.25(1H，d，J=2.1 Hz，H-8)，5.39(1H，d，J=1.6 Hz，H-1″)，4.25(1H，dd，J=3.4，1.8 Hz，H-5″)，3.82～3.77(1H，m，H-2″)，3.40～3.35(2H，m，H-3″，4″)，0.87(3H，d，J=5.7 Hz，H-6″);13C NMR(125 MHz，(CD3)2CO)δ：178.3(C-4)，164.4(C-7)，161.6(C-5)，157.8(C-9)，157.1(C-2)，148.4(C-4′)，144.9(C-3′)，134.9(C-3)，121.7(C-6′)，121.6(C-1′)，116.0(C-5′)，115.4(C-2′)，104.6(C-10)，102.0(C-1″)，98.8(C-6)，93.8(C-8)，71.7(C-4″)，70.9(C-3″)，70.6(C-2″)，70.4(C-5″)，16.8(C-6″)。以上波谱数据与文献[16]报道的基本一致，故鉴定化合物13为槲皮素3-O-α-L-鼠李糖苷。

图1 化合物1～14的结构Fig.1 Structures of compounds 1-14

化合物14白色晶形粉末;C21H42O2，1H NMR(500 MHz，(CD3)2CO)δ：2.28(2H，t，J=7.4 Hz，H-2)，1.60(2H，q，J=7.2 Hz，H-3)，1.31(34H，s，H-4～H-20)，0.89(3H，t，J=6.8 Hz，H-21);13C NMR(125 MHz，(CD3)2CO)δ：173.9(C-1)，33.3(C-2)，31.8(C-19)，29.4(C-6～C-16)，29.3(C-17)，29.2(C-18)，29.1(C-5)，29.0(C-4)，24.8(C-3)，22.4(C-20)，13.7(C-21)。以上波谱数据与文献[17，18]报道的基本一致，故鉴定化合物14为正二十一烷酸。化合物1～14的结构如图1所示。

2.2 抑酶活性筛选结果

以上述标准方法平行测定三次取平均值，结果显示阳性药奥利司他的IC50=0.017 mM，共筛选八个化合物的胰脂肪酶抑制活性，显示较弱的抑制活性，其中化合物3的IC50=1.08 mM，其他化合物的IC50相差不大，结果如表1所示。

表1 不同化合物抑制胰脂肪酶活性的IC50值Table 1 IC50 values of different compoundsinhibiting pancreatic lipase activity

3 结论

从黄精地上部位共分离得到化合物14个，主要为酚酸和黄酮类化合物，化合物1、2为酚酸类化合物，化合物3～13为黄酮类化合物，黄酮类化合物以碳苷黄酮为主。化合物6～14为首次从该植物分离得到，目前还没有关于此化合物胰脂肪酶抑制活性的报道。筛选了分离得到含量较大纯度较高的化合物2、3、6、7、8、10、11、13的胰脂肪酶抑制活性，结果显示具有一定抑制活性，对胰脂肪酶的抑制率随着化合物浓度的增加而升高，当化合物浓度为5 mM时，抑制率均达到75%以上，其中化合物3的抑制率达到83.67%。目前已发现多种黄酮类、酚酸类化合物或者富含此类化合物的粗提物具有较强的胰脂肪酶抑制活性，但是对于其中碳苷黄酮类单体化合物的胰脂肪酶抑制活性报道较少。从体外活性实验研究结果可知，黄精地上部位提取物可能具有降脂作用，此类化合物对胰脂肪酶的抑制类型及活性位点需要进一步探究。

致谢：衷心感谢广西植物研究所黄永林研究员的悉心教导，感谢广西植物研究所何瑞杰博士和王磊博士的细心指导和数据解析，感谢桂林医学院张祖湘和广西植物研究所阳丙媛的帮助。