P16在宫颈癌及癌前病变脱落细胞中表达的临床意义研究 *

李美波 晁 远 宋安辉 黄志娴 叶健威

广东省惠州市第六人民医院 316200

宫颈癌是威胁女性健康的世界性问题，90%以上病例由人乳头瘤病毒(HPV)引起，长期持续高危型HPV感染会导致高级别鳞状上皮内瘤变(HSIL)，进而发展为宫颈癌[1]。P16是一种肿瘤抑制基因，直接参与肿瘤的形成与进展[2]。一过性的HPV感染不会影响细胞周期调控，但HPV持续性感染则会导致细胞的16蛋白地过表达，因此16蛋白可以作为宫颈癌前病变的HPV型别独立的生物标志物[3]。目前16蛋白已广泛应用于宫颈组织病理检查的鉴别诊断，但在细胞学中应用价值还未完全明确。因此，本课题探讨16免疫细胞化学染色在诊断宫颈癌前病变及宫颈癌的中的应用价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2019年5—10月同时在我科行宫颈脱落细胞P16免疫细胞化学染色及宫颈活检的108例患者的病理资料。患者年龄25～65岁，平均年龄(46.53±4.27)岁；已婚受试者81例(75.00%)，未婚受试者27例(25.00%)；已育受试者75例(69.44%)，未育受试者33例(30.56%)；疾病类型：宫颈癌4例，HSIL 38例，LSIL 34例，宫颈炎32例。

1.2 P16蛋白的免疫细胞化学检测及判读 P16免疫细胞化学染色由广州江元医疗科技有限公司提供的全自动免疫细胞化学染色系统完成，染色实验过程严格按照厂家的试剂、仪器说明书执行操作。结果的判读由2位高年资病理医师双盲复诊阅片，诊断结果不一致时需重新阅片分析至最终做出一致的诊断。

1.3 P16蛋白阳性切片的判读标准[4](1)P16阳性细胞判读：任意强度的胞核或胞核与胞浆染成棕黄色的鳞状细胞判读为阳性细胞；局限性胞浆染色或与背景一致的弱染色判读为阴性细胞。(2)细胞核改变的判读：0分=P16染色全阴性；1分=P16阳性细胞+不伴有上述核异常改变的；2分= P16 阳性细胞+只伴有1项上述核异常改变的；3分=P16阳性细胞+核质比增加(50%)+任意1项上述核异常改变；4分= P16 阳性细胞+所有细胞核浆比增加+大于等于2项上述核异常改变。P16染色阳性的切片判定：核评分≥2分。

1.4 病理结果的判读 以阴道镜活检后组织学结果为金标准。活检结果的判断：采用HE染色，由2名经验丰富的病理医师解读。

1.5 统计学方法 数据采用SPSS18.0软件系统处理分析，采用χ2检验比较不同组间P16免疫表达差异，分析P16免疫染色在宫颈细胞学病变中诊断价值。通过McNemar检验计算P16免疫染色诊断宫颈高级别及以上病变的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 四组不同宫颈病变的P16免疫细胞化学表达的阳性率 宫颈癌、HISL、LISL、宫颈炎组患者P16蛋白阳性率见表1，总体差异有统计学意义(P<0.05)；宫颈癌及HISL组P16蛋白阳性率显著高于宫颈炎组、LISL，差异有统计学意义(均P<0.01)。提示P16蛋白随着宫颈病变程度的加重，阳性率不断增加。

表1 P16免疫细胞化学染色的阳性分布情况

2.2 P16免疫细胞化学染色的在宫颈癌及HISL病变中表达情况 以组织病理诊断结果为金标准，P16 蛋白检测结果与组织病理诊断结果进行比较，P16免疫细胞化学染色在宫颈癌及HISL病变中表达的敏感度为95.24%(40/42)，特异度为80.30%(53/66)，阳性预测值为75.47%(40/53)，阴性预测值为96.36%(53/55)。提示P16蛋白细胞免疫具有对宫颈癌及HISL有较好的提示作用。如表2所示。

表2 P16免疫细胞化学染色的在宫颈癌及HISL病变中表达情况(n)

3 讨论

大量的研究表明宫颈癌的发生可通过对癌前病变的检查和处理得以有效控制。西方国家的经验显示，宫颈癌发生率在密切筛查的人群中明显下降。我国对于宫颈癌及其癌变的筛查，采用的筛查方法主要是传统细胞学，传统的细胞学特异度较高，然而敏感性较低，导致检出率低，漏诊率较高，而另一种筛查方式——HPV检查因费用昂贵而难以在基层医院广泛开展与普及。因此，有必要寻找一种适合我国国情的宫颈癌筛查方法，其敏感性和特异性都应高于我国当前广泛开展的宫颈癌主要筛查手段——液基细胞学，同时筛查费用低、操作简便，易于在各级医院开展，且能最大限度地筛查出宫颈病变。P16基因是一种直接参与细胞周期调控的抑癌基因，多项研究表明，P16蛋白在反应性宫颈病变或正常宫颈细胞中呈阴性或微量表达，而在宫颈上皮内病变中异常表达[5]。目前，已有大量研究证实P16免疫组织化学染色可显著提高宫颈组织学样本中HSIL及宫颈癌诊断的准确性，并能增加观察者之间的重复性，P16蛋白的免疫组织化学染色已广泛应用于临床实践，协助病理医师判断宫颈病变级别。然而，P16蛋白的临床应用目前仅限于组织学，在细胞涂片中表达及应用价值还未完全明确。

有部分研究开始应用P16免疫细胞化学染色来进行辅助检查。孙丽艳等[6]研究发现P16免疫细胞染色不仅可以作为宫颈肿瘤细胞学诊断的辅助手段，而且有助于区分HSIL和LSIL。庄粤冰等[7-8]研究认为P16免疫细胞化学染色检测显著提高了诊断宫颈癌的灵敏度和特异度，同时降低了假阳性率和假阴性率。本研究结果显示，在宫颈癌及其癌前病变患者的P16免疫细胞化学染色检查中，P16在宫颈癌及HSIL中有较高的阳性表达率，在LSIL及宫颈炎中阳性表达率较低，总体差异具有统计学意义，说明了P16表达在宫颈癌及其癌前病变中存在一定的差异，且通过对宫颈癌、HSIL、 LSIL、宫颈炎等P16表达的分析来看，疾病越严重阳性表达率越高。进一步分析P16免疫细胞化学染色在宫颈癌及HISL病变中表达的敏感度、特异度、阳性预测值及阴性预测值，分别为95.24%、 80.30%、75.47%、96.36%，表明了该检测方法对高级别及以上有着较高的敏感度和特异性，间接提示了P16可作为理想的诊断宫颈癌的标志物。

综上所述，在宫颈脱落细胞中，P16在宫颈癌及高级别鳞状上皮内病变中存在过度表达的现象，采用P16免疫细胞化学染色检测法加强对P16表达情况的检测，对宫颈癌的防治有着十分重要的意义。