潞党参中总黄酮的提取及含量测定

刘薇

（江西省九江市食品药品检验所 江西九江 332000）

1 前言

潞党参属于党参中的一种，山西长治是潞党参的主产地，潞党参在临床具有健脾补肺、补中益气等功效。在脾虚型小儿泄泻、贫血以及慢性胃炎等疾病的临床治疗中均可使用潞党参[1]。 从中医辨证角度分析，潞党参在常见的气血两虚症、脾肺气虚症等方面均有应用。现代医学指出潞党参中含有多种成分，如苷类、甾体类、酚酸类以及挥发性成分等，通过对潞党参不同成分的研究可为其临床应用提供依据[2]。黄酮是潞党参的有效成分之一，本文以芦丁作为标准品，运用分光光度法对潞党参中的总黄酮予以测定，根据其测定结果指导潞党参的实际应用。

2 材料与方法

2.1 仪器与试剂

仪器：电子天平（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）；紫外可见分光光度计（日本岛津公司）；超声波提取器（上海艺源超声设备有限公司）。

试剂：潞党参药材（来自山西省平顺县，2018 年秋季）；芦丁标准品（中国食品药品检定研究院提供）；甲醇、硝酸铝、亚硝酸钠、氢氧化钠（分析纯）；重蒸馏水。

2.2 方法

2.2.1 制备对照品溶液

设定温度为105℃，对标准品芦丁予以干燥处理，然后通过电子天平精确称取10 mg，准备好50 mL容量瓶，并将称量后的芦丁放置于容量瓶中，合理加入甲醇，使得芦丁充分溶解，并用甲醇完成定容，使其到达标准刻度线位置，充分摇匀，此时可以得到芦丁标准品溶液，对应的浓度为0.199 mg/mL，标准品保存并备用。

2.2.2 制备供试品溶液

精密称取4 g 潞党参粉末，置于150 mL 具塞锥形瓶，加适量甲醇溶液提取，每次提取30 min，共2 次，滤过，滤液置于100 mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，通过微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液。

2.2.3 波长参数选择

吸取4.0 mL 芦丁标准品溶液，并将其置于25 mL容量瓶中，然后向容量瓶中加入1.0 mL 5%的亚硝酸钠溶液，充分摇匀，静置6 min，继续加入1.0 mL 10%硝酸铝溶液，再次充分摇匀，静置6 min，然后加入10.0 mL 4%的氢氧化钠溶液，然后用蒸馏水定容，充分摇匀，静置15 min。 设定空白试剂，并对不同波长的扫描与吸收情况予以观察，在510 nm 波长条件下，芦丁标准品溶液有最大吸收，因而分光光度测定中波长条件确定为510 nm。

2.2.4 分析线性关系

准备好25 mL 容量瓶，从芦丁标准品溶液中分别吸取 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，同时设置空白对照组， 向不足6.0 mL 的容量瓶中加入蒸馏水，使溶液体积达到6.0 mL。 向不同容量瓶中加入1.0 mL 5.0%的亚硝酸钠溶液，充分混合后摇匀，静置6 min；加入1.0mL10%的硝酸铝溶液，充分摇匀并静置6min；加入10 mL 4.0%的氢氧化钠溶液，加入蒸馏水使其达到刻度位置，充分摇匀，静置15 min。 波长设置为510 nm，于这一条件下测定不同浓度溶液的吸光度，其中纵坐标为吸光度值（Y），横坐标为浓度（X），根据测定结果绘制校准曲线，计算回归方程，最终得出Y=0.0199X+0.0076，相关系数r 为0.999 8，研究显示，在7.96～47.76 μg/mL 内样品浓度均有较好的线性关系。

2.2.5 稳定性试验分析

准确称量1 g 潞党参粉末，根据2.2.2 的方法完成样品溶液的制备，溶液制备完成后准确吸取4 mL，并将其置于25 mL 容量瓶中，根据2.2.4 方法操作，重复进行6 次显色后样品吸光度测量，间隔时间为30 min。 通过计算，样品溶液重复6 次的标准偏差（RSD）为1.22%，提示样品在3 h 内有较好的稳定性。

2.2.6 精密度试验分析

从芦丁标准品溶液中准确吸取4.0 mL，将溶液加入25 mL 容量瓶中，共计6 份，根据2.2.4 操作方法完成吸光度的测定，通过计算，6 个样本溶液测定的RSD 为1.17%，表明分光光度法有较好的精密度。

2.2.7 回收率试验分析

准确称取供试品6 份，即已知含量的0.5 g 潞党参粉末，供试品中加入一定量的芦丁标准品，参照2.2.2方法操作进行样品溶液制备，溶液制备完成后，准确吸取4.0 mL 溶液，并将其加至25 mL 容量瓶中，根据2.2.4 方法操作测定吸光度，计算不同供试品回收率，评价总体回收率情况。

2.2.8 样品含量的测定

准确称取1 g 潞党参粉末，共3 份，根据2.2.2 中的方法进行样品溶液制备，制备样品溶液后吸取4.0 mL 样品溶液，并将其置于25 mL 容量瓶中，根据2.2.4 方法进行吸光度的测定，按照标准曲线计算潞党参中总黄酮的含量水平。总黄酮含量计算公式为：

其中，Cr—对照品溶液浓度；Ax—供试品溶液吸光度；Ar—对照品溶液吸光度；D—供试品稀释倍数；V—供试品溶液体积；w—供试液的取样量[3]。

3 结果

通过对潞党参总黄酮的提取及含量测定，合理设置试验条件， 芦丁含量在 7.96～47.76 μg/mL 可保证测定结果具有较好的稳定性、精密度以及线性关系，稳定性分析对应的RSD 为1.22%，精密度试验分析后对应的RSD 为1.17%，样品回收率超过99.50%，潞党参中总黄酮含量水平为0.98%，加样回收率试验结果数据详见表1。

表1 潞党参加样回收率分析

4 讨论

潞党参是一种常用的中药材，结合中国药典中对其的记载，临床对于有养血生津、健脾益肺等需求的患者可使用该药物予以治疗[4]。 结合中医典籍以及实际临床应用研究，潞党参在众多疾病治疗方面均有应用，如冠心病、心衰等循环系统疾病；胃痛、腹痛、胃下垂等消化系统疾病； 糖尿病周围神经病变等内分泌系统疾病。 近年来，潞党参在呼吸系统疾病、妇科疾病、老年痴呆等方面也有应用[5]。 潞党参能够与黄芪、茯苓、麦冬等药物配伍，提高药效，还能够与川芎、大枣、当归等配伍，用于养血生津[6]。

药典中对潞党参总黄酮的含量水平有明确要求， 其含量稳定性会直接对药物临床使用疗效以及用药安全性产生影响，且因为产地、环境等因素的改变，潞党参中总黄酮成分的含量也可能发生改变。有资料显示，潞党参与藏党参均属于常用的党参药材，但是潞党参中的总黄酮含量较藏党参中更多，这种差异会影响到实际的治疗效果。 不同产地党参中总黄酮含量的差异同地理位置环境、药材生长地区的温度等均有关。此外，药材市场上也可能存在假冒伪劣或者不合格药材。 潞党参中总黄酮成分属于党参发挥药效的关键性成分，同时影响着实际用药效果，儿童、妇女、老年人等特殊群体的用药标准更加严格，这些都要求必须明确不同地区的药材特点以及有效成分含量，保证用药的精准性，对潞党参中总黄酮成分进行测定，能够为潞党参药材的鉴定以及确定药材质量变化提供依据。

近年来，关于潞党参的研究不断增加，胡建燃[7]等分析了潞党参多糖对宫颈癌细胞SiHa 增殖和迁移的影响，研究指出潞党参中的多糖成分能够明显抑制SiHa 细胞增殖，同时对SiHa 细胞与外基质的黏附产生抑制，抑制体外迁移运动能力，研究认为潞党参有成为抗肿瘤治疗辅助药物的可能性。陈林等[8]分析了山西潞党参皂苷提取工艺优化及抗氧化活性， 研究指出山西潞党参皂苷含量较高且稳定，而野生潞党参皂苷比种植潞党参皂苷含量高，抗氧化分析证实潞党参皂苷浓度同抗氧化活性存在正比例关系；产地会影响潞党参中的皂苷提取物，并对清除自由基效果产生影响，同时指出了不同生长年限均可对党参皂苷抗氧化能力产生影响。 上述研究都为潞党参的进一步应用奠定了基础。

本文对潞党参总黄酮的提取及含量测定予以研究，应用了紫外可见分光光度法，能够兼顾定性与定量分析。 紫外可见分光光度法是根据不同物质分子在一定波长范围内出现的电磁波吸收特性进行药物成分含量测定与分析。根据现有的研究分析，紫外可见分光光度法在分析中有准确度高、重现性好、操作简单等优势，目前在不同中药材鉴别、检查、含量测定方面都有实际应用。

结合本文研究结果，通过对潞党参总黄酮的提取与测定分析， 结果证实分光光度法对潞党参中总黄酮的测定具有较好的重复性和稳定性，且总体回收率超过95.00%，表明分光光度方法在潞党参总黄酮测定方面有较好的应用价值。

本文仅选择了山西省平顺县的一种潞党参进行研究，而山西省长治、陵川、武乡等地区也都有潞党参，后续研究中可对山西省不同地区潞党参总黄酮含量予以测定，同时结合其他地区潞党参药材实施总黄酮含量测定，通过对不同地区潞党参总黄酮的测定与对比，了解不同地区潞党参的药材质量，依据不同潞党参总黄酮含量差异性予以不同的质量管理策略，保证潞党参在实际临床应用方面的有效性与安全性，更好地为各类疾病治疗提供参考。

综上所述，分光光度法可用于潞党参中总黄酮含量的测定，总体测定结果准确可靠，有较好的稳定性与灵敏性。