高效液相色谱法测定降糖药格列喹酮片中格列喹酮的含量

伦琦星 高晓洁

（1.河南省食品药品审评查验中心审评一科，河南郑州，450000；2.郑州市中医院制剂室，河南郑州，450000）

在普通群众的眼中，糖尿病顾名思义就是尿中的糖分过高。糖尿病其实本身并不可怕，可怕的是糖尿病带来的严重并发症。例如糖尿病足、糖尿病肾病、糖尿病心血管疾病、脑血栓、白内障等，这些并发症都影响甚至是严重威胁人类的生活质量和生命安全[1-2]。目前，治疗糖尿病主要为注射胰岛素和口服降糖药物两种方法。相对来说，口服降糖药为更多的糖尿病患者所选择。格列喹酮片是第二代口服磺脲类降糖药，在临床上应用广泛[3-4]。《中国药典》（2015年版）第二部[5]中规定，在测定格列喹酮片中格列喹酮片的含量时，采用的是紫外-可见分光光度法，对于该方法的影响因素较多。因此，随着检测技术的发展以及高效液相色谱技术检测的大量普及，提供了一种灵敏度高，简便快捷准确的测定方法。因此，本文通过高效液相色谱法来测定甲苯磺丁脲片中的甲苯黄丁脲含量。测定结果显示，该本方法具有准确度高，重复性好，操作简便，样品稳定性好的特点。现将实验报告如下。

1 仪器和试剂

1.1 仪器

Waters 2695型高效液相色谱仪（Empower 3工作站，2998二极管阵列检测器），赛多利斯GL2202i电子分析天平，F-008S型超声波清洗器（深圳福洋科技集团有限公司）。

1.2 试剂

格列喹酮对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100280-201403）；异喹啉物对照品（中国食品药品检定研究院，100846-201102），色谱纯乙腈（MACKLIN），色谱纯磷酸（南京化学试剂股份有限公司），分析纯磷酸二氢钠（苏州市久恒化工有限公司），水为超纯水。格列喹酮片（吉林金恒制药股份有限公司，批号：190501、181002、180701）。

1.3 方法

1.3.1 液相色谱条件

shimadzuInertSustainAQ-C18液相色谱柱（4.6×250mm，5μm），乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液（用磷酸调pH至4.5）（65：35）为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长为232nm，进样体积为10μL，柱温箱为 30℃。

1.3.2 对照品贮备液和对照品溶液的制备

精密称取上述的格列喹酮对照品约25mg，置于100mL容量瓶中，加入适宜的流动相，超声溶解后，用流动相稀释至刻度后作为供试品贮备液待用。取供试品贮备液5mL，置于25mL的容量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为对照品溶液待用。

1.3.3 供试品溶液的制备

取格列喹酮片20片，精密称定后，研细，取细粉（以格列喹酮计50mg）置于100mL的容量瓶内，加流动相超声溶解后，用流动相定容至刻度，过滤，取续滤液10mL～100mL的容量瓶内，用流动相定容至刻度，待用。

1.4 结果计算

以格列喹酮的峰面积按外标法计算，即得。

2 结果

2.1 系统适用性实验

取格列喹酮对照品和异喹啉物对照品各约10mg，置于同一200mL的容量瓶中，加流动相溶解后并定容至相应的刻度，按照文中上述的色谱条件进样，实验结果符合《中国药典》2015年版的相关规定。色谱图见图1。

图1 系统适用性色谱图

2.2 线性关系实验

精密量取上述的对照品贮备液 1mL、2mL、3mL、5mL、10mL分别置于100mL的容量瓶中，用流动相稀释至相应的刻度，按照上述的色谱条件进行实验，记录其色谱图。以峰面积(Y)对浓度（X）进行回归分析，可得回归方程为Y=5695X+2142（r=0.9999），结果表明格列喹酮在21.23～137.52μg/mL的浓度范围内线性关系较好。

2.3 精密度实验

取文中上述配置的对照品溶液，按照文中上述的方法连续进样六次，记录其色谱图，通过计算可得RSD为0.57%（n=6），结果表明，在该设置的条件下，格列喹酮精密度良好。

2.4 重复性实验

取批号为190501的样品6份，按照“1.3.3”项下的条件配置成供试品溶液，按照文中上述的色谱条件分别进样，根据格列喹酮的峰面积计算结果。结果显示供试品的RSD为0.45%（n=6）。结果显示供试品重复性良好。

2.5 稳定性实验

取批号为190501的样品，按照文章“1.3.3”中的条件，配置成供试品溶液，室温下放置。分别在 0h、2h、5h、9h、12h、24h 分别取样，取样后立即进样，记录其色谱图，根据格列喹酮的峰面积计算其RSD为0.65%。结果证明，供试品溶液在室温下24h稳定。

2.6 回收率实验

取已知浓度的、批号为190501的样品6份（每份约含格列喹酮50mg），按照文中上述的条件制成供试品溶液，另取格列喹酮对照品6份，分别加入上述供试品溶液，按设置的色谱图条件进样，以格列喹酮的峰面积计算其回收率。见表1。

2.7 样品含量测定

取批号为190501、181002、180701的三批样品，按照文中设置的条件分别制成供试品溶液后，按设置的条件进样。另取批号为190501、181002、180701的三批样品，按照《中国药典》（2015年版）中规定的紫外-可见分光光度法测定格列喹酮的含量。将这两种方法测定的结果进行比较。结果表明，这两种实验方法结果基本一致。见表2。

表1 格列喹酮回收率实验结果

表2 不同实验方法测定格列喹酮的实验结果

3 讨论

通过前期查询文献发现，流动相有用甲醇、乙腈、水、缓冲盐等系统，通过实验发现，流动相在乙腈和磷酸二氢钠的组合条件下，得到的色谱峰，峰形较好，出峰时间较快，分离度符合药典要求。

通过实验可知，使用液相和紫外检测，所得的结果基本一致。但液相可以更准确的检测比较难分离的物质，因此，本文可以为格列喹酮片的含量测定提供一种新的检测方法。