使用泰万菌素治疗鸡胚中鸡滑液支原体的效果试验

韩相敏，文 丽，高俊锋，马晶晶，吴碧清，赖 志，张 江，胡思顺

(1.上海创宏生物科技有限公司，上海 松江 201619；2.浙江伊科拜克动物保健品有限公司，上海 长宁 201101；3.上海农林职业技术学院农业生物与生态技术系，上海 松江 201699；4.华中农业大学动物医学院，湖北 武汉 430070)

鸡滑液支原体(Mycoplasmasynoviae,MS)是危害世界养禽业的一种重要支原体，其特征为关节、腱鞘和脚掌肿胀，并使产蛋鸡产蛋量下降，蛋品质以及孵化率降低[1]。MS可感染鸡和火鸡以及其他多种禽类，呈急性或慢性经过，多数表现为亚临床症状的呼吸道感染以及关节炎和传染性滑膜炎的发生，导致生长发育迟缓及胴体降级，甚至引起免疫抑制[2]。MS不仅可以通过接触被污染的设备和空气进行水平传播，同时也可以通过种蛋进行垂直传播[3]。Feberwee A等在对荷兰蛋鸡和肉鸡进行血清监测时发现，该场的MS感染阳性率表现为商品代鸡群高于父母代，父母代高于祖代[4]，说明垂直传播是MS危害养禽业的主要方式，因此切断MS垂直传播对于控制MS感染，建立无MS禽群具有重要意义。

本试验尝试使用药物控制种蛋中MS的数量，探索MS净化措施。前期研究表明，泰万菌素对鸡滑液支原体有效，最小抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC)为0.008 μg/mL；5～7日龄SPF鸡胚感染MS后，使用50 MIC的泰万菌素作用5 d对MS的抑制率为70%[5]。本试验将MS感染15～16日龄鸡胚，并对感染后鸡胚注射泰万菌素，根据试验组和用药组鸡胚的健雏率及出壳雏鸡肺脏MS的感染情况，确定泰万菌素治疗鸡胚中MS的效果。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 SPF鸡胚 孵化至15日龄，购自梅里亚维通实验动物技术有限公司。

1.1.2 毒株 MS标准株WVU1853，试验前复苏培养，并测定其变色单位(Color changing units,CCU)。

1.1.3 药物制备 泰万菌素和泰妙菌素，均购自浙江伊科拜克动物保健品有限公司。使用前进行溶解，并过滤除菌。

1.2 方法

1.2.1 MS感染 用无菌生理盐水将制备好的支原体培养物稀释至106.0CCU/0.1 mL，经胚体接种15日龄SPF鸡胚，0.1 mL/枚。同时取SPF鸡胚58枚不接种MS。

1.2.2 药物接种 接种后24 h，在接种MS的鸡胚中各取32枚，分别从同一部位注射接种4 μg泰万菌素、0.4 μg泰万菌素、4 μg泰妙菌素和0.4 μg泰妙菌素作为用药组，同时取32枚不接种药物作为MS对照组；在不接种MS的SPF鸡胚中各取12枚分别接种4 μg泰万菌素、0.4 μg泰万菌素、4 μg泰妙菌素和0.4 μg泰妙菌素作为药物对照组，另取10枚接种生理盐水作为空白对照组，接种后将SPF鸡胚置于孵化器中继续孵化至出壳。

1.2.3 入孵蛋健雏率统计 统计出壳雏的发病情况。出壳雏发病指：雏鸡站立不稳、关节肿胀、偏瘫、劈叉或死亡。出壳后观察5 d，统计各组雏鸡健活数，比较入孵蛋健雏率(入孵蛋健雏率=健雏数/入孵数×100%)。

1.2.4 接种低剂量MS试验 用无菌生理盐水将制备好的支原体培养物稀释至105.0CCU/0.1 mL，并按照1.2.1～1.2.3进行试验和统计入孵蛋健雏率。

1.2.5 雏鸡肺脏支原体检测 于出壳后第5天，在接种低剂量MS的用药组和对照组中随机取5只雏鸡，处死后取一侧肺脏，分别加入1 mL培养基进行匀浆，取匀浆液2 000 r/min离心2 min，取100 μL上清液加入到预先加有支原体培养物的96孔细胞培养板，再2倍倍比稀释至第8孔。根据培养物颜色变化判定结果。

2 结果

2.1 接种高剂量MS试验结果 将支原体以106.0CCU感染鸡胚，雏鸡出壳后5 d，根据健活数统计入孵蛋健雏率，见表1。结果显示，MS+泰万菌素4 μg组与MS对照组相比差异显著(P<0.05)，且MS+泰万菌素组效果优于MS+泰妙菌素组。

表1 MS以106.0 CCU接种鸡胚各组健雏率统计结果Table 1 Statistical results of the rate of healthy chicks in each group with inject of 106.0 CCU of MS

2.2 接种低剂量MS试验结果 将支原体以105.0CCU感染鸡胚，小鸡出壳后5 d，见表2。结果显示，用药组入孵蛋健雏率高于MS组，且MS+泰万菌素组效果优于MS+泰妙菌素组。弱雏表现为劈叉、关节肿胀、无法站立。

表2 MS以105.0 CCU接种鸡胚健雏率统计结果Table 2 The incubation rate of healthy chicks in each group with inject of 105.0 CCU of MS

2.3 肺脏支原体检测结果 将各组孵出的雏鸡肺脏进行支原体检验，见表3，MS对照组雏鸡肺脏支原体含量为24.8±0.84CCU/0.1 mL，MS+药物组雏鸡肺脏支原体含量为21.6～22.0CCU/0.1 mL，低于MS组，且差异显著(P<0.05)。

表3 雏鸡肺脏支原体检测结果Table 3 Statistical results of the content of MS in lungs

3 讨论

MS在国内流行呈逐年上升的趋势。近几年，山东、河南、江苏等地包括商品蛋鸡、商品肉鸡、种公鸡、蛋种鸡等各品种、各日龄的鸡均有发病[6]。流行病学调查显示，MS的流行与种蛋污染关系密切相关。有学者认为，MS对养殖造成的经济损失可能是继2007-2008年鸡淋巴细胞白血病之后，又一垂直传播、严重影响养鸡生产的传染病，其造成的经济损失不亚于鸡淋巴细胞白血病，应引起业界的重视[7]。为了尝试使用药物控制MS垂直传播，本试验将MS分别以106.0CCU和105.0CCU接种15日龄SPF鸡胚，结果证实，用药组入孵蛋健雏率均高于对照组，且MS+泰万菌素组效果优于MS+泰妙菌素组，这表明泰万菌素对鸡胚中的支原体有抑制作用，可以提高入孵蛋健雏率。但是由于鸡胚在15～16日龄这个时期胚盘的呼吸方式由绒毛尿囊膜吸收转为肺呼吸，处于特殊的生理时期，故此时胚胎容易死亡[8]。本试验结果显示，药物对照组和生理盐水对照组鸡胚出壳率较低，这可能与选择15～16日龄开孔并注射药物，导致鸡胚生理变化较大，最终影响鸡胚孵化率。

MS污染种蛋孵化出的雏鸡，一般发病较快，1周左右可通过接触传染。为了评价MS感染雏鸡传播MS的风险，试验中测定雏鸡肺脏中MS的含量。用药组雏鸡肺脏支原体含量远低于MS对照组，表明使用泰万菌素对被感染的种蛋进行治疗可减少雏鸡肺脏支原体含量，对种鸡场的净化MS具有一定的指导作用，尽管2种药物均未能完全清除胚内的MS。这可能与MS可在鸡胚中快速增殖的特性和药物的作用剂量以及药物在胚体中的药物动力学有关。