特应性皮炎小鼠模型中白细胞介素-21、CC趋化因子配体20的表达分析

王娟 郑爱义 鲍海平

[摘要]目的 测定白细胞介素-21（IL-21）和CC趋化因子配体20（CCL20）在2，4-二硝基氯苯（DNCB）诱导的特应性皮炎小鼠模型中的表达情况，探讨二者在特应性皮炎发病中的作用。方法 将12只BALB/c雌性小鼠，随机分为模型组和对照组，每组6只，使用DNCB构建小鼠特应性皮炎模型。造模成功后采用酶联免疫吸附法检测小鼠血清中IL-21和CCL20的水平。结果 特应性皮炎模型组小鼠血清中IL-21和CCL20的表达水平均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），并且二者表达成正相关（r=0.59，P<0.05）。结论 IL-21和CCL20在特应性皮炎小鼠模型中表达升高，且成正相关，可能协同参与了特应性皮炎的发生发展。

[关键词]特应性皮炎;白细胞介素-21;CC趋化因子配体20;小鼠模型

[中图分类号] R751          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-4721（2020）8（b）-0014-03

[Abstract] Objective To detect the expression of interleukin-21 （IL-21） and CC chemokine ligand 20 （CCL20） in 2，4-dinitrochlorobenzene （DNCB） induced mice models with atopic dermatitis and explore their roles in the pathogenesis of atopic dermatitis. Methods Twelve female BALB/c mice were randomly divided into the model group and control group（6 in each）. Mice models with atopic dermatitis were established by DNCB. After successful modeling， the serum levels of IL-21 and CCL20 were detected by enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）. Results The serum levels of IL-21 and CCL20 in the model group with atopic dermatitis were significantly higher than those in the control group （P<0.05）. There was a positive correlation between the serum levels of IL-21 and CCL20 in the model group（r=0.59， P<0.05）.Conclusions The expression of IL-21 and CCL20 in the mouse model of atopic dermatitis is increased and positively correlated， which may be synergistically involved in the occurrence and development of atopic dermatitis.

[Key words] Atopic dermatitis; Interleukin-21; CC chemokine ligand 20; Mouse model

特應性皮炎（AD）是由多种免疫、炎性细胞和细胞因子参与的慢性炎症性皮肤病，皮损顽固难愈，病因和发病机制较为复杂，与遗传、免疫异常、皮肤屏障受损、生存环境和感染等因素有关[1]。不同亚型CD4+T细胞介导的免疫失衡是AD发病的重要环节[2-3]。白细胞介素-21（IL-21）是IL-2家族中重要的多效能细胞因子，可调节淋巴细胞和自然杀伤（NK）细胞的增殖分化，广泛参与体内免疫应答和炎性反应。CC趋化因子配体-20（CCL20）是CC亚族的趋化因子，可趋化表达CC趋化因子受体（CCR）6的淋巴细胞和未成熟树突状细胞向抗原局部定向迁移，与多种自身免疫性疾病有关。本研究通过测定AD小鼠模型血清中IL-21和CCL20的表达变化，探讨二者在AD发病中的作用。

1材料与方法

1.1实验动物与主要试剂

无特定病原体动物（SPF）级7～8周龄健康BALB/c雌性小鼠12只，动物合格证号SCXK（京）2015-0006，由山西大同大学动物实验中心提供。2，4-二硝基氯苯（DNCB）购自美国Sigma公司，小鼠IL-21、CCL20酶联免疫吸附法（ELISA）检测试剂盒购自武汉伊莱瑞特生物科技有限公司。本研究已通过本院医学伦理委员会的审核批准。

1.2方法

1.2.1实验动物造模  12只BALB/c小鼠清洁级实验室饲养1周，适应环境后开始实验，随机分为模型组和对照组，各6只。参考文献[4-5]构建AD小鼠模型，实验前剃除小鼠背部毛发，面积约3 cm×2 cm。模型组小鼠第1～3天背部剃毛区外涂100 μl 1%DNCB溶液（采用丙酮∶橄榄油=1∶3作为基质配制），第4天继续外涂100 μl 0.1%DNCB溶液，改为每间隔1 d外涂1次，直到第28天涂抹后造模完成。造模后小鼠背部皮肤增厚，可见明显红斑、丘疹、丘疱疹、渗出、堆积大量痂屑。对照组小鼠背部剃毛区仅外涂基质，涂抹剂量、间隔时间与模型组相同。

1.2.2皮肤组织病理检查  造模后，无菌条件下两组小鼠背部剃毛区皮肤组织取材，10%甲醛溶液固定、脱水、透明、石蜡包埋、切片染色、封片，镜下观察两组小鼠皮肤组织病理改变。

[4]王俊霞，杨子微，车雅敏，等.薏苡仁提取物对BALB/c小鼠特应性皮炎模型的疗效观察及机制探讨[J].中华皮肤科杂志，2018，51（8）：609-613.

[5]鲍春梅，孙广臣.黑骨藤皂苷对特应性皮炎小鼠的治疗作用及对Th1型免疫反应的影响[J].山东医药，2017，57（13）：32-35.

[6]刘巍，田文单，Sally A，等.IL-21在Th17细胞炎性反应中的作用[J].国际免疫学杂志，2011，34（4）：274-276.

[7]Vogelzang A，McGuire HM，Yu D，et al.A fundamental role for interleukin-21 in the generation of T follicular helper cells[J].Immunity，2008，29（1）：127-137.

[8]杨正生，彭振辉，李晓莉，等.姜黄素对 IL-17 诱导的人表皮角质形成细胞株 CCL20 表达的影响[J].中国皮肤性病学杂志，2011，25（5）：346-348.

[9]蒋燕，郭顺，邹悦，等.麻黄碱对IL-17诱导的人永生化角质形成细胞HaCaT分泌CCL20的影响[J].山东医药，2017， 57（10）：24-27.

[10]Caruso R，Fina D，Peluso I，et al.A functional role for interleukin-21 inpromoting the synthesis of the T cell chemoattractant，MIP-3alpha，by gut epithelial cells[J].Gastroenterology，2007，132（1）：166-175.

[11]Orciani M，Campanati A，Caffarini M，et al.T helper （Th）1，Th17 and Th2 imbalance in mesenchymal stem cells of adult patients with atopic dermatitis： at the origin of the problem[J].Br J Dermatol，2017，176（6）：1569-1576.

[12]蔣有让，刁庆春，史丙俊，等.特应性皮炎患者血清中Th17和Treg相关细胞因子的检测[J].临床皮肤科杂志，2016，45（6）：411-413.

[13]Szabo，K，Gaspar K，Dajnoki Z，et all.Expansion of circulating follicular T helper cells associates with disease severity in childhood atopic dermatitis[J].Immunol Lett，2017，189（9）：101-108.

[14]Jin H，Oyoshi MK，Le Y，et al.IL-21R is essential for epicutaneous sensitization and allergic skin inflammation in humans and mice[J].J Clin Invest，2009，119（1）：47-60.

[15]Mizutani H，Tamagawa-Mineoka R，Nakamura N，et al.Serum IL-21 levels are elevated in atopic dermatitis patients with acute skin lesions[J].Allergol Int，2017，66（3）：440-444.

[16]邱会芬，王雯，王忠永，等.NB-UVB对特应性皮炎患者外周血IL-23/IL-17轴表达的影响[J].中国皮肤性病学杂志，2016，30（10）：1010-1013.

[17]Lin SC，Chuang YH，Yang YH，et al.Decrease in interleukin-21 in children suffering with severe atopic dermatitis[J].Pediatr Allergy Immunol，2011，22（8）：869-875.

[18]Machura E，Rusek-Zychma M，Jachimowicz M，et al.Serum TARC and CTACK concentrations in children with atopic dermatitis，allergic asthma，and urticaria[J].Pediatr Allergy Immunol，2012，23（3）：278-284.

[19]Miyano K，Matsushita S，Tsuchida T，et al.Inhibitory effect of a histamine 4 receptor  antagonist on CCL17 and CCL22 production by monocyte-derived Langerhans cells in patients with atopic dermatitis[J].J Dermatol，2016，43（9）：1024-1029.

[20]Park CW，Lee BH，Han HJ，et al.Tacrolimus decreases the expression of eotaxin，CCR3，RANTES and interleukin-5 in atopic dermatitis[J].Br J Dermatol，2005，152（6）：1173-1181.

（收稿日期：2019-12-13）