血清及胎盘中脂蛋白相关磷脂酶A2水平与妊娠期高血压疾病的关系

王 晶，东 星，张学军，尚丽新

妊娠期高血压疾病是妊娠与高血压并存的一组疾病，严重威胁母婴健康[1]。目前，其病因及发病机制尚不明确，亦缺少特效的治疗手段[2,3]。因此，研究其发病机制，寻找有效的预测指标及治疗方法至关重要[4]。近年来发现，脂代谢发生紊乱，在氧化应激反应或脂质过氧化物的作用下内皮细胞分泌炎性因子受损，是子痫前期的基本病理变化之一[5,6]。脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)作为一种炎性标志物，可激活炎性反应，损伤血管内皮细胞，在脂质代谢紊乱中有重要的作用[7,8]，可能与妊娠期高血压疾病的发生密切相关。本研究检测了妊娠期高血压疾病患者血清及胎盘中Lp-PLA2水平，探讨其在该病发生中的作用及与妊娠结局的关系，期望为该病的预测及治疗提供新的靶点。

1 对象与方法

1.1 对象 选取2016-01至2018-01我院产科收治的妊娠期高血压疾病患者60例(妊娠期高血压疾病组)，其中妊娠高血压19例，轻度子痫前期25例、重度子痫前期16例。随机选取同期分娩的血压正常孕妇20例为对照组。纳入标准：(1)诊断标准参见第9版《妇产科学》[9]；(2)单胎初产妇；(3)签署知情同意书。排除标准：(1)慢性高血压、糖尿病及严重的心、肾、肝脏疾病；(2)酗酒、吸烟或精神性疾病病史；(3)免疫系统疾病。两组孕妇年龄、孕周、孕次、孕前体重、分娩时体重、新生儿性别之间比较，差异无统计学意义(P>0.05)。两组新生儿出生体重及身长比较，差异有统计学意义(P<0.05，表1)。

表1 两组孕期高血压产妇及其新生儿一般情况比较

1.2 方法

1.2.1 标本的采集与处理 (1)所有孕妇于清晨空腹抽取4 ml静脉血(妊娠期高血压疾病组于治疗前抽血)，在4 ℃下以3000 r/min离心15 min后，提取上清液，-80 ℃保存备用；(2)所有孕妇于分娩后立即抽取新生儿脐带血4 ml，处理及保存方法同母血，同时测量新生儿的出生身长及体重；(3)所有孕妇在胎盘娩出后，立即在胎盘母体面中央区取一块1 cm×1 cm×1 cm的组织，置于10%中性甲醛溶液中固定，用石蜡包埋制作蜡块，保存备用。

1.2.2 检测方法 孕妇血清中Lp-PLA2测定采用酶联免疫吸附试验(ELISA)，试剂盒为美国R&D公司产品，严格按照说明书进行操作。胎盘中Lp-PLA2表达情况的检测采用免疫组织化学方法。兔抗人Lp-PLA2抗体及免疫组化试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司，抗体工作浓度为1∶100。

1.3 免疫组化染色结果的判定 阳性细胞为细胞浆有清晰的棕黄色颗粒染色，阴性细胞为无着色或者着色与背景颜色相一致。在每张切片上随机选取10个高倍视野，每个视野对100个细胞进行计数，按阳性细胞数和染色强度占细胞总数的百分比作综合计分。(1)按阳性细胞数计分：阳性细胞数<5%时计为0分，阳性细胞数占5 %～25 %计为1分，阳性细胞数占26 %～50 %计为2分，阳性细胞数>50 %计为3分；(2)按染色强度计分：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色2分，棕褐色为3分；(3)将阳性细胞数的得分与染色强度的得分相乘，≥4分计为(+)，0～3分计为(-)。

1.4 评价指标 对两组胎盘中Lp-PLA2表达水平及血清中Lp-PLA2水平进行比较。对两组血清与胎盘中Lp-PLA2水平的相关性进行分析。

2 结 果

2.1 孕妇胎盘中Lp-PLA2表达水平的比较 Lp-PLA2主要表达于胎盘绒毛滋养细胞及蜕膜细胞的细胞浆中(图1A-B)。妊娠期高血压疾病组胎盘中Lp-PLA2表达水平明显高于对照组(P<0.05)，两组之间比较差异有统计学意义。轻度子痫前期Lp-PLA2表达水平显著高于对照组(P<0.05)，重度子痫前期Lp-PLA2表达水平显著高于轻度子痫前期(P<0.05，表2)；妊娠高血压Lp-PLA2表达水平与对照组比较，差异无统计学意义。

图1 孕妇胎盘绒毛滋养细胞及蜕膜细胞中Lp-PLA2的阳性表达(X200)

表2 各组孕期高血压孕妇胎盘中Lp-PLA2表达水平的比较 (n)

2.2 孕妇血清中Lp-PLA2水平的比较 妊娠期高血压疾病组血清中Lp-PLA2水平高于对照组(P<0.01)。随着病情的加重，Lp-PLA2水平呈逐渐上升趋势，对照组、妊娠高血压、轻度子痫前期、重度子痫前期两两之间比较，差异均有统计学意义(P均<0.05，表3)。

表3 各组孕期高血压孕妇血清中Lp-PLA2水平的比较

2.3 相关性研究 妊娠期高血压疾病组及对照组血清与胎盘中Lp-PLA2水平呈正相关(r=0.435，P<0.05；r=0.411，P<0.05)。

3 讨 论

妊娠期高血压疾病的病因及发病机制目前尚无定论。近年来认为，脂质代谢异常、血管内皮细胞发生炎性损伤及功能障碍可能是该病发生的中心环节。Lp-PLA2为磷脂酶 A2(Phospholipase A2，PLA2)超家族的成员，它的基因位于染色体 6p21.2-p12Lp-PLA，由441个氨基酸组成[10]。研究发现，Lp-PLA2可促进炎性介质的释放，使机体发生炎性反应，血管内皮细胞受到破坏[11]；可使血小板聚集，导致血栓的形成[12]；并在稳定细胞膜、重建磷脂、传递细胞信号、脂质代谢过程中发挥重要的作用[13-15]。在体内T 淋巴细胞、成熟的巨噬细胞等炎性细胞可以合成并分泌Lp-PLA2至血液循环中，以载脂蛋白B为载体，与低密度脂蛋白相结合，参与脂质代谢的调节[16]。由于Lp-PLA2在炎症反应及脂代谢中的作用，推测其可能与妊娠期高血压疾病的发生、发展关系密切。

Balc等[17]研究发现，子痫前期患者Lp-PLA2及C反应蛋白(CRP)水平均高于健康对照组，且两者呈正相关，认为Lp-PLA2水平的变化导致内皮细胞发生炎性反应，继而导致子痫前期的发生。本研究发现，妊娠期高血压疾病组胎盘中Lp-PLA2表达水平明显高于对照组(P<0.05)；轻度子痫前期Lp-PLA2表达水平高于对照组(P<0.05)，重度子痫前期Lp-PLA2表达水平高于轻度子痫前期(P<0.05)，提示Lp-PLA2水平的升高与妊娠期高血压疾病的发生及病情发展有关。

引发妊娠期高血压疾病的可能机制如下：(1)Lp-PLA2与低密度脂蛋白相结合，引起脂质代谢紊乱，继而导致子宫和胎盘动脉发生动脉粥样硬化，胎盘功能下降，最终导致妊娠期高血压疾病的发生；(2)Lp-PLA2可使卵磷脂水解氧化，产生游离脂肪酸和溶血卵磷脂，两者均为促进炎性反应发生的介质，通过激活细胞因子和黏附因子，使血管内皮细胞受损、功能障碍，导致妊娠期高血压疾病的发生和发展[18]；(3)Lp-PLA2通过促进IL-6释放，参与血管炎性反应，促使炎性反应部位胶原沉积、纤维母细胞增生，同时促使血小板凝集，导致血管内皮细胞损伤，诱发妊娠期高血压疾病的发生[19]。

Güngör ZB 等[20]以200名妊娠妇女为研究对象，将其分为对照组(血压正常组)、早发型子痫前期组[平均孕周为(28.7±3.0)周]、晚发型子痫前期组[平均孕周为(36.0±1.4)周]，检测血清中Lp-PLA2水平，结果发现，早发及晚发型子痫前期组血清Lp-PLA2水平明显高于对照组，提示Lp-PLA2水平升高可能与子痫前期及产后心血管疾病的发生有关，并可能作为该病的预测指标。本研究发现，妊娠期高血压疾病组血清中Lp-PLA2水平显著高于对照组(P<0.05)；且随着病情的加重，Lp-PLA2水平呈逐渐上升趋势，对照组、妊娠高血压、轻度子痫前期、重度子痫前期每两组之间比较，差异均有统计学意义(P均<0.05)；另外血清与胎盘中Lp-PLA2水平呈正相关(P<0.05)，提示血清Lp-PLA2水平的变化反映了病情的轻重，对于临床监测妊娠期高血压疾病有一定的意义，有可能作为一个新的预测指标应用于临床。

总之，Lp-PLA2水平的变化与妊娠期高血压疾病的发生、发展密切相关，检测孕妇血清中Lp-PLA2水平可能为预测该病的发生提供一个新的指标。有效抑制胎盘组织中Lp-PLA2的表达可能成为预防及治疗妊娠期高血压疾病的新的方法。