颅脑外伤合并侧脑室外引流患者脑脊液中利奈唑胺药效学研究
2020-09-29厉世笑夏爱晓马凯昀浙江省台州医院药剂科浙江台州37000浙江省台州医院检验科浙江台州37000
周 鹏，厉世笑，夏爱晓，林 忠，马凯昀（.浙江省台州医院药剂科，浙江 台州 37000；.浙江省台州医院检验科，浙江台州 37000）
1 仪器与试剂
1.1 仪器
Waters系列高效液相色谱仪，包括Waters 717自动进样器，1525四元泵，2487检测器，Waters Spherisorb S10 ODS2色谱柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），Breeze数据获取处理系统，KL-15C型恒温箱，WH-966调速混匀器，TU-1810APC紫外吸收仪，雷磁PHS-型PH计，TGL-1离心机，AE-240型电子天平，超声清洗机等。
1.2 试剂
利奈唑胺（规格：1 g，批号：5-ARP-79-1，加拿大多伦多研究化学品公司）；甲醇（色谱纯，天津四友化工公司）；水为高纯水。
2 方法
2.1 色谱条件
流动相：甲醇∶水 = 40∶60；流速：1.5 mL·min-1；柱温：25 ℃；紫外检测波长：254 nm。
2.2 方法验证
2.2.1 样品处理与测定 取空白脑脊液200 μL，加定量药品溶液，涡旋混匀30 s，离心（3000 r·min-1，5 min）后取上清液20 μL进样测定。
2.2.2 标准曲线的测定 配制含利奈唑胺40.00、20.00、10.00、5.00、2.50、1.00、0.50、0.10、0.05 μg·mL-1的脑脊液样品。按“2.2.1”项下方法操作，用外标法以利奈唑胺峰面积对浓度作图，采用最小二乘法进行线性回归。
2.2.3 精密度试验 取空白脑脊液若干份，配置成高、中、低3个质量浓度（40.00、5.00、0.05 μg·mL-1）的样品各5份，按“2.2.1”项下方法操作，分别在同日内测定5次，连续测定3 d，计算脑脊液日内及日间精密度。
2.2.4 回收率试验 取空白脑脊液若干份，配置成高、中、低3个质量浓度（40.00、5.00、0.05 μg·mL-1）的样品各5份，按“2.2.1”项下方法操作，测定其含量，再与加入量相比即为相对回收率。
2.3 用药方案及样本处理
此3例病人均为神经外科所收治颅脑外伤需侧脑室引流患者，给予利奈唑胺片剂600 mg口服，q 12 h给药，用药2 d至血药浓度达到稳态后，取脑脊液2 mL检测药物浓度。
3 结果
3.1 紫外扫描图谱
经紫外扫描，利奈唑胺在198 nm和250 nm处有最大吸收峰，选择位于紫外光区位置254 nm波长作为检测波长进行测定。
3.2 利奈唑胺色谱图
从图1中可见利奈唑胺峰形、分离度均良好，无干扰峰，保留时间为7.76 min。
图1 HPLC色谱图A-空白脑脊液，B-利奈唑胺+脑脊液；1-利奈唑胺Fig 1 HPLC chromatogramA-blank CSF, B-linezolid + CSF; 1-linezolid
3.3 标准曲线
线性回归方程为：Y= 22 436X+ 9156，r= 0.999 5，在0.05～40.00 mg·L-1范围内线性关系良好。
3.4 精密度与回收率
日内、日间精密度及回收率见表1。由表1数据可知，此方法的日间RSD ＜ 5%，日内RSD ＜ 10%，表明具有较好的精密度，且回收率也很高，说明该方法可行。
表1 脑脊液中利奈唑胺精密度与回收率.± s，n = 5Tab 1 Precision and recovery of linezolid in CSF.± s , n = 5
表1 脑脊液中利奈唑胺精密度与回收率.± s，n = 5Tab 1 Precision and recovery of linezolid in CSF.± s , n = 5
利奈唑胺浓度/μg·mL-1回收率RSD/%0.05 3.63±1.86 3.23±1.29 101.2±0.42 5.00 1.06±2.49 2.94±1.88 103.2±0.57 40.00 3.41±2.94 8.94±1.78 92.1±0.41日间RSD/%日内RSD/%
3.5 CSF浓度
患者使用利奈唑胺2 d后，从引流管抽取CSF进行浓度测定，3例患者血药浓度分别为4.8、4.1、1.7 mg·L-1，2例达到了临床治疗要求（MIC≤ 2 μg·mL-1），1例未达标。
4 讨论
利奈唑胺为时间依赖性抗菌药物，血浆蛋白结合率较低，广泛分布于组织间液，平均表观分布容积达40～50 L，药物的Cmax、AUC0～24h及致病菌的MIC均是影响其临床疗效的重要因素[5]。理想的利奈唑胺血药浓度AUC0～24h/MIC介于80～120，T ＞ MIC值大于85%是预示利奈唑胺良好临床和微生物学疗效的PK/PD指标[6]。尽管利奈唑胺具有独特的作用机制和良好的抗菌活性，且具有强大的组织和体液穿透性，能保证有足量药物到达感染部位，但在脑脊液中的浓度和药动学参数变化比较大[7]，特别是危重症患者的病理和生理改变一般区别于其他患者，如脓毒症液体复苏时的液体过负荷，血流高动力循环，低蛋白血症致第三间隙液体增多等，均可影响亲水性抗菌药物利奈唑胺在体内的药动学过程[8]。利奈唑胺的药物浓度不足，无法保证临床治疗效果，反之浓度过高则增加了血小板减少等不良反应的风险，所以监测脑脊液中药物浓度可更准确的指导临床合理用药。本实验结果显示在常规剂量下颅脑外伤合并侧脑室引流患者脑脊液中利奈唑胺的血药浓度波动范围较大，低于细菌的MIC值，需要调整用药方案。
本实验建立的利奈唑胺脑脊液检测方法，使用甲醇：水的流动相，相比于其他检测方法（如免疫法、液质联用等）步骤简单、价格低廉[9]，其线性、精密度、回收率等指标均符合生物样品分析标准，利奈唑胺对大多数临床分离的常见G+菌的MIC在0.5～2.0 mg·L-1，本方法建立的线性范围为0.05～40.00 mg·L-1，可满足临床脑脊液中利奈唑胺药物浓度检测，为临床给药方案提供参考依据。
