FABP5在宫颈癌组织的表达及其与预后的关系*

詹银珠， 王伟

1深圳市龙华区中心医院妇科(广东深圳 518110)； 2中山大学附属第一医院妇科(广东广州 510700)

在全球范围内，宫颈癌在女性恶性肿瘤中的发病率和病死率均排第4位，每年约527 600新发病例，约265 000死亡病例，其中近90%发生在发展中国家。我国每年约98 900新发宫颈癌病例，约30 500死亡病例[1]。虽然多数的宫颈癌患者可经手术或放疗等治疗手段而治愈，但因术后复发仍导致约20%的病死率，其预后在最近20年仍未得到显著改善[2]，因此宫颈癌预后仍是不容忽视的问题。本研究前期利用定量蛋白质组学方法，在不同淋巴结转移状态的宫颈癌组织标本中发现脂肪酸结合蛋白5(fatty acid binding protein 5，FABP5)与宫颈癌淋巴结转移密切相关[3]；体外实验，通过构建慢病毒载体，采用细胞计数盒8法、平板克隆形成实验、划痕实验、Transwell侵袭实验，结果显示FABP5可促进宫颈癌细胞的增殖、迁移、侵袭；体内实验，通过裸鼠移植瘤和肺转移瘤模型相关实验，结果显示FABP5还可促进宫颈癌细胞的远处转移[4]。但在临床上，FABP5与宫颈癌患者预后的关系尚未见报道。本研究旨在探讨临床上FABP5在人体宫颈癌组织的表达情况及与宫颈癌患者的临床、病理参数之间的相关性，采用多变量COX比例风险模型分析及生存分析，评估FABP5在宫颈癌患者预后中的价值。

1 资料与方法

1.1 组织标本 选取2003年1月至2007年12月在中山大学附属第一医院行广泛性子宫切除术和系统性腹膜后淋巴结切除术的早期宫颈癌组织蜡块共206例(淋巴结转移阳性41例，阴性165例)。患者年龄为27.0～68.0岁，中位年龄42.7岁。随访截止日期：2016年12月31日，随访时间均不少于60个月。

入选标准：(1)术后病理类型为鳞状细胞癌(所有组织病理诊断均由两名副高以上的病理学专家在双盲的情况下完成)。(2)临床分期为Ⅰa2～Ⅱa2期(FIGO 2009)。(3)术前均未接受放疗、化疗及生物学治疗，术后辅助治疗规范，系统。

选取2003年1月至2007年12月相匹配年龄的40例因子宫肌瘤在中山大学附属第一医院行全子宫切除的正常宫颈组织作为空白对照组。

1.2 免疫组化 所有病理切片均采用SP法免疫组化染色，光镜观察。FABP5抗体(1∶600)购于Abcam公司(Cambridge, MA, USA)。染色结果判定标准：阳性为细胞浆或细胞核中出现黄色细小颗粒。按染色强度及染色面积综合计分：(1)染色强度：0(无色或蓝色)，1(淡黄色)，2(棕黄色)，3(棕褐色)。(2)染色面积：0(0%),1(<30%),2(30%～60%)，3(60%～100%)。染色指数计算公式为：免疫组化评分=染色强度评分+染色面积评分(范围从0～6)。总分0～3分为FABP5蛋白低表达，4～6分为FABP5蛋白高表达。

1.3 统计学方法 本研究数据处理采用SPSS 13.0 (SPSSInc., Chicago, IL, USA) 和MeldCalc分析软件(MedCalc Software, Mariakerke, Belgium)。独立样本组间比较采用t检验。FABP5与临床病理参数间相关性分析采用Pearson2test或Fisher′s exact test。早期宫颈癌预后因素分析采用多变量COX比例风险模型分析分析及Kaplan-Meier生存分析，生存差别比较采用Log-rank检验。P<0.05认为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 宫颈癌组织中FABP5的表达 206例宫颈癌样本(其中41例有淋巴结转移，165例无淋巴结转移)和40例正常宫颈组织样本中，免疫组化结果显示FABP5高表达主要集中在细胞核和细胞浆中；宫颈癌组织中FABP5的表达较正常宫颈组织显著升高(P<0.05)；且在淋巴结转移阳性组较阴性组表达显著升高(P<0.05)。而在正常宫颈组织中，FABP5仅在宫颈上皮层低表达(图1)。

2.2 FABP5与宫颈癌的临床病理参数的相关性 FABP5与临床参数中的FIGO分期(P<0.001)和肿瘤大小(P=0.011)显著相关；与病理参数中的宫颈癌淋巴转移(P<0.001)、淋巴脉管浸润(P<0.001)显著相关，而与其他的临床参数(年龄)、病理参数(宫颈间质浸润、肿瘤分化程度、宫旁转移和阴道转移)无关(P>0.05)(表1)。

2.3 FABP5与生存预后的相关性研究 随访期间内宫颈癌复发有54例(26.21%)；因宫颈癌死亡的有49例(23.79%)。应用多变量COX比例风险模型分析结果显示：年龄、盆腔淋巴结转移、肿瘤大小和FABP5为宫颈癌的独立预后因素(表2)。Kaplan-Meier生存曲线显示：随着FABP5的上调，复发率显著提高(图2-A)；且FABP5高表达组的总体生存率显著低(图2-B)。

表1 FABP5与宫颈癌临床病理参数的相关性 例

3 讨论

随着防癌筛查普及，宫颈癌的早诊率逐渐增高，晚期患者有所减少，且病死率逐年下降，但总的5年生存率仅有50%，改善预后的最大障碍是初治后复发病例的治疗[5]。我们前期研究应用双向荧光差异凝胶电泳(two-dimensional fluorescence difference in gel electrophoresis, 2D-DIGE)联合MALDI-TOF/TOF MS定量比较分析了不同淋巴结状态的宫颈癌灶的蛋白质组学，发现FABP5在淋巴结转移阳性的宫颈癌灶中表达显著上调，FABP5为宫颈癌淋巴结转移的预测标志物[3]。且在前期的体内、外实验中显示FABP5可促进宫颈癌细胞的增殖、迁移、侵袭，促进宫颈癌细胞的远处转移[4]。但FABP5在预测宫颈癌患者的预后中价值尚不清楚。

FABP5为脂肪酸结合蛋白家族重要成员，分子量大小为15KD，位于胞浆。FABP5可与跨膜转运载体、脂粒、过氧化物酶体、线粒体、内质网、CD36等相互结合，参与脂肪酸的摄取、转运和代谢，为细胞生长提供能量和原材料[6]。FABP5作为维甲酸(retinotic acid, RA)的转运蛋白，结合并转运RA，活化过氧化物酶体增殖物激活受体β/δ(peroxisome proliferator-activated receptorβ/δ, PPARβ/δ)，进而调节细胞分化、促进细胞增殖和抑制细胞的凋亡[7]。近来一些研究发现FABP5在肝内胆管癌[8]、前列腺癌[9]、星形神经胶质瘤[10]和乳腺癌[11]等肿瘤中高表达。而目前有关FABP5在宫颈癌中表达

表2 多变量COX比例风险模型分析总体生存和无复发生存

注：A：FABP5的表达和无复发生存率(Log-rank检验，P<0.000 1);B：FABP5的表达和总体生存率(Log-rank检验， P=0.000 3)

情况尚未见报道。本研究中我们发现在206例宫颈癌组织标本中发现FABP5的表达较正常宫颈组织显著高(P<0.05)；且在淋巴结转移阳性组较阴性组表达显著高(P<0.05)。通过相关性分析，发现FABP5与临床参数中的FIGO分期(P<0.001)和肿瘤大小(P=0.011)显著相关；与病理参数中的宫颈癌淋巴转移(P<0.001)、淋巴脉管浸润(P<0.001)显著相关。Jeong等[8]报道的肝内胆管癌中有淋巴结转移的患者中，FABP5呈高表达，且通过单变量分析发现FABP5的表达与肿瘤的大小P=0.047)、淋巴结转移(P=0.013)、淋巴管浸润(P=0.032)和肿瘤分期(P=0.007)密切相关。本研究结果提示FABP5在宫颈癌组织中的表达情况与上述研究一致。且Kaplan-Meier生存曲线显示随着FABP5的上调，复发率显著提高；总体生存率显著低。Campos 等[10]通过生存曲线显示随着FABP5的表达越高，星形神经胶质瘤的恶性程度越高，患者总体生存率更短。这一结果与我们的数据相一致。从以上结果可见FABP5与肿瘤的不良预后相关。

我们进一步行多变量COX比例风险模型分析显示FABP5、年龄、盆腔淋巴结转移、肿瘤大小为宫颈癌的独立预后因素。章文华等[12]早年报道影响早期宫颈癌预后的相关因素有肿瘤大小、肌层浸润、淋巴结转移、淋巴血管间隙受侵、分期、年龄、组织学类型和分化等；其中肿瘤大小、深肌层浸润和淋巴结转移是影响预后的重要因素，对预后和生存的影响最大。而本研究结果提示FABP5与宫颈癌患者的FIGO分期(P<0.001)、肿瘤大小(P=0.011)、宫颈癌淋巴转移(P<0.001)、淋巴脉管浸润(P<0.001)显著相关，由此可见，FABP5可在一定程度上可预测患者的预后。那么在临床上，对宫颈癌癌症组织进行活检时，同时行免疫组化检测癌组织的FABP5表达情况，以达到术前、无创的方式明确患者的预后，且可作为患者术后的随访指标，明确术后有无复发及转移的高危因素，对指导患者下一步治疗方案具有重要的临床价值。

综上所述，FABP5在宫颈癌中高表达，且与宫颈癌患者FIGO分期、肿瘤大小、宫颈癌淋巴转移、淋巴脉管浸润显著相关，可作为宫颈癌不良预后的预测指标。临床上，在行宫颈癌组织活检时，同时检测FABP5的表达情况，有助于临床医生明确患者预后情况，指导相关治疗。本研究仍是单中心回顾性研究，下一步仍需扩大样本、多中心、前瞻性研究加以证实。