miR-148a在急性胰腺炎患者中的表达水平及与预后的关系

急性胰腺炎是消化系统常见的临床危重症，近年来其发病率逐年升高[1-2]。急性胰腺炎起病急、进展快、病死率较高，部分患者可在发病数小时内死亡，病死率为30%～50%[3]。因此，若能早期评估急性胰腺炎患者的预后情况，控制病情进展，对于降低病死率具有重要意义。目前，临床上应用于评估急性胰腺炎患者预后的方法主要包括急性生理学及慢性健康状况评分系统(APACHE Ⅱ)、Ranson评分、急性胰腺炎严重程度床边指数等，但上述方法的计算过程较为繁琐[4-6]。朱宗文等[7]应用尿素氮及血肌酐预测急性胰腺炎患者的预后，结果发现两者预测的敏感度均较低，临床价值有限。因此，寻找一种简便、准确的生物学指标预测急性胰腺炎患者的预后显得十分重要。急性胰腺炎的发病机制尚未完全清楚，腺泡细胞内胰蛋白酶原的激活目前被认为是急性胰腺炎的始动因素[8]。有研究指出，自噬可通过自噬溶酶体内的相关组织蛋白酶促进胰蛋白酶原激活，进而参与急性胰腺炎的疾病进展[9]。miR-148a已被证实可通过Hedgehog信号通路调节自噬过程[10]，而自噬与急性胰腺炎的发生、发展密切相关，由此推测，miR-148a可能与急性胰腺炎存在联系。目前关于miR-148a与急性胰腺炎患者预后关系的报道较少，本文对此展开研究，以期为临床预测急性胰腺炎患者的预后提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年9月至2018年9月在首都医科大学大兴教学医院、首都医科大学附属北京同仁医院、首都医科大学附属复兴医院接受治疗的167例急性胰腺炎患者作为研究对象。纳入标准：(1)符合《急性胰腺炎诊治指南(2014版)》[11]中急性胰腺炎的诊断标准；(2)发病24 h内入院；(3)入院前未接受镇痛、抗菌等对症治疗；(4)患者及家属签署知情同意书。排除标准：(1)合并免疫系统疾病；(2)合并恶性肿瘤；(3)轻症急性胰腺炎；(4)妊娠期及哺乳期妇女；(5)随访失联者。167例急性胰腺炎患者中男性79例，女性88例，年龄为38～67岁，平均年龄(47.97±9.72)岁。本研究经医院医学伦理委员会批准。

1.2 临床资料收集

收集患者的年龄、性别、体质指数(BMI)、高血压史、糖尿病史、高脂血症史、吸烟史、饮酒史、发病至入院时间、病因、ICU住院天数、磁共振严重度指数(MRSI)等资料。根据患者的MRI表现进行MRSI评分。炎性反应程度：正常胰腺记0分，局限或弥漫性肿大记1分，胰腺或胰周脂肪内条片状异常信号记2分，界限不清的积液记3分，有2个及以上界限不清的积液或积气记4分。坏死程度：无坏死记0分，坏死<30%记2分，30%～50%记4分，坏死>50%记6分。炎性反应程度、坏死程度两项评分相加为MRSI评分，0～3分为轻度，4～6分为中度，7～10分为重度。

采集患者入院24 h内空腹外周静脉血5 mL，4 ℃下4 000 r/min离心15 min，分离上层血清。采用免疫比浊法检测血清C反应蛋白(CRP)水平，试剂盒购自浙江世纪康大医疗科技股份有限公司。采用速率法检测血清中脂肪酶、淀粉酶水平，试剂盒均购自上海铭博生物科技有限公司。采用复诊及电话随访等方式了解患者确诊后28 d内的预后情况，随访终点为死亡。

1.3 miR-148a相对表达量测定

采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测血清miR-148a的相对表达量。抽取患者入组后空腹静脉血10 mL，4 ℃下4 000 r/min离心15 min，分离上层血清，置于-20 ℃冰箱待测。采用TRIzol试剂法提取血清中的总RNA，将2 μg的总RNA添加至20 μL反应液中，采用Prime Script逆转录酶反向转录合成cDNA，随后PCR扩增。反应条件为：95 ℃预变性5 min；之后94 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s退火，72 ℃ 30 s，共45个循环。以GAPDH为内参，采用2-ΔΔCt表示血清miR-148a的相对表达量。引物序列见表1。

表1 引物序列

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 两组基本资料的比较

167例急性胰腺炎患者的28 d生存率为78.44%(131/167)，病死率为21.56%(36/167)。死亡组(36例)与生存组(131例)在年龄、性别、BMI、高血压、糖尿病、高脂血症、吸烟、饮酒、病因、ICU住院天数方面比较，差异无统计学意义(P>0.05)。相较于生存组，死亡组的发病至入院时间较长，MRSI评分较高，CRP、淀粉酶、脂肪酶水平较高，差异均有统计学意义(P均<0.05)。见表2。

表2 两组基本资料的比较

2.2 两组患者血清miR-148a的相对表达量比较

死亡组患者血清miR-148a的相对表达量为0.72±0.17，低于生存组(1.03±0.24)，差异有统计学意义(t=7.258，P<0.001)。

2.3 影响急性胰腺炎患者预后的相关因素

将发病至入院时间、MRSI评分、CRP、淀粉酶、脂肪酶、miR-148a作为自变量，α入=0.05，α出=0.10，将急性胰腺炎患者的预后(生存=0，死亡=1)作为因变量纳入多因素Logistic回归模型，结果显示发病至入院时间、MRSI评分及miR-148a与急性胰腺炎患者的预后密切相关。见表3。

表3 影响急性胰腺炎患者预后因素的Logistic回归分析

2.4 miR-148a、模型A及模型B预测急性胰腺炎患者预后的效能

采用二元Logistic回归分析构建由发病至入院时间、MRSI评分组成的预测急性胰腺炎患者预后的模型(模型A)：F=-14.230+0.171×发病至入院时间+1.214×MRSI评分；构建由发病至入院时间、MRSI评分、miR-148a组成的预测急性胰腺炎患者预后的模型(模型B)：F=-18.685+0.161×发病至入院时间+1.360×MRSI评分+2.639×miR-148a。miR-148a与模型A预测急性胰腺炎患者预后的ROC曲线下面积(AUC)比较，差异无统计学意义(Z=1.587，P=0.113)，而模型B预测急性胰腺炎患者预后的AUC高于miR-148a及模型A(Z=3.690，P<0.001；Z=4.122，P<0.001)。见表4、图1。

表4 miR-148a、模型A及模型B预测急性胰腺炎患者预后的效能

图1 miR-148a、模型A及模型B预测急性胰腺炎患者预后的ROC曲线

3 讨论

miR-148a是miR-148/152家族成员之一，位于人染色体7p15.2，其在细胞增殖、分化及肿瘤发生过程中发挥着重要作用[12]。有研究表明，miR-148a在机体发育过程中可参与调节心肌细胞分化[13]。翟文君等[14]研究显示，miR-148a可通过抑制蛋白激酶B(AKT)信号通路，从而抑制小鼠胰腺祖细胞的分化、增殖过程。另有报道指出，miR-148a可通过调节白细胞介素-6/信号转导及转录激活蛋白3信号通路，参与急性胰腺炎的发生、发展过程[15]。但目前关于miR-148a与急性胰腺炎患者预后关系的报道较少。

张东等[16]对63例急性胰腺炎患者进行随访观察，结果发现患者28 d的病死率为20.6%。本研究结果显示，患者28 d的病死率为21.56%，与既往报道相近。本研究发现，死亡组患者血清miR-148a的相对表达量低于生存组，提示miR-148a可能与急性胰腺炎患者的预后存在联系。为进一步明确两者之间的关系，本研究采用多因素Logistic回归方法进行分析，结果显示发病至入院时间、MRSI评分及miR-148a与急性胰腺炎患者的预后密切相关。有研究表明，自噬与急性胰腺炎的病理生理过程密切相关[9]。正常情况下，自噬可通过抑制炎性小体的表达而抑制炎性反应；在炎性疾病中，炎性小体能够增加腺泡细胞内质网压力引起高钙血症，通过诱导自噬促进胰蛋白酶原激活，降低胰腺腺泡细胞活力，诱导急性胰腺炎的发生[17]。此外，自噬可激活核因子-κB(NF-κB)信号通路，促使机体释放炎性趋化因子及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)，而TNF-α可诱导胰蛋白酶原过早激活及腺泡细胞坏死，且激活的胰蛋白酶原可进一步激活NF-κB信号通路，形成恶性循环，加重急性胰腺炎的病情[18]。由于miR-148a可促进自噬发生[10]，推测miR-148a可能通过自噬过程参与了急性胰腺炎的疾病进展。本研究中ROC曲线分析结果显示，模型B预测急性胰腺炎患者预后的效能高于miR-148a及模型A，表明纳入miR-148a指标更有利于准确评估患者的预后情况。

综上所述，miR-148a与急性胰腺炎的预后关系密切，检测miR-148a表达水平有助于评估患者的预后情况。本研究存在一定不足，比如未能动态监测miR-148a的表达情况，之后将进一步分析miR-148a影响急性胰腺炎患者预后的病理生理机制。