2型糖尿病患者血清EGR1水平与非酒精性脂肪性肝病的关系

张玉彩 刘哲慧 张小睿

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是除外乙醇等明确肝损伤病因的以肝脏脂肪变性为特征的临床综合征[1-2]。目前多认为NAFLD与生活习惯、2型糖尿病(T2DM)及高脂血症等代谢性疾病有关[3]。有研究表明T2DM患者的NAFLD患病率逐年升高，并且NAFLD患者的T2DM发病率及并发症发生率也升高了[4-5]。另有研究显示胰岛素抵抗和T2DM是NAFLD的独立危险因素[6]。阐明T2DM与NAFLD相互促进的机制，并探究相关生物学标志物对两者的预防和治疗意义重大。有研究报道了早期生长反应因子1(EGR1)可通过增加胰岛素抵抗促进T2DM的发病[7]，但关于EGR1与T2DM并发NAFLD及NAFLD严重程度的关系尚不明确。本研究检测了T2DM患者和T2DM并发NAFLD患者的血清EGR1水平，并分析其与T2DM并发NAFLD及NAFLD严重程度的关系，以期为T2DM和NAFLD的防治及病情评估提供帮助。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2016年4月至2019年4月在聊城市人民医院就诊的158例T2DM患者作为研究对象，根据患者是否并发NAFLD将其分为NAFLD组(n=106)和T2DM组(n=52)，另择50名同期健康体检者作为对照组。T2DM诊断符合世界卫生组织(WHO)的诊断标准，NAFLD诊断符合《非酒精性脂肪性肝病诊疗指南(2010年1月修订)》[8]，并根据肝脏超声结果判定NAFLD严重程度。根据NAFLD严重程度将NAFLD组患者分为轻度组(n=54)、中度组(n=36)和重度组(n=16)。纳入标准：(1)接受肝脏超声检查；(2)年龄30～70岁；(3)签署知情同意书。排除标准：(1)T1DM或妊娠糖尿病；(2)严重周围血管疾病、酮症酸中毒或神经病变等；(3)冠心病；(4)合并严重肝、肾功能损伤；(5)合并酒精性肝损伤、自身免疫性肝炎、病毒性肝炎及药物性肝损伤等；(6)恶性肿瘤。NAFLD组平均年龄(45.39±7.52)岁，男性70例，女性36例；T2DM组平均年龄(45.28±6.67)岁，男性34例，女性18例；对照组年龄(47.14±7.89)岁，男性26例，女性24例。本研究经医院医学伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 资料收集 收集所有受试者的年龄、性别、身高、体质量、肝脏超声结果及疾病史等信息，计算体质指数(BMI)，BMI=体重(kg)/身高(m)2。

1.2.2 血清指标检测 抽取3组的晨起肘部空腹静脉血10 mL，离心15 min(3 500 r/min)，提取上清液加入EP管中，置于-20 ℃冰箱内保存待验。用8000型自动生化分析仪(瑞士Roche公司)检测3组的血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、空腹血糖(FPG)和空腹胰岛素(FINS)。计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)，HOMA-IR=FPG(mmol/L)×FINS(mIU/L)/22.5。

采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测3组的血清EGR1水平。取EP管中上清液，加入总RNA提取试剂盒(美国GENMED公司)中提取总RNA，并用紫外分光光度计(上海美谱达公司)检测总RNA水平和纯度。取总RNA，加入反转录试剂盒[赛默飞世尔科技(中国)有限公司]中进行反转录反应。将反转录反应产物加入PCR仪(杭州博日公司)中进行扩增反应，反应条件为95 ℃预变性2 min，95 ℃ 15 s，60 ℃ 60 s，95 ℃ 15 s，共40个循环。GAPDH为内参，用2-ΔΔCt表示受试者血清EGR1水平。引物序列见表1。

表1 引物序列

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 3组的一般资料比较

3组的年龄、性别相比较，差异均无统计学意义(P>0.05)；3组的BMI、TC、TG、LDL-C、HDL-C、FPG、FINS和HOMA-IR相比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。详见表2。

表2 3组的一般资料比较

2.2 3组的血清EGR1水平比较

3组的血清EGR1水平相比较，差异有统计学意义(F=260.760，P<0.001)。NAFLD组血清EGR1水平为0.68±0.15，低于T2DM组(0.87±0.17)和对照组(1.29±0.16)，差异均有统计学意义(q=10.060，P<0.05；q=32.334，P<0.05)。T2DM组血清EGR1水平低于对照组，差异有统计学意义(q=19.408，P<0.05)。

2.3 血清EGR1水平与T2DM患者糖脂代谢相关指标的关系

通过Pearson相关性分析探讨血清EGR1水平与T2DM患者(含T2DM并发NAFLD患者，n=158)的BMI、TC、TG、LDL-C、HDL-C、FPG、FINS和HOMA-IR的关系，结果显示EGR1与BMI、LDL-C、FPG、FINS和HOMA-IR呈负相关关系(r=-0.234，P=0.003；r=-0.346，P<0.001；r=-0.362，P<0.001；r=-0.244，P=0.002；r=-0.369，P<0.001)，而EGR1与TC、TG和HDL-C无相关性(r=-0.043，P=0.591；r=-0.022，P=0.786；r=0.015，P=0.823)。

2.4 T2DM并发NAFLD的相关因素分析

将BMI(>26.17 kg/m2=1，≤26.17 kg/m2=0)、TC(>5.36 mmol/L=1，≤5.36 mmol/L=0)、TG(>3.14 mmol/L=1，≤3.14 mmol/L=0)、LDL-C(>3.05 mmol/L=1，≤3.05 mmol/L=0)、HDL-C(>1.14 mmol/L=1，≤1.14 mmol/L=0)、FPG(>11.40 mmol/L=1，≤11.40 mmol/L=0)、FINS(>14.53 mIU/L=1，≤14.53 mIU/L=0)、HOMA-IR(>7.57=1，≤7.57=0)和EGR1(>0.74=1，≤0.74=0)作为自变量，将T2DM是否并发NAFLD(是=1，否=0)作为因变量，纳入多因素Logistic回归分析，结果显示BMI、TC、LDL-C、FPG、FINS、HOMA-IR和EGR1与T2DM并发NAFLD密切相关。详见表3。

表3 影响T2DM并发NAFLD的多因素Logistic回归分析

2.5 不同严重程度的NAFLD患者的血清EGR1水平比较

根据NAFLD严重程度将NAFLD组患者分为轻度组(n=54)、中度组(n=36)和重度组(n=16)。3组的血清EGR1水平比较，差异有统计学意义(F=76.424，P<0.001)。轻度组的血清EGR1水平为0.78±0.10，高于中度组(0.62±0.07)和重度组(0.48±0.10)，差异均有统计学意义(q=11.440，P<0.05；q=16.096，P<0.05)。中度组血清EGR1水平高于重度组，差异有统计学意义(q=7.056，P<0.05)。

3 讨论

T2DM与NAFLD关系密切，可促进NAFLD发病[9]。有研究表明，绝大部分肥胖的T2DM患者都患有不同严重程度的NAFLD[10]。探究T2DM并发NAFLD的生物学标志物对于了解疾病情况及研发治疗药物的意义重大。EGR1是即刻早期基因家族的一员，可编码锌指蛋白，在细胞的增殖、分化及凋亡等方面发挥着重要作用[11-13]。有研究发现EGR1参与了乙醇诱导的大鼠肝损伤及肝纤维化等[14-15]。目前关于EGR1与NAFLD严重程度及T2DM并发NAFLD的关系尚未阐明。

本研究通过检测3组的血清EGR1水平，发现NAFLD组的血清EGR1水平低于T2DM组和对照组，且2DM组的血清EGR1水平低于对照组，表明EGR1可能不仅参与了T2DM的发病，也参与了T2DM继发NAFLD的发病，但具体的病理生理机制还需进一步研究探索。本研究进一步分析了T2DM组和NAFLD组的血清生物化学指标、BMI及HOMA-IR，结果显示NAFLD组的BMI、TC、TG、LDL-C、FPG、FINS和HOMA-IR更高。通过Pearson相关性分析探讨T2DM患者的血清EGR1水平与BMI、TC、TG、LDL-C、HDL-C、FPG、FINS和HOMA-IR的关系，结果显示EGR1与BMI、LDL-C、FPG、FINS和HOMA-IR呈负相关关系。上述结果表明EGR1可能通过调控LDL-C、FPG和FINS，进而促使T2DM并发NAFLD。通过多因素Logistic回归法分析影响T2DM并发NAFLD的相关因素，结果显示BMI、TC、LDL-C、FPG、FINS、HOMA-IR和EGR1与T2DM并发NAFLD密切相关。笔者认为EGR1可能通过调控LDL-C、FPG和FINS来增加机体脂质堆积及胰岛素抵抗情况，进而促使T2DM并发NAFLD，但其具体机制仍需基础研究探索。本研究进一步比较了不同严重程度的NAFLD患者的血清EGR1水平，发现轻度组的血清EGR1水平高于中度组和重度组，且中度组的血清EGR1水平高于重度组，表明EGR1不仅可促使T2DM并发NAFLD，还可促进NAFLD的进展。

综上所述，EGR1与T2DM并发NAFLD密切相关，检测血清EGR1可辅助判断NAFLD严重程度。本研究存在不足之处：(1)为单中心研究，样本量偏小；(2)样本均为聊城地区患者，结果可能存在一定偏倚；(3)根据肝脏超声结果判定NAFLD严重程度可能对结果造成一定的偏倚。今后将扩大样本量，进行多中心、跨地域临床研究，同时开展基础研究，以阐明EGR1与T2DM和NAFLD发病及病情进展的关系。