榄绿粗叶木总黄酮提取工艺优化及抗氧化活性研究

2020-08-27陈庆钥林水森谢志新

中国医药导报 2020年19期

陈庆钥林水森谢志新

[摘要] 目的研究榄绿粗叶木总黄酮的最佳提取条件，同时检测其抗氧化活性。方法设计正交试验对提取工艺进行优化;采用DPPH自由基、超氧阴离子自由基和羟基自由基清除能力评价抗氧化活性。结果最佳提取条件为提取时间60 min、料液比 1∶40 （g/mL）、乙醇浓度40%。榄绿粗叶木总黄酮对DPPH自由基、超氧阴离子自由基和羟基自由基具有较强的清除能力，在一定范围内清除能力与浓度存在量效关系。结论榄绿粗叶木总黄酮具有较强的抗氧化活性。

[关键词] 榄绿粗叶木;总黄酮;提取;抗氧化

[中图分类号] R284 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2020）07（a）-0031-04

[Abstract] Objective To study the optimum extraction condition and the antioxidant activity of total flavonoids from lasianthus lancilimbus. Methods The orthogonal experiment was designed to optimize the extraction process. The antioxidant activity was evaluated by DPPH free radical， superoxide anion radical and hydroxyl free radical scavenging ability. Results The optimum extraction condition was obtained as follows： the extraction time was 60 min， the solid-liquid ratio of 1∶40 （g/mL）， ethanol concentration was 40%. The scavenging abilities for DPPH free radical， superoxide anion radical and hydroxyl free radical were obviously related to the concentrations. Conclusion The total flavonoids from lasianthus lancilimbus have strong antioxidant activities.

[Key words] Lasianthus lancilimbus; Total flavonoids; Extraction; Antioxidant

欖绿粗叶木为茜草科粗叶木属的一个变种，具有抑制病菌、保护肝脏、抗肿瘤等功能[1-4]，目前对榄绿粗叶木活性成分的研究较少。黄酮作为一类活性物质，具有抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤的作用[5-13]。本研究以榄绿粗叶木为原料，对黄酮类成分的提取工艺进行优化，并研究其抗氧化能力。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

榄绿粗叶木购自福建省宁化县草药市场，经泉州医学高等专科学校中药教研室黄秀珍教授鉴定为茜草科粗叶木属植物榄绿粗叶木（Lasianthus lancilimbus）的干燥茎。

羟自由基测试盒，南京建成生物工程研究所，批号20191030;超氧阴离子自由基测试盒，南京建成生物工程研究所，批号：20191026;芦丁标准品，上海源叶生物科技有限公司，批号：Y16M9S61523，纯度≥98%。

1.2 主要仪器

BL10-40AA型超声波清洗机，无锡沃信仪器有限公司;A590型紫外分光光度仪，上海翱艺仪器有限公司。

1.3 提取工艺流程

将榄绿粗叶木粉碎过60目筛，称取1 g粉末，加入乙醇溶液，超声波（25℃，100 W）提取后，抽滤，滤液浓缩至无醇味后用80%乙醇定容至100 mL容量瓶。

1.4 含量测定

精密称取芦丁10 mg，用80%乙醇定容于100 mL容量瓶中，摇匀。分别移取1、2、3、4、5 mL于10 mL容量瓶中，加80%乙醇至5 mL，加入5%亚硝酸钠0.6 mL，摇匀，静置6 min。加入10%硝酸铝0.6 mL，摇匀，静置6 min。加入4%氢氧化钠3 mL，定容至刻度，摇匀，静置15 min。选择510 nm为吸收波长，得标准曲线方程Y = 8.4281X-0.008，R2 = 0.9995。精密吸取2 mL提取液，测定含量。

1.5 提取工艺的单因素试验

依次改变提取时间、乙醇浓度和料液比，按照“1.3”项下方法提取，按照“1.4”项下方法测定含量。

1.6 提取工艺的正交试验

设计正交试验方案见表1。

1.7 抗氧化活性测定

1.7.1 DPPH自由基清除能力测定移取2 mL不同浓度的黄酮溶液，加入2 mL 0.25 mmol/L的DPPH乙醇溶液，摇匀，阴暗处放置30 min，在517 nm处测量吸光度值A1。样品与乙醇混匀，测A2;DPPH乙醇溶液与乙醇混匀，测A3。清除率（%）=[1-（A1-A2）/A3]×100%。

1.7.2 羟自由基清除能力测定采用Feton法[14-18]，测定羟自由基清除率。

1.7.3 超氧阴离子自由基清除能力测定采用邻苯三酚自氧化法[19-23]，测定超氧阴离子自由基清除率。

2 结果

2.1 提取工艺的单因素试验结果

提取率在乙醇浓度50%时达到最大值。见图1。提取率在料液比1∶40时达到最大值。见图2。提取率在超声80 min时达到最大值。见图3。

2.2 提取工艺的正交试验结果

各因素的影响程度为乙醇浓度>料液比>超声时间。见表2。3个因素对提取率无显著影响。见表3。综合考虑，A2B1C1是黄酮提取的最优组合。因此，最佳提取工艺为料液比1∶40，乙醇浓度为40%，超声时间60 min。

2.3 最佳工艺验证

按最佳提取工艺提取3次，提取率分别为1.048%、1.051%、1.054%，均值为1.051%。数值接近，提示该工艺稳定可靠。

2.4 抗氧化活性

2.4.1 对DPPH自由基的清除能力在浓度0.04～0.1 mg/mL范围内，清除率随着浓度增加而增大，呈线性上升。当浓度达到0.15 mg/mL时，清除能力是同等浓度下抗坏血酸的92%。经二次多项拟合，IC50为0.057 mg/mL。见图4。

2.4.2 对羟基自由基的清除能力随着质量浓度的升高，清除率从12.3%上升到71.1%。在浓度为1.0 mg/mL时，清除率高达73.5%。经二次多项拟合，IC50为0.706 mg/mL。在实验浓度区间内，总黄酮的清除能力低于抗坏血酸。见图5。

2.4.3 对超氧阴离子自由基的清除能力黄酮浓度在0.1～1.0 mg/mL范围内，清除率从10.2%增加到54.5%。经二次多项拟合，IC50为0.434 mg/mL。在相同质量浓度下，抗坏血酸表现出更强的清除能力。见图6。

3 讨论

本研究通过正交试验确定了榄绿粗叶木总黄酮的最佳提取条件为料液比1∶40（g/mL）、提取时间60 min、乙醇浓度40%。榄绿粗叶木总黄酮对DPPH自由基、超氧阴离子自由基和羟基自由基具有较强的清除能力，其IC50分别为0.057、0.706、0.434 mg/mL。在一定范围内，清除能力与浓度存在量效关系。

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