W112抗小鼠癫痫作用机制

王清 李响 吴迪 张殿文 李伟

(吉林省中医药科学院，吉林 长春 130012)

W112化学名为4-正庚氧基-1，2，4-三唑-3-酮。W112是一类全新结构的化合物，其具有疗效好、毒性低、价格低廉等特点。本文通过4种化学物质诱发惊厥模型，探讨W112的抗癫痫作用机制。

1 材料与方法

1.1动物 昆明种小鼠，体重19～21 g，雌雄各半，购自长春生物制品研究所有限责任公司，合格证号：SCXK(吉)2011-0003。

1.2实验用药与试剂 W112单体化合物，类白色粉末，纯度大于98.5%，由延边大学药化教研室提供，批号：20140502；阳性对照药：托吡酯片，西安杨森制药有限公司，批号：131216725；卡马西平片，北京诺华制药有限公司，批号：X0477；苯妥英钠片，天津力生制药有限公司，批号：1302005。戊四唑(PTZ)，批号：1401097；荷包牡丹碱(Bic)，批号：20100601；3-巯基丙酸(MP)，批号：32755；硫代氨基脲(TSZ)，批号：34931，以上试剂均由上海晶纯生化科技股份有限公司生产。羧甲基纤维素钠(CMC-Na)，批号：F20071228，国药集团化学试剂有限公司。

1.3仪器 JA1003B型电子天平，上海越平科学仪器有限公司；T-1000型电子天平，常熟市双杰测试仪器厂。

1.4对PTZ、Bic、3-MP、TSZ所致小鼠惊厥的影响 ①PTZ致小鼠惊厥：采用戊四唑惊厥发作阈试验(MET)〔1～3〕方法，取昆明种小鼠60只，随机等分为六组，模型对照组、卡马西平100 mg/kg、托吡酯片25 mg/kg、W112大、中、小剂量(120、80、40 mg/kg)组。灌胃给药一次，体积均为20 ml/kg，模型对照组给予同体积0.5%CMC-Na。于给药后1 h，每鼠均腹腔注射PTZ 100 mg/kg诱发惊厥模型，体积为10 ml/kg，观察60 min。以全身阵挛性惊厥为观察指标，记录惊厥潜伏期、强直率、死亡率及发作级别。若惊厥潜伏期超过60 min则按60 min计算。②采用文献方法〔1～3〕，取昆明种小鼠60只，随机等分为六组，模型对照组，托吡酯片25 mg/kg，苯妥英钠40 mg/kg，W112大、中、小剂量组。灌胃给药一次，体积均为20 ml/kg。模型对照组给予同体积0.5%CMC-Na。于给药后1 h，每鼠均皮下注射Bic 2.7 mg/kg诱发惊厥模型，体积为10 ml/kg，观察30 min。观察指标及记录同PTZ诱发，若惊厥潜伏期超过30 min则按30 min计算。③采用文献方法〔1～3〕，取昆明种小鼠60只，分组及给药同Bic诱发。于给药后1 h，每鼠均皮下注射3-MP 60 mg/kg诱发惊厥模型，体积为10 ml/kg，观察30 min。观察指标及记录同PTZ诱发，若惊厥潜伏期超过30 min则按30 min计算。④采用文献方法〔1～3〕，取昆明种小鼠60只，分组及给药同Bic诱发。于给药后1 h，每鼠均腹腔注射TSZ 16 mg/kg诱发惊厥模型，体积为10 ml/kg，观察120 min。观察指标同PTZ诱发，若惊厥潜伏期超过120 min则按120 min计算。

1.5统计学方法 采用SPSS17.0统计软件进行t检验，Z检验。

2 结 果

W112大剂量能明显延长PTZ诱发惊厥鼠的惊厥潜伏期，降低强直率、死亡率和发作级别，作用强于托吡酯，与卡马西平相近，见表1。W112大剂量能显著降低Bic诱发惊厥鼠的强直率、发作级别，作用与托吡酯相近，但弱于苯妥英钠。W112大剂量显著降低3-MP惊厥鼠的强直率、发作级别，作用弱于苯妥英钠。W112大剂量可显著降低TSZ惊厥鼠的强直率、死亡率及发作级别，作用弱于苯妥英钠，见表2。

表1 对PTZ所致小鼠惊厥的影响

表2 对Bic、3-MP、TSZ所致小鼠惊厥的影响

3 讨 论

研究表明〔4〕，PTZ主要作用于脑干嘴侧区及大脑，促使兴奋性突触的易化的过程增强，容易引起惊厥。PTZ是GABA受体拮抗剂，主要通过影响与GABA相关的氯离子通道的活性，使中枢抑制功能减弱，神经元过度兴奋而引发癫痫发作。文献报道〔5〕，PTZ致惊厥发作可能还与提高中枢神经系统细胞外K+浓度，使细胞膜部分去极化而使其兴奋性增高有关。Bic是GABA受体的选择性拮抗剂，它能降低脑中GABA能神经系统的功能，从而诱发动物惊厥。3-MP是GABA形成酶谷氨酸脱羧酶(GAD)的竞争性抑制剂，可抑制GABA的合成，降低脑中的GABA含量。除抑制GAD的活性外，还能特异性地抑制大鼠脑片中GABA的释放，降低脑内GABA能神经系统的功能，从而引起动物惊厥；TSZ是GAD抑制剂，抑制谷氨酸生成GABA，使GABA合成减少，脑内GABA水平下降引起惊厥〔6，7〕。

本实验结果表明，灌胃W112对4种化学物质诱导的惊厥均具有显著的对抗作用，其抗癫痫作用机制可能主要是通过激活GABA神经递质系统，产生类GABA活性，从而起到抗癫痫作用。