醋酸氯己定原位缓释凝胶的处方优选

董仁超，刘邦国

牙周炎是发病率高、危害性大、累及牙周支持组织的炎症性、破坏性疾病，若得不到及时有效治疗，不仅造成牙齿牙周的局部损害，还会引起或加重心脑血管疾病、糖尿病、肝炎、肾炎等身体其他重要器官和组织的病变。相比于口服抗生素全身性用药，牙周袋局部给予缓释药物治疗效果较好［1-5］，但是这类制剂多为国外制品，国内虽有但是效果差，笔者以不易产生耐药性且抗菌谱广的醋酸氯己定作为模型药物，研制原位凝胶缓释制剂处方优选，该制剂经兔牙周袋上缘无痛注入牙周袋，遇牙龈液会凝固形成凝胶态药物储库，在牙周袋内长时间缓慢释放药物。实验结果表明，该处方为理想的优选处方，报告如下。

1 材料与仪器

N-甲基吡咯烷酮（NMP，上海埃比化学试剂有限公司，批号：20131023）；醋酸氯己定（麦克林试剂有限公司，CAS 号：56-95-1）；单油酸甘油酯（GMO，济南东润精化科技有限公司）；乙基纤维素（EC，N100，国药集团化学试剂有限公司）；醋酸氯己定原位凝胶（自制）；空白原位凝胶（自制）；蒸馏水（解放军第971医院药剂科自制）。

紫外分光光度计（UV-757型，上海精密科学有限公司）；电热恒温鼓风干燥箱（上海申贤恒温设备厂）；电子分析天平（FA1604型，上海衡平仪器仪表厂）；数显水浴恒温振荡器（WHY-2型，常州普天仪器制造有限公司）；超声清洗仪（SY2200-T型，上海声源超声波仪器设备有限公司）；离心机（LD5-2A型，北京医用离心机厂）。

2 方法与结果

2.1原位凝胶体外释放度测定方法的建立

2.1.1 供试液的制备 取醋酸氯己定原位凝胶50 mg，精密称定，注入EP管中，加入4 ml释放介质（蒸馏水），密闭，放入水浴恒温振荡器（37℃，振荡频率 55 次/min）中，分别于 4 h、8 h、10 h、12 h 将 EP管中释放液取出，同时补加相应量的释放介质，放回水浴恒温振荡器中。将取出的释放介质以蒸馏水稀释至适当浓度，即得。

2.1.2 对照品溶液的制备 取醋酸氯己定对照品10 mg，精密称定，于烧杯中，加适量蒸馏水溶解，转移至50 ml容量瓶中，用蒸馏水定容；精密量取2.0 ml于50 ml容量瓶中，以蒸馏水定容。

2.1.3 空白基质对照液的制备 精密称取不含醋酸氯己定的空白原位凝胶0.050 g，按照“2.1.1”项下方法制备空白基质对照液。

2.1.4 测定波长的选择 在200～400 nm波长下，以紫外可见分光光度仪分别以蒸馏水为对照测定空白基质对照液、供试液的紫外光谱图。结果分别见图 1、2。

图1 空白基质对照液紫外光谱图

图2 供试液紫外光谱图

由图1、图2可知，供试液中醋酸氯己定最大吸收波长为260 nm，空白基质对照液在260 nm处无吸收，故以释放介质蒸馏水为空白对照测定释放液中醋酸氯己定含量。

2.1.5 标准曲线 取10 mg醋酸氯己定对照品，精密称定，于烧杯中，加入适量蒸馏水溶解并转移到50 ml容量瓶中，用蒸馏水定容。分别移取0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0 ml于 50 ml容量瓶中， 加水定容， 配成浓度为3.2、4.0、4.8、5.6、6.4、7.2、8.0 μg/ml的溶液，在374.5 nm处测定其吸光度A。以浓度C（μg/ml）对吸收度A进行线性回归。回归方程：A=0.0818C+0.0096，r=0.9999。故醋酸氯己定在 3.2～8.0 μg/ml浓度范围符合Beer定律，吸收度与浓度呈良好的线性关系。见表1、图3。

图3 醋酸氯己定对照品标准曲线

2.1.6 精密度试验 取对照品溶液，在374.5 nm处测定吸光度，结果RSD=0.19%（n=5），表明精密度良好。

2.1.7 稳定性试验 取“2.1.5”项下供试液，测定其中醋酸氯己定含量，以第一次测量值为0时值，每隔2 h依次测定。由表2可知供试液中醋酸氯己定在12 h内是稳定的。

2.1.8 加样回收率试验 制备不含药的空白原位凝胶，照“2.1.3”项下方法进行释放度试验，获得12 h释放液即为空白基质对照液。分别精密量取“2.1.2”项下醋酸氯己定对照品溶液，3份不同量，于量瓶中，加入空白基质对照液稀释并定容至刻度，过滤，弃去初滤液，留存续滤液。分别精密量取续滤液适量于量瓶中，用蒸馏水稀释并定容至刻度，测定吸收度，计算回收率分别为101.2%、100.8%、99.6%；RSD（n=5）分别为 1.7%、0.85%、0.63%；回收率平均值为100.5%。方法准确度良好。

2.1.9 释放度测定 按“2.1.1及2.1.3”项下方法进行释放度测定并制备供试液，测定供试液中药物浓度，计算释放度。

2.2原位凝胶的制备取乙基纤维素、N-甲基吡咯烷酮、单油酸甘油酯适量，加热使乙基纤维素溶解，冷却至室温后缓缓加入醋酸氯己定粉末，边加边搅拌，待搅拌均匀后加热使其溶解即得。

2.3原位凝胶处方单因素考察

2.3.1 乙基纤维素对体外释放的影响 将处方中单油酸甘油酯、药物的浓度固定为0.2%、5%，设定乙基纤维素的系列浓度为19%、20%、21%。按照原位凝胶的制备方法，制备3批样品，按照“2.1.1”项下方法考察所制凝胶的体外释放情况。由图4可知，乙基纤维素的浓度越高，原位凝胶中药物释放的越慢，反之，释放的越快。

图4见封三。

2.3.2 单油酸甘油酯对体外释放的影响 将处方中乙基纤维素、药物的浓度固定为20%、5%，设定单油酸甘油酯的系列浓度为0.2%、0.3%、0.4%。按照原位凝胶的制备方法，制备3批样品，考察所制凝胶的体外释放情况。由图5可知，单油酸甘油酯浓度增大能延长原位凝胶中药物释放时间，反之，单油酸甘油酯浓度减小能缩短原位凝胶中药物释放时间。

表1 标准曲线数据表

表2 稳定性实验结果

图5见封三。

2.3.3 药物浓度对体外释放的影响 将处方中乙基纤维素、单油酸甘油酯剂的浓度固定为20%、0.2%，设定药物的系列浓度为4%、5%、6%。按照原位凝胶的制备方法，制备3批样品，考察所制凝胶的体外释放情况。由图6可知，药物的浓度越低，原位凝胶中药物释放的越快，反之，释放的越慢。

图6见封三。

图4 乙基纤维素的浓度对体外释放的影响

图5 单油酸甘油脂浓度对体外释放的影响

图6 药物的浓度对体外释放的影响

图7 3批最优处方原位凝胶的累积释放度

2.4正交实验优选处方通过单一因素试验结果，选择乙基纤维素的（A）、单油酸甘油酯（B）、药物（C）为考察因素，设定因素水平表（表3）。

表3 正交试验因素-水平表

以醋酸氯己定原位缓释凝胶累积释放时间为考察指标，采用L9（34）正交表安排实验，试验设计及试验结果 见表4。

表4 正交试验设计表及结果

由直观分析结果可知，各因素下各水平的实验结果的极差分别为 A=0.407、B=0.687、C=1.160，由极差大小可知C因素的极差最大，其余次之，故各因素对考察指标影响大小次序为C＞B＞A；另外通过比较各因素下各水平的指标总和可知：A、B、C的第三水平均较好，从而得出各因素的最优水平组合：A3B3C3即单油酸甘油酯0.4%，乙基纤维素 21%，药物 6%。以 SPSS 11.5统计软件对实验结果进行方差分析，结果上述3因素的P值均＜0.05，表明A、B、C三因素对试验结果均有显著性影响。

2.5处方与工艺的重复性考察按照最优处方和“2.2.1”项下的制备方法，制备三批醋酸氯己定原位凝胶，按照“2.2.5”项下方法测定其释放度和累积释放率，对处方和工艺的重现性进行考察。试验结果见表 5，图 7。

表5 3批最优处方原位凝胶的累积释药率（n=3）

图7见封三。

由图7可知，醋酸氯己定原位凝胶的处方和工艺的重现性良好。

3 讨论

注射用原位凝胶用于治疗牙周炎的优势在于其具有较好的流动性，可以通过特制的注射器直接注射于牙周袋内，且具有较好的粘附性，直接以不规则的固态形式粘附于牙周袋内，增加了患者的顺应性。

该实验在制备醋酸氯己定原位凝胶时有两种不同的方法加速溶解：一种是先用高温使乙基纤维素、单油酸甘油酯和NMP溶解再降温并加入药物使其溶解；第二种是用处方中一部分NMP溶解乙基纤维素和单油酸甘油酯，同时另一部分溶解药物，再将两者混合。从时间角度来看后者制备效率较高，但是制备的样品数量过少时宜采用第一种方法，以避免以第二种方法制备时中间品转移带来的损失和误差。

在进行原位凝胶体外释放度考察时，尽可能使不同样品注入释放液后形成的原位凝胶的形状保持一致，以防止原位凝胶形状及与释放液的接触面积不同引起释放度的差异，准确考察出选定因素对释放度的影响。

释放度是缓控释制剂的重要质量指标，决定着给药间隔和给药时间。原位凝胶注入兔牙周袋后，其中的有机溶剂NMP流出，牙龈液进入凝胶体，聚合物遇水沉淀形成固态药物储库，其中的药物缓慢释放出来。有机溶剂NMP流出的同时带出一部分药物-突释部分。

从上述原位凝胶的形成过程看，影响药物释放的因素有，有机溶剂的组成和性质、有机溶剂与辅料和药物的相互作用、辅料的性质、形成的原位凝胶的孔隙率、微孔的弯曲程度等微观结构。通过控制上述因素就能控制制剂的释放度，从而得到理想的原位凝胶制剂。该实验只对上述部分因素进行了考察，包含释放机制的研究有待下一步进行。