CC趋化因子受体因子4在年轻乳腺癌患者中的表达及与临床预后的相关性研究

黄其文，莫慧，黎新喜

茂名市人民医院病理科，广东茂名525000

乳腺癌发病原因暂未明确，在所有女性恶性肿瘤中位居首位，已对患者生命健康产生严重威胁。伴随社会经济迅速发展与生活压力不断增加，乳腺癌发病率也在逐年攀升，且发病年龄呈现日渐年轻化趋势[1-2]。乳腺并非维持人体生命活动的重要器官，原位乳腺癌通常不会对患者的生命安全造成影响，然而由于乳腺细胞失去了正常细胞的特性，细胞间连接较为松散，且易脱落。而癌细胞一旦脱落，且就会随着血液或淋巴液扩散至患者全身，形成转移，从而对患者的生命安全造成影响，已逐渐成为威胁女性身心健康的一项重大公共卫生问题。该研究选取该院于2014年1月—2015年12月间收治的100例为研究对象，采用免疫组织化学检测癌组织及癌旁正常乳腺组织中CCR4的表达，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

统计该院收治的乳腺癌患者（剔除新辅助化疗及资料不全患者）的临床病理资料，选取年轻乳腺癌患者（＜35岁）、非年轻乳腺患者（≥35岁）各自50例，年轻乳腺癌患者平均年龄（32.78±1.54）岁，非年轻乳腺患者平均年龄（61.27±5.76）岁，两组一般资料对比差异无统计学意义（P＞0.05），存在可比性，见表1。

表1一般资料对比Table 1 Comparison of general information

纳入标准：①均为无合并远处脏器转移的原发乳腺癌；②术后均接受辅助化疗，化疗方案和周期均个体化；③所有患者术前均未行放化疗。

排除标准：①研究者判断生存期＜6个月或其他原因不能完成该研究者；②具有精神意识障碍的患者；③中途退出或转院者。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂耗材 鼠抗人CCR4单克隆抗体、改进型柠檬酸钠抗原修复液、DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒、苏木素染色液、中性树胶封片剂和磷酸盐缓冲液(phosphate buff-ered saline，PBS)等。实验所需的其他仪器由该院病理科提供。

1.2.2 主要实验仪器设备 ①半自动石蜡转轮切片机（RM2245）；②恒温培养箱；③冰箱；④光学显微镜（BX-51型）；⑤DP-70图象采集系统。

1.2.3 实验方法 所有标本均经过柠檬酸缓冲液（pH=6.0）高温高压抗原修复，采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶免疫组化法（SP法）免疫组织化学法染色。组织蜡块4μm切片，置于二甲苯、梯度酒精水化，过氧化氢浸泡去除内源性过氧化氢酶，柠檬酸修复抗原，血清封闭液封闭，一抗4℃孵育过夜，二抗室温孵育2 h，DAB显色5 min，苏木素复染，依次梯度酒精、二甲苯脱水，中性树胶封片，镜下观察。

1.2.4 结果判定 在双盲情况下，由两位主治医生职称以上病理医生独立评分。评分标准如下：①按阳性细胞百分率记分：＜5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%以上为4分；②按着色强度记分，分为4个等级：无着色为0分，淡黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分。两者积分乘积＜6分为低表达（阴性），≥6分为高表达（阳性）。

1.2.5 随访及生存时间 随访36个月，记录总生存时间（手术当天至患者死亡或随访截止）及无病生存时间（手术当天至第1次转移或复发）。

1.3 统计方法

应用SPSS 23.0统计学软件进行数据分析，率的比较应用χ2检验，相关统计量应用非参数Spearman相关，根据需要并做Fisher精确检验，P＜0.05为差异有统计学意义。单因素生存分析应用Log-rank检验，对于P＜0.05的指标应用Cox风险模型进行多因素分析。

2 结果

2.1 研究对象CCR4表达情况

年轻组与非年轻组在CCR4表达上，乳腺癌组织表达率均比癌旁组织高，差异有统计学意义（P＜0.05），而年轻组的CCR4高表达率（58.00%）显著比非年轻组（44.00%）高，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2研究对象CCR4表达情况[n（%）]Table 2 Research objects CCR4 expression[n(%)]

2.2 CCR4与乳腺癌临床病理因素之间的关系

年轻组的肿瘤组织学分级、肿瘤直径、淋巴结转移的CCR4高表达率显著比非年轻组高，差异有统计学意义（P＜0.05），见表3。

表3 CCR4与乳腺癌临床病理因素之间的关系Table 3 Relationship between CCR4 and clinical pathological factors of breast cancer

2.3 年轻组CCR4蛋白的表达与患者的预后分析

所有患者均得到有效随访，中位随访时间为术后21（6～36）个月。其中年轻组19例患者发生乳腺癌复发转移，3年治愈率62.00%（31/50）。根据CCR4蛋白表达情况，将患者分为CCR4阳性组（n=22）和CCR4阴性组（n=28），Kaplan-Meier分析结果显示，CCR4阳性组患者的无瘤生存期（DFS）为（20.63±2.75）个月；CCR4阴性组患者DFS为（29.94±2.11）个月；两组之间差异有统计学意义（t=13.554，P＜0.05）。

3 讨论

虽然近些年来随着乳腺癌筛查工作的普遍开展及乳腺癌综合治疗的开展，使得乳腺癌的病死率明显降低，然而其仍然会给患者的身心健康造成严重的威胁。尤其是近些年来，随着社会的高速发展及人们生活压力的不断增加，乳腺癌的发病年龄也逐渐趋向年轻化[7-8]。

近年来，新生淋巴管和新生血管的研究已成为肿瘤转移研究的热点[9-10]。癌症患者的死亡主要是由于癌细胞向远处器官扩散所致，淋巴结受累是肿瘤转移的重要特征之一。CCR4在免疫和炎症反应期间，可促进淋巴细胞运输和归巢到淋巴结，在肿瘤淋巴管和血管的形成中起着重要作用[11]。该次研究结果表明，年轻组与非年轻组在CCR4表达上，乳腺癌组织表达率均比癌旁组织高（P＜0.05），而年轻组的CCR4高表达率（58.00%）显著比非年轻组（44.00%）高（P＜0.05），提示CCR4可能促进肿瘤的发生发展，王保国等[12]学者在相关研究中得出，年轻乳腺癌患者的CCR4高表达率为49.67%，要高于非年轻乳腺癌患者的CCR4高表达率41.33%，与该文所得结果相近。年轻组的肿瘤组织学分级、肿瘤直径、淋巴结转移的CCR4高表达率显著比非年轻组高（P＜0.05），乳腺癌CCR4高表达组无瘤生存期（DFS）显著低于CCR4低表达组的无瘤生存期（DFS），Kaplan-Meier生存分析显示，两组之间DFS差异有统计学意义（P＜0.05），表明CCR4的表达水平与乳腺癌患者预后存在一定联系。

综上所述，趋化因子及受体作用轴在肿瘤的发生、发展中，CCR4在乳腺癌组织上呈高表达，年轻乳腺癌患者中的表达率相比非年轻乳腺癌患者更高，CCR4在年轻乳腺癌患者中呈高表达，其与乳腺癌患者预后呈正相关，CCR4参与到乳腺癌的发生发展中，影响患者预后。