固醇调节元件结合蛋白在肥胖型子宫内膜癌中的表达及临床意义

施锦梅

（台州市立医院，浙江 台州 318000）

子宫内膜癌与高血压、高血脂、肥胖因素有关，尤其是肥胖因素，约有80%的子宫内膜癌患者存在超重或肥胖[1-2]。脂肪酸合成的显著增加是肿瘤细胞迅速增殖的重要标志。固醇调节元件结合蛋白（Sterol Regulatory Element Binding Protein，SREBP）由SREBF-1基因编码，是脂质生成基因的主要调节因子，通过结合于脂质合酶基因的启动子/增强子的固醇调节元件，激活其靶基因转录，调控胆固醇和脂质的合成代谢[3]。研究证实，SREBP与肥胖密切相关，且在子宫内膜癌中过度表达，内源性SREBP参与子宫内膜癌的发生和发展。因此，推测SREBF基因可能会对子宫内膜癌的诊断具有一定的帮助，且可能在不同体型患者中存在表达差异。本研究通过检测肥胖型子宫内膜癌患者的SREBPs水平，旨为无创诊断子宫内膜癌提供一种新的思路，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 以体质量指数（BMI）≥26kg/m2为肥胖标准，选择本院2016年2月-2018年12月收治的肥胖型子宫内膜癌患者62例作为肥胖组，非肥胖型子宫内膜癌患者62例作为非肥胖组，两组均经病理确诊为子宫内膜癌。排除标准：（1）合并有血液系统疾病者；（2）伴有心、肝、肾、肺等严重脏器疾病者；（3）近半年内使用过抗凝药物、止血药物者；（4）妊娠或哺乳期患者。另选择同期体检健康但BMI≥26kg/m2的女性60例作为健康组，三组年龄比较差异无统计学意义（P＞0.05），其中肥胖组和非肥胖组病理分级差异无统计学意义（P＞0.05），肥胖组和健康组BMI比较差异无统计学意义（P＞0.05），详见表1。本研究经本院伦理委员会审批通过，且患者知情同意。

表1 三组一般资料比较

1.2 方法 早晨（7：00～9：00）在无菌条件下抽取所有对象的空腹静脉血5mL，使用血凝管（美国BD公司，规格：12mm×75mm），预置 0.3mL 的 109mmol/L枸橼酸钠，并在20分钟内以3000r/min离心10～20分钟，提取血清。离心仪器（北京雷勃尔离心机有限公司，型号：LDZ5-2）。应用蛋白免疫印迹分析法检测血清中的 SREBPs（SREBP1、SREBP2）浓度，抗-SREBPs（K-10和 H-160）抗体购自 Santa Cruz公司。检测人员严格按照试剂说明操作：吸弃各处理组上清液，预冷PBS冲洗2次，每孔加入预冷RIPA细胞裂解液，冰上裂解，刮取细胞，4℃下10000r/min离心10分钟。BCA法测定细胞蛋白浓度。制备十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶（10%）和浓缩胶（5%）。上样总蛋白 40μg，加入电泳缓冲液，电泳电压及时间（浓缩胶为80V，30分钟；分离胶为100V，1小时）。再将蛋白转移至聚偏氟乙烯（PVDF）膜上（110V，90 分钟）。 5%BSA 封闭1 小时，加入相应一抗（1：1000），4℃摇床孵育过夜。TBST洗膜3次，辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔或山羊抗小鼠第二抗体（1∶5000），室温孵育1小时。洗膜5次后电化学发光显色、拍照，根据吸光度计算相对表达量。

1.3 观察指标 （1）观察各组的SREBP1、SREBP2相对表达水平，并对比各组之间的差异。（2）观察肥胖组不同病理分期的SREBP1、SREBP2水平，并分析SREBP1、SREBP2表达在肥胖型子宫内膜癌中的特异性和敏感度。

1.4 统计学处理 应用SPSS23.0软件进行统计学分析，计量资料用（±s）表示，三组均数比较采用方差分析，两两比较采用q检验；通过ROC曲线下面积（AUC）评价各指标的诊断效能。

2 结果

2.1 不同组别SREBP1、SREBP2相对表达水平 三组SREBP1、SREBP2相对表达水平差异有统计学意义（P＜0.05）；健康组 SREBP1、SREBP2 相对表达水平明显低于非肥胖组和肥胖组，差异有统计学意义（P＜0.05）；肥胖组 SREBP1、SREBP2 相对表达水平明显高于非肥胖组，差异有统计学意义 （P＜0.05）。 详见表 2。

表2 三组SREBP1、SREBP2相对表达水平对比（±s）

表2 三组SREBP1、SREBP2相对表达水平对比（±s）

与非肥胖组比较*P＜0.05；与健康组比较#P＜0.05

组别 n SREBP1 SREBP2肥胖组 62 0.0913±0.0223*# 0.0787±0.0238*#非肥胖组 62 0.0541±0.0113# 0.0448±0.0132#健康组 60 0.0231±0.0032 0.0189±0.0043 F - 6.892 7.381 P值 - 0.015 0.006

2.2 不同分期肥胖型子宫内膜癌患者SREBP1、SREBP2相对表达水平 肥胖型子宫内膜癌I期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期四组SREBP1、SREBP2相对表达水平均依次升高，且差异有统计学意义（P＜0.05），四组间两两比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。详见表3。

表3 肥胖型子宫内膜癌各期SREBP1、SREBP2相对表达水平（±s）

表3 肥胖型子宫内膜癌各期SREBP1、SREBP2相对表达水平（±s）

分期 n SREBP1 SREBP2 I期 20 0.0738±0.0052 0.0588±0.0035Ⅱ期 16 0.0852±0.0045 0.0672±0.0042Ⅲ期 14 0.0987±0.0042 0.0842±0.0033Ⅳ期 12 0.1196±0.0031 0.0952±0.0073 F - 8.776 7.618 P值 - 0.003 0.007

3 讨论

子宫内膜癌具有发病率高、侵袭性强、预后差等特点，已成为威胁女性健康的主要疾病[5]。生物标记物是指人体尿液、血液或组织中能检测到反应疾病状态的分子指标，其水平可标记系统、组织、细胞、亚细胞及器官功能或结构发生改变或可能发生改变的生物学指标，可用于评估病情进展[6]。目前，对于肥胖型子宫内膜癌的早期诊断仍缺乏有效指标，导致患者预后较差[7-8]。因此，找到早期检测肥胖型子宫内膜癌的有效生物指标可改善患者预后。

SREBPs是脂质体内平衡的主要调节剂，也是碱性螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链转录因子[9]。SREBPs在人体内包含三种亚型：SREBP1a、SREBP1c、SREBP2。其中 SREBP1a、SREBP1c由单个基因 SREBP1编码，主要控制脂质合成的相关基因水平表达；SREBP2由单独基因SREBP2编码，主要调控胆固醇基因的水平表达。SREBPs作为转录因子家族有独特性，它们被合成为非活性的前体，然后结合到内质网膜上，而这一加工过程受细胞内甾醇水平控制。甾醇水平低下时，SREBPs的前体被护送到高尔基体，经过两步切割，产生SREBPs活性核；当甾醇水平增高时，SREBPs的前体将保持在内质网中[10]。因此，SREBPs中的每个亚型的独特调节和激活属性均会促进脂质代谢的调控。而SREBP1亚型较活跃，是细胞中首先表达脂肪酸、胆固醇所需。肿瘤细胞的增长对形成新的细胞膜具有高需求，在浸润性癌中，SREBP1靶向增加脂肪酸合成酶代谢基因转录水平，从而增加脂质生成，致使增殖、侵袭、迁移的癌细胞增加[11]。有研究证实，脂质生成在许多肿瘤疾病中均升高[12-13]。但SREBPs在不同程度的子宫内膜癌中的作用知之甚少。国外有研究发现，脂质合成相关的基因编码的脂肪酸合成酶在I期子宫内膜癌中表达过度[14]，但其基本机制仍未阐明。

本研究发现，健康组的SREBP1、SREBP2相对表达水平明显低于非肥胖组和肥胖组，提示SREBPs在子宫内膜癌中的表达明显升高；肥胖组的SREBP1、SREBP2相对表达水平明显高于非肥胖组，说明子宫内膜癌肥胖患者SREBPs表达更高，提示SREBPs通过调控胆固醇和脂肪酸合成所需相关基因的表达来调节体内脂质稳态，其原因可能是SREBP1、SREBP2在癌细胞中能通过原癌信号分子的激活来调节肿瘤代谢。SREBPs作为脂质合成基因表达的主要转录因子家族，相比正常子宫内膜，其在I期子宫内膜癌中的表达即相应升高。研究还发现，肥胖型子宫内膜癌I期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期患者的SREBP1、SREBP2相对表达水平依次升高（P＜0.05），说明 SREBP1、SREBP2相对表达量随病情的严重程度进一步上调，其原因可能是肿瘤疾病的生长由细胞增殖和细胞死亡的净收益导致SREBP1水平上升，加上逃避细胞的依赖性死亡，也有助于细胞数量的净增长。

肥胖型子宫内膜癌患者中SREBPs水平会随着病情的恶化而升高，SREBP1和SREBP2具有检测方便、重复性强的特点，对肥胖型子宫内膜癌病情发展与预后的判断具有一定的优势。