乌蔹莓薄层色谱鉴别方法的建立

2020-07-23曲晓明罗斐然

临床医药文献杂志(电子版) 2020年32期

曲晓明，刘艳，张慧，周银，罗斐然

（六盘水市食品药品检验检测所，贵州六盘水 553001）

乌蔹莓为葡萄科植物乌蔹莓Cayratia japonica(Thunb.)Gagnep.的干燥全草。生于海拔300～2500米的山谷林中或山坡灌丛。[1]收录于2003版《贵州省中药、民族药质量标准》中。性味苦、酸，寒。归心、肝、胃经；具有清热利湿，解毒消肿。用于热毒痈肿，疔疮，丹毒，咽喉肿痛，蛇虫咬伤，水火烫伤，风湿痹痛，黄疸，泻痢，白浊。乌蔹莓中所含活性成分为：木犀草素，芹菜素，柠檬酸三乙酯，吲哚-3-甲醛，秦皮乙素，β-谷甾醇，邻苯二甲酸二乙基己酯，反式咖啡酸乙酯，木犀草素7-O-葡萄糖苷，胡萝卜苷等。现采用薄层色谱法鉴别乌蔹莓，以β-谷甾醇为对照，方法操作简便，结果易于辨别。

1 仪器与材料

1.1 仪器

DHG-9202电热恒温干燥箱，SB25-12DTDN超声波提取器(宁波新芝生物科技股份有限公司)，梅特勒ME104E电子天平。硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂，批号：20180902）（青岛基亿达硅胶试剂厂批号20181225）

1.2 材料

β-谷甾醇（中国食品药品检定研究院，批号110851-201608，含量97.0%），对照品购于中检院。所用试剂为分析纯。乌蔹莓样品采自贵州各地区，共7批。六枝特区大用镇李寨样品经贵阳中医学院魏升华教授鉴定为葡萄科植物乌蔹莓Cayratia japonica(Thunb.)Gagnep.的干燥全草。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

称取β-谷甾醇对照品适量，置于10 ml量瓶中，加入无水乙醇溶解定容，配制成1 ml含0.5 mg溶液，作为对照液。

2.2 供试品溶液的制备

取7批样品粉末2 g，加无水乙醇30 ml，超声处理30分钟，滤过，滤过，滤液浓缩至约2 ml，作为供试液。

2.2.1 提取方法的考察：称取W1样品粉末(过3号筛)2 g 3份，分别按下述方法处理后作为供试液:①加乙醇30 mL，超声处理40分钟，滤过，滤液浓缩至约2 ml，作为供试液。②加无水乙醇30 mL，超声处理40分钟，滤过，滤液浓缩至约2 ml，作为供试液。③加无水乙醇30 mL，水浴回流40分钟，过滤，滤液浓缩至约2 ml，作为供试液。另取β-谷甾醇对照品，加无水乙醇制成1 ml含0.5 mg溶液，作为对照液。取上述供试液及对照液各5 μL，薄层板硅胶G，展开剂三氯甲烷-丙酮（25:1），显色剂10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点清晰。结果:方法①主斑点不清晰;方法②主斑点清晰，易于辨别;方法③主斑点有拖尾。方法②斑点无拖尾，且清晰，故选择方法②为供试品溶液的制备方法。

2.3 点样

用毛细管吸取供试液和对照液各5μl。

2.3.1 点样量的考察：取W1供试品按提取方法②制成供试液，取供试液2、3、5、10μL，β-谷甾醇对照品溶液5 μL，薄层板硅胶G，展开剂三氯甲烷-丙酮（25:1），显色剂10% 硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点清晰，结果供试液以点样量5 μL效果最佳。故选5 μL为乌蔹莓薄层色谱鉴别的点样体积。

2.4 展开

以三氯甲烷-丙酮（25:1）为展开剂，展开，取出，晾干。

2.4.1 展开系统的考察：取W1供试品按提取方法②制成供试品溶液，取供试液和对照液各5 μL，点于薄层板上，分别在下述展开系统中展开:分别以①硅胶G板，环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸（9:2:0.2），②硅胶G板，三氯甲烷-丙酮（25：1），③硅胶G板，三氯甲烷-甲醇（20：1）作为展开剂，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点清晰。结果:系统①分离效果差，斑点不清晰;②分离效果好，主斑点展开，斑点清晰；③主斑点未展开，分离效果差。因此选择②为乌蔹莓薄层色谱鉴别的展开系统。

2.5 显色

10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。

2.6 耐用性考察

①湿度的考察：进行了高湿度（7 4%）、中等湿度（54%）和低湿度（26%）的考察，结果均较好。②温度的考察：进行了低温(4℃)、室温(25℃)、高温(40℃)的考察，结果表明在上述条件下都能较好分离。③不同生产厂家薄层硅胶G板的考察：共试验两个厂家的薄层硅胶G板，分别为青岛海洋化工有限公司及青岛基亿达硅胶试剂厂，结果未有明显差异。

2.7 结果

见图1。

图1 乌蔹莓TLC 鉴别图

2.8 乌蔹莓的薄层色谱鉴别

取供试品粉末2 g，加无水乙醇40 ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至约2 ml，作为供试品溶液。另取β-谷甾醇对照品，加无水乙醇制成1 ml含0.5 mg溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2]试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各5 μl，薄层板硅胶G ，展开剂三氯甲烷-丙酮（25：1），显色剂10% 硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，呈相同颜色的斑点。