博落回中四种生物碱的薄层鉴别研究

陈燕乐，杨广民，唐昭山，2，曾建国

(1.湖南美可达生物资源股份有限公司，长沙 410331；2.湖南省中药提取工程研究中心，长沙410329； 3.湖南农业大学湖南省中兽药重点实验室，长沙410128；4.湖南省兽用中药资源与中兽药创制国家地方联合工程研究中心，长沙410128)

博落回是一种以生物碱为主要活性成分的民间传统中药，具有散瘀、祛风、解毒、止痛及杀虫等功效[1]。该植物为罂粟科博落回属的多年生草本植物，全属共两种，包括博落回Macleayacordata(Willd.)R.Br. 与小果博落回(Macleayamicrocarpa(Maxim.)Fedde)，以博落回应用为主，但小果博落回也作博落回使用[1～2]。博落回中的主要生物碱为原阿片碱、别隐品碱、血根碱和白屈菜红碱这四种生物碱，富集于博落回的果荚和叶片中。博落回散和博落回注射液都是以博落回果荚为原料进行开发的新兽药，其它药用部位现在也在进行系列产品开发。目前应用液相方法检测生物碱在博落回各个部位中的含量报道很多[3～6]，未见报道相关的薄层方法定性鉴别，但在博落回药材质量检测中薄层鉴定也有很重要的意义，故对博落回各个部位中四种生物碱进行薄层鉴别研究。

1 材 料

1.1 仪器 超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；十万分之一电子天平(梅托勒-托利仪器(上海)有限公司)；紫外三用仪(杭州齐威仪器有限公司)；硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂)；微量点样管；玻璃喷雾瓶；双槽玻璃展开缸。

1.2 试剂与药品 原阿片碱(110853-201805)，血根碱(510001-201101)，白屈菜红碱(111718-201402)均购自中国药品检验研究院；别隐品碱(170501，湖南美可达生物资源股份有限公司自制)；甲醇、盐酸、二甲苯、氯仿、环已烷、丙酮、氨水和碘化铋钾均为分析纯试剂。博落回果、博落回叶、小果博落回果及小果博落回叶均来自湖南美可达生物资源股份有限公司采购，由湖南中医药大学杨广民教授分别鉴定来源于博落回Macleayacordata(Willd.)R.Br. 与小果博落回(Macleayamicrocarpa(Maxim.)Fedde)。

2 方法与结果

2.1 博落回供试品溶液

2.1.1 博落回果供试品溶液 取博落回果粉末0.5 g，加甲醇-1%盐酸水溶液(50 ∶50)10 mL，超声处理1 h，滤过，滤液作为供试品溶液。

2.1.2 博落回叶供试品溶液 取博落回叶粉末0.5 g，加甲醇-1%盐酸水溶液(50 ∶50)25 mL，超声处理1 h，滤过，滤液作为供试品溶液。

2.1.3 小果博落回果供试品溶液 取小果博落回果粉末0.5 g，加甲醇-1%盐酸水溶液(50 ∶50)25 mL，超声处理1 h，滤过，滤液作为供试品溶液。

2.1.4 小果博落回叶供试品溶液 取小果博落回叶粉末1 g，加甲醇-1%盐酸水溶液(50 ∶50)10 mL，超声处理1 h，滤过，滤液作为供试品溶液。

2.2 对照品溶液 分别取原阿片碱，别隐品碱，血根碱和白屈菜红碱对照品，加甲醇-1%盐酸水溶液(50 ∶50)制成每1 mL分别含原阿片碱1 mg,别隐品碱1 mg，血根碱1 mg和白屈菜红碱1 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.3 实验结果

2.3.1 二甲苯-甲醇 照薄层色谱法(附录0502)试验，吸取上述4种生物碱对照品溶液，各样品供试品溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二甲苯-甲醇(5 ∶1)为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，立即展开，取出，晾干。在可见光下(图1)，原阿片碱和别隐品碱不显色，血根碱和白屈菜红碱分别显红色和黄色，博落回果和小果博落回叶供试品溶液在血根碱和白屈菜红碱相应位置显相同颜色的斑点；在254 nm荧光下(图2),原阿片碱和别隐品碱无荧光，博落回果和小果博落回叶供试品溶液在血根碱和白屈菜红碱相应位置显明显的相同颜色的荧光斑点，博落回叶和小果博落回果供试品溶液在血根碱和白屈菜红碱相应位置显较弱的荧光斑点；喷碘化铋钾试液后(图3),博落回果供试品溶液在和原阿片碱、别隐品碱、血根碱和白屈菜红碱对照品相应位置上显相同颜色的斑点，博落回叶供试品溶液在和原阿片碱、别隐品碱相应位置上显相同颜色的斑点，小果博落回果供试品溶液在和别隐品碱对照品相应位置上显相同颜色的斑点，小果博落回叶供试品溶液在和血根碱、白屈菜红碱和别隐品碱对照品相应位置上显相同颜色的斑点。

图1 博落回TLC图谱(日光下)Fig 1 TLC chromatogram of Macleaya cordata and M.microcarpa(sunlight)

图2 博落回TLC图谱(254 nm荧光)Fig 2 TLC chromatogram of Macleaya cordata and M.microcarpa(UV254nm)

图3 博落回TLC图谱(碘化铋钾试液显色)Fig 3 TLC chromatogram of Macleaya cordata and M.microcarpa (react with Iodized bismuth potassium solution)

2.3.2 环已烷-丙酮 照薄层色谱法(附录0502)试验，吸取上述原阿片碱和别隐品碱对照品溶液，各样品供试品溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环已烷-丙酮(3∶2)为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，立即展开，取出，晾干，喷碘化铋钾试液后(图4),博落回果和博落回叶供试品溶液在原阿片碱和别隐品碱对照品相应位置上显相同颜色的斑点，小果博落回果和小果博落回叶供试品溶液在别隐品碱相应位置上显相同颜色的斑点。

图4 博落回TLC图谱(碘化铋钾试液显色)Fig 4 TLC chromatogram of Macleaya cordata and M.microcarpa (react with Iodized bismuth potassium solution)

2.3.3 氯仿-二甲苯-甲醇-氨水(50∶10∶1∶0.1) 照薄层色谱法(附录0502)试验，吸取上述4种生物碱对照品溶液，各样品供试品溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-二甲苯-甲醇-氨水(50∶10∶1∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，在可见光下(图5)，原阿片碱和别隐品碱不显色，血根碱和白屈菜红碱分别显红色和黄色，博落回果和小果博落回叶供试品溶液在血根碱和白屈菜红碱相应位置显相同颜色的斑点；在254 nm荧光下(图6),原阿片碱和别隐品碱无荧光，博落回果和小果博落回叶供试品溶液在血根碱和白屈菜红碱相应位置显明显的相同颜色的荧光斑点，博落回叶和小果博落回果供试品溶液在血根碱和白屈菜红碱相应位置显较弱的荧光斑点；喷碘化铋钾试液后(图7),博落回果和小果博落回叶供试品溶液在和血根碱、白屈菜红碱对照品相应位置上显相同颜色的斑点，原阿片碱对照品展开很小的距离，别隐品碱对照品基本上不展开，博落回果、博落回叶和小果博落回叶供试品溶液在和原阿片碱对应位置上显相同颜色的斑点。

图5 博落回TLC图谱(可见光)Fig5 TLC chromatogram of Macleaya cordata and M. microcarpa(sunlight)

图6 博落回TLC图谱(254 nm)Fig6 TLC chromatogram of Macleaya cordata and M. microcarpa(UV254nm)

图7 博落回TLC图谱(碘化铋钾试液显色)Fig7 TLC chromatogram of Macleaya cordata and M.microcarpa (react with Iodized bismuth potassium solution)

3 讨论与结论

3.1 讨论

博落回中的四种生物碱在各个部位都有分布，但是含量相差较大。博落回果中以血根碱和白屈菜红碱为主，博落回叶中以原阿片碱和别隐品碱为主，小果博落回果中以别隐品碱为主，而小果博落回叶中以血根碱和白屈菜红碱为主，故薄层定性鉴别以主要成份为鉴别特征。

原阿片碱、别隐品碱、血根碱和白屈菜红碱这种四种生物碱遇碘化铋钾试液显红色。血根碱和白屈菜红碱这两种生物碱在可见光下分别显红色和黄色，在254 nm紫外光下有荧光，但是原阿片碱和别隐品碱在可见光下没有颜色，紫外光下也没有荧光，故以碘化铋钾试液显色为好。

氯仿-二甲苯-甲醇-氨水(50 ∶10 ∶1 ∶0.1)系统能较好的分离血根碱和白屈菜红碱。环己烷-丙酮(3 ∶2)能较好的分离原阿片碱和别隐品碱；二甲苯-甲醇(5 ∶1)能较好的分离四种生物碱，但是血根碱和白屈菜红碱分离不算特别好，原阿片碱和别隐品碱的比移值(Rf)比较小。

兽药国家标准收载的博落回注射液质量标准[7]中，使用氯仿-甲醇-氨水(60 ∶1 ∶0.1)系统，博落回总碱作为对照，展距为5 cm。我们经过液相和薄层鉴别，博落回总碱中主要含有血根碱和白屈菜红碱，该系统能对血根碱和白屈菜红碱进行较好的分离，但是斑点有拖尾，我们在该展开剂的基础上增加二甲苯能有效降低拖尾现像。

湖南省地标《博落回叶》[8]薄层中曾使用环己烷-丙酮(2 ∶1)分离鉴定原阿片碱和别隐品碱，该标准由本单位研究申报，在后续的研究中发现样品溶液不用经过萃取也能较好的鉴别出生物碱成份。经过后期的研究，对博落回叶薄层条件进行了简化和优化。

3.2 实验结论

3.2.1 博落回果薄层鉴定条件 取本品粉末0.5 g，加甲醇-1%盐酸水溶液(50 ∶50)10 mL，超声处理1 小时，滤过，滤液作为供试品溶液。另取血根碱盐酸盐和白屈菜红碱对照品，加甲醇-1%盐酸水溶液(50 ∶50)制成每1 mL各含血根碱1 mg和白屈菜红碱1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录0502)试验，吸取上述三种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-二甲苯-甲醇-氨水(50 ∶10 ∶1 ∶0.1)为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，立即展开，取出，晾干，喷碘化铋钾试液显色，供试色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。

3.2.2 博落回叶薄层鉴定 取本品粉末0.5 g，加甲醇-1%盐酸水溶液(50 ∶50)25 mL，超声处理1 h，滤过作为供试品溶液。取原阿片碱和别隐品碱对照品，加甲醇制成每1 mL各含原阿片碱 1 mg和别隐品碱1 mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录0502)试验，吸取上述三种溶液各2 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮(2 ∶1)为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，喷碘化铋钾试液显色，供试色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点。

3.2.3 小果博落回果薄层鉴定 取本品粉末0.5 g，加甲醇-1%盐酸水溶液(50 ∶50)25 mL，超声处理60 min，滤过，滤液作为供试品溶液。另取别隐品碱对照品，加甲醇制成1 mL约含0.4 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录0502)试验，吸取上述两种溶液各 3 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮(3 ∶2)为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，喷碘化铋钾试液显色，供试色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点。

3.2.4 小果博落回叶薄层鉴定 取本品粉末约1 g，加甲醇-1%盐酸水溶液(50 ∶50)10 mL，超声处理60 min，滤过，滤液作为供试品溶液。另取血根碱盐酸盐和白屈菜红碱对照品，加甲醇-1%盐酸水溶液(50 ∶50)分别制成每1 mL含血根碱1 mg和白屈菜红碱1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录0502)试验，吸取上述三种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-二甲苯-甲醇-氨水(50 ∶10 ∶1 ∶0.1)为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，立即展开，取出，晾干，喷碘化铋钾试液显色，供试色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。