高效液相色谱法测定止喘灵注射液中盐酸麻黄碱、丁溴东莨菪碱和苦杏仁苷含量

2020-07-15崔雅慧金志国

中国药业 2020年13期

崔雅慧，金志国

（首都医科大学附属北京世纪坛医院药剂科，北京 100038）

目前，止喘灵注射液在我国临床应用广泛，加强对其质量控制对于保障患者的用药安全，具有重要意义[1]。止喘灵注射液是由麻黄、洋金花、苦杏仁和连翘4 味药材经煎煮、过滤、浓缩、沉淀、杀菌等工艺加工而成的中药注射剂[2]，具有宣肺平喘、祛痰止咳的功效，临床常用于治疗痰浊阻肺、肺失宣降所致的哮喘、咳嗽、胸闷、痰多等症，对支气管哮喘、喘息性支气管炎效果明显[3－4]。方中麻黄有发汗散寒、宣肺平喘、利水消肿等功效[5－8]，洋金花有平喘止咳、解痉定痛等功效[9－13]，苦杏仁有降气止咳平喘、润肠通便等功效[14－17]。2015 年版《中国药典（一部）》中，止喘灵注射液含量测定项不能更好地控制该产品的质量。该药方中麻黄为君药，洋金花为臣药，苦杏仁为佐药，连翘为使药，麻黄、洋金花和苦杏仁3 味药材成分最大，吸收波长接近。因此，本研究中建立了测定止喘灵注射液中盐酸麻黄碱、东莨菪碱和苦杏仁苷含量的高效液相色谱(HPLC)法。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Shimadzu Prominence LC －20A 型高效液相色谱仪，包括SPD－M20A 型PDA 检测器、SIL －20A 型自动进样器、CTO －20A 型自动柱温箱、LC－Solution 型色谱工作站（日本岛津公司）；Quintix65 －1CN 型电子天平（德国赛多利斯公司，精度为十万分之一）；Waters Sunfire C18色谱柱（美国沃特世公司）；FRQ－1006T 型超声波仪（杭州法兰特科技公司，功率为300 W，频率为42 kHz）；Milli－Q advantage A10 型超纯水系统（美国密理博公司）。

1.2 试药

止喘灵注射液（江苏苏中药业有限公司，批号分别为19030212，19040415，19050311，规格为每支2 mL）；盐酸麻黄碱对照品（批号为171241 －201809，含量以100.0% 计），丁溴东莨菪碱对照品（批号为100130 －201103，含量以99.7% 计），苦杏仁苷对照品（批号为110820 －201808，含量以88.2%计），均购于中国食品药品检定研究院；甲醇、乙腈均为色谱纯（Tedia 试剂公司）；磷酸、三乙胺、十二烷基苯磺酸钠均为分析纯（国药集团）；试验用水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Waters Sunfire C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流速：1.0 mL ／min；流动相：乙腈（A）－0.1%磷酸溶液（B，含0.05%三乙胺和0.02%十二烷基苯磺酸钠，磷酸调节pH 至6.0），梯度洗脱，洗脱程序为0 ～7 min时3%A，7 ～26 min 时3%A ～58%A，26 ～29 min 时58%A ～3%A，29 ～34 min 时3%A；检测波长：210 nm；柱温：28 ℃；进样量：20 μL。

2.2 溶液制备

取盐酸麻黄碱对照品25.00 mg、丁溴东莨菪碱对照品25.07 mg、苦杏仁苷对照品28.34 mg，精密称定，置25 mL 容量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，摇匀，即得对照品混合贮备溶液，精密移取该贮备溶液1.0 mL，置50 mL 容量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，摇匀，即得对照品溶液。取样品(批号为19030212)，精密量取1.0 mL，置25 mL 容量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，摇匀，用0.45 μm 滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得供试品溶液。按处方比例和制备工艺制备缺麻黄、洋金花和苦杏仁的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验：取试剂空白溶液及2.2 项下3 种溶液，按拟订色谱条件进样分析。色谱图见图1。可见，阴性对照品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相同保留时间处无干扰峰，表明方法专属性良好。

线性关系考察：精密移取2.2 项下对照品混合贮备溶液，加流动相制成含盐酸麻黄碱、苦杏仁苷和丁溴东莨菪碱质量浓度依次为0.3，0.6，1.0，3.0，6.0，10.0 μg ／mL的标准曲线溶液，按拟订色谱条件依次进样分析，记录色谱图。以质量浓度（X）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，绘制标准曲线。结果3 种成分质量浓度均在0.3 ～10.0 μg ／mL 范围内与峰面积线性关系良好。详见表1。

表1 各成分线性关系考察结果( n ＝6)

稳定性试验：取样品（批号为19030212），依法制备供试品溶液，室温下放置0，3，6，9，12，18，24 h 时分别取样，按拟订色谱条件分别进样分析，记录色谱图，根据峰面积计算RSD。结果盐酸麻黄碱、丁溴东莨菪碱和苦杏仁苷峰面积的RSD 分别为2.34%，1.91%，1.47%( n ＝7)，表明供试品溶液在24 h 内稳定。

重复性试验：取样品（批号为19030212），依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样分析。结果盐酸麻黄碱、丁溴东莨菪碱和苦杏仁苷含量的 RSD 分别为2.92%，3.56%，4.09% ( n ＝6)，表明方法重复性良好。

精密度试验：取2.2 项下对照品溶液适量，按拟订色谱条件连续进样6 次，记录色谱图。结果盐酸麻黄碱、丁溴东莨菪碱和苦杏仁苷峰面积的 RSD 分别为1.58%，2.02%，1.43% ( n ＝6)，表明仪器精密度良好。

加样回收试验：取已知含量的样品（批号为19030212），精密量取1.0 mL，置25 mL 容量瓶中，共6 份，分别加入2.2 项下对照品混合贮备溶液适量，依法制备供试品溶液。按拟订色谱条件分别进样分析，计算加样回收率。结果见表2。

2.4 样品含量测定

取3 批样品( 批号分别为19030212，19040415，19050311)，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样分析，记录色谱图，根据峰面积计算含量。结果见表3。

图1 高效液相色谱图

表2 加样回收试验结果（n ＝6）

表3 3 批样品含量测定结果（mg ／L）

3 讨论

3.1 检测波长选择

分别取盐酸麻黄碱、苦杏仁苷和丁溴东莨菪碱对照品，加流动相制备溶液，在紫外可见区进行全波段扫描，结果盐酸麻黄碱、苦杏仁苷和丁溴东莨菪碱分别在210，208，214 nm 波长处有最大吸收，3 种待测成分最大吸收波长相近。结合紫外响应值大小，最终确定210 nm作为检测波长。结果表明，选择210 nm 作为检测波长时，3 种成分响应较好，峰形尖锐，且阴性无干扰。

3.2 流动相选择

由于盐酸麻黄碱、苦杏仁苷和丁溴东莨菪碱3 种成分检测波长均在210 nm 附近，考虑到甲醇截止波长在210 nm，为降低溶剂基质干扰，故选择乙腈体系。本研究中考察了乙腈－水、乙腈－0.1%磷酸水溶液、乙腈－0.1%磷酸溶液（含0.05%三乙胺和0.02%十二烷基苯磺酸钠，磷酸调节pH 至6.0）作为流动相体系时，对3 种成分分离、定量效果的影响，结果选择乙腈－水、乙腈－0.1% 磷酸水溶液作为流动相体系时，盐酸麻黄碱和丁溴东莨菪碱保留时间短，过早地出峰导致定量不准确；选择乙腈－0.1% 磷酸溶液（含0.05% 三乙胺和0.02% 十二烷基苯磺酸钠，磷酸调节pH 至6.0）体系时，3 种成分峰形尖锐，分离度均大于1.5，且定量结果准确，故最终选择第3 种乙腈体系作为流动相体系。