CD146 表达在肺大细胞神经内分泌癌中的意义

朴一翠，李群根，陈宏哲，王岩，刘杨，孙长松，姜久仰，薛华*

(1.黑龙江省医院老年，黑龙江 哈尔滨；2.哈尔滨医科大学附属第一医院胸外科，黑龙江 哈尔滨)

0 引言

肺大细胞神经内分泌癌(large cell neuroendocrine cancer，LCNEC)起初没有与其他非小细胞肺癌(NSCLC)区分开[1]。然而，在1980 年代后期，根据Hammond 等人的病理学研究中，LCNEC 被认为是独特的临床病理学实体[2]。有学者证明了它们形成了形态各异的高级神经内分泌肿瘤组，与小细胞肺癌(SCLC)的形态不同，但是在临床上具有相似的行为特征[3]。基于临床和形态学特征，他们被提出作为非典型类癌和小细胞肺癌之间的一种类型。其表示为具有神经内分泌形态并通过免疫组织化学和/或电子显微镜表达神经内分泌分化特征的细胞。LCNEC 的发病率为2.1%-3.5%。[4,5]随着LCNEC 发病率以及死亡率的不断提高，人们对于LCNEC 的关注度也不断提高，对于LCNEC 的研究也不断增多。CD146在血管内皮细胞进行表达，是对肿瘤新生血管生成进行研究的重要抗体[6]。本研究对1995 年01 月到2019 年11 月来我院进行治疗的LCNEC 患者132 例标本收集，通过免疫组化方法对CD146 在LCNEC 组织中表达进行观察，对其与LCNEC组织中的表达以及其临床病理特征进行探讨。

1 材料及方法

1.1 材料

1.1.1 标本收集

选取1995 年01 月到2019 年11 月来我院进行治疗的LCNEC 患者的组织标本132 例，取正常的肺组织20 例作为对照。患者男性83 例，女性49 例，年龄31～85 岁，平均年龄(65±8)岁。所有患者在进行标本取样时未进行治疗。

1.1.2 主要实验试剂

免疫组织化学法所使用的CD146 单克隆抗体以及需要使用到的SP 试剂盒都购买于北京中杉公司。

1.1.3 主要仪器和设备

普通光学显微镜：购自上海光学仪器厂；-20℃冰箱：购自青岛海尔有限公司；高速台式冷冻离心机：湖南湘仪实验室仪器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 病理学检查

将收集到的每例患者的标本取组织块9～15 块，将这些组织块经10%的甲醛进行固定，然后对其进行石蜡切片，利用HE 以及免疫组化法对其进行染色，之后通过显微镜进行观察。

1.2.2 免疫组化染色

通过免疫组织化学SP 法对切片进行染色。将LCNEC 以及正常的肺组织标本进行切片，其厚度为4μm，通过抗原对其进行修复，然后对其染色，染色方法参照说明书。

1.2.3 结果判断标准

在组织切片后，通过光学显微镜的观察显示，血管内皮细胞膜或细胞质呈现黄棕色代表阳性。微血管密度(microvessel density，MVD) 测量标准参考Weidner 等人的方法并加以改进[7]。任何CD146 阳性的内皮细胞或细胞团，不论是否形成管腔，都应被视为可测量微血管，条件是它们与周围的微血管明显分离。对于每一个标本，首先从低倍镜(×100)进行观察，选取3 个微血管数量最多的区域，然后在这些区域通过高倍镜(×400) 计数1 个血管的数量，并得出平均值为MVD。

1.2.4 统计学方法

本研究所涉及数据均表示为平均值±标准差的形式。多组间的比较采用单因素方差分析(ANOVA) 和Dunnet's post-hoc 检验来实现。其中P＜0.05 视为具有统计学意义。有统计分析使用JMP 11.0.0 软件进行。

2 结果

2.1 CD146 的表达

CD146 在正常的肺组织以及LCNEC 中都有表达，阳性呈现黄棕色，在LCNEC 组织中阳性表达更多，但是其血管结构相对不完整，并且管腔比较不规则，呈现出索条状或点状。相比较而言，正常肺部组织阳性表达量较少，血管结构基本完整，并且其形状呈现出圆形或者条形(图1)。CD146 在LCNEC 中阳性表达率为87.9%，显著高于正常肺组织阳性率10.0%，差异具有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

表1 CD146 在LCNEC 以及正常肺组织中表达

2.2 MVD 值的比较

肺LCNEC 组织中的MVD 值为23.98±4.87，正常肺组织中MVD 为7.56±2.12。与正常肺组织相比较，肺LCNEC 组织的MVD 明显偏高，组间差异具有统计学意义(P＜0.01)，结果见表2。

图1 LCNEC 组织与正常肺组织中CD146 阳性表达

表2 肺LCNEB 组织以及正常肺组织MVD 值

2.3 淋巴结转移与MVD 值的比较

有淋巴结转移的组织CD146 阳性MVD 值为23.12±3.13，而无淋巴结组织转移的CD146 阳性的MVD 值为14.33±2.47，相比较而言，有淋巴结转移的CD146 阳性MVD 值明显偏高(P＜0.01)，见表3。

表3 淋巴结转移组织MVD 值

3 讨论

肿瘤的增长需要新的血管供给氧气和营养，而细胞代谢物则被排泄。血管肿瘤主要通过周围组织的传播获得营养物质并将其代谢物进行排泄。[8,9]当肿瘤长到一定程度时，开始形成新的血管，进入血管阶段；与正常的成熟血管相比，新生血管的结构不完整，更容易被肿瘤细胞破坏，肿瘤细胞会沿着新生血管开启的胶原裂缝侵袭新生血管。肿瘤组织中新生血管的增多表明肿瘤的生长速度加快，渗透和转移的可能性增加，病人的存活时间也在缩短，作为血管内分泌细胞的标记，CD146 已成为国内外科学家的热点。[10,11]CD146 是免疫球蛋白(IG)超级家族的一部分，是一种附着分子，其跨膜结构近年来已被发现。大量数据表明，CD146 可以促进肿瘤和血液转移的生长。它最初是在黑素瘤细胞中发现的，可以通过肿瘤细胞、肿瘤细胞和与肿瘤有关的抗原的标准或非标准粘合来进行调节[12]。正常情况下，人体血管的生成是处于平衡，但是当肿瘤出现后，这种平衡状态被打破，而CD146 参与了新生血管的生成，其是肿瘤生长以及转移的必须营养物质的来源。

CD146 是一种容易渗透的葡萄糖链蛋白，是免疫球蛋白超级家族的一员，与许多细胞粘合分子同源[13]。CD146，又叫做黑素瘤细胞粘合分子，最初是黑素瘤细胞中肿瘤的抗原，通过肿瘤细胞和肿瘤内膜细胞之间的同质或异质粘合[14,15]。一些研究机构对不同组织中的CD146 表达方式给出了不同的名称，如Muc18、MCAM、抗原A32 和S-Endo-1。CD146 作为Ca2 ＋非依耐性CAM，它参与分离细胞和细胞外粘附作用，促进肿瘤生长以及血流转移，并与肿瘤和转移状态密切相关，它可以用作肿瘤和转移状态的相关标记[16,17]。

本研究通过研究CD146 于内皮细胞表达的特征对LCNEC 新生血管形成进行研究，通过对CD146 的MVD 值的测定，进而观察LCNEC 的发生、转移以及其预后关系。本研究结果表明，相比较正常肺组织，LCNEC 组织中CD146 表达更高，并且其MVD 值也更高；LCNEC 组织中有淋巴结转移的CD146 表达远高于无转移。因此，推断LCNEC 组织中，CD146 的MVD 值越高，新生血管的生成也就越多，并且更容易出现淋巴结的转移，生存的时间也会相应越短。

肿瘤的生长以及其扩散和转移都和微血管有着密切的联系，不管是原发性的肿瘤还是转移性肿瘤都依赖微血管增加进行扩散以及转移[18]。通过研究我们发现，CD146 在LCNEC组织中的新生血管中的表达量都较高，进而使得新生血管生成减少，使得其有可能能够成为治疗LCNEC 的新方法。