急性T淋巴细胞白血病IL-7R突变的研究

张 慧，朱红胜，刘文亚

(南京医科大学附属苏州医院 苏州市立医院 检验科，江苏 苏州 215002)

急性T淋巴细胞白血病(T-cell acute lymphoblastic leukemia, T-ALL)是胸腺细胞多个基因异常的恶性侵袭性肿瘤， 儿童和成人新诊断为T-ALL病例分别占15%和25%。在T-ALL中目前比较明确的突变基因主要是IL-7R、WT1、FBXW7、NOTCH11和PHF6[1-5]。IL-7在T淋巴细胞的正常发育和功能维持中有着非常重要的作用，主要通过与IL-7R结合发挥其生物学功能[6]。除了IL-7，其他的细胞因子胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin，TSLP)也可结合IL-7R而组成TSLP受体的另一条链TSLPR。IL-7R和CRLF2信号在早期T淋巴细胞发育成熟过程中有着非常重要的作用[7]；IL-7通过启动JAK/STAT5和PI3K/AKT/mTOR信号途径活化促进T细胞的生存和细胞周期进展[8]。有研究发现在T-ALL患者中可以检测到IL-7R的突变[6]，为进一步研究T-ALL患者中IL-7R的突变情况，本研究对125例ALL患者进行第二代测序，探讨ALL中IL-7R 突变特征。

1 资料与方法

1.1病例选择 收集2008年6月至2018年10月苏大附一院和苏州市立医院共125例T-ALL骨髓标本库患者，提取其基因组DNA，研究对象均经遗传学、细胞形态学、免疫表型、和分子生物学确诊，其中男102例，女23例；男：女比4.43:1，年龄范围7～32岁，中位年龄23岁。125例患者中，49例患者未在我院行诱导化疗，治疗情况不详。其余分别给予VDCP(长春新碱类+蒽环类+环磷酰胺+糖皮质激素+酪氨酸激酶抑制剂)和VDCLP方案(长春新碱类+蒽环类+环磷酰胺+门冬酰胺酶+糖皮质激素)。

1.2仪器与试剂 DNA提取试剂盒、测序反应通用试剂盒、水平离心机(LDZ-5)、光学显微镜(日本Olympus公司)、PCR仪(ABI2720)(美国ABI公司)、PCR扩增引物。

1.3方法 按照DNA提取试剂盒说明书进行。按照仪器和试剂盒说明书对IL-7R基因进行PCR扩增；扩增产物送公司测序，基因突变阳性样本进一步进行TA克隆。

1.4统计学方法 采用SPSS 20.0软件进行统计学处理。计数资料以百分比或率表示，采用χ2检验(或Fisher精确概率检验)；非正态分布计量资料以中位数(四份位数)表示，采用非参数Mann-Whitney检验；以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1实验室指标和预后 两组WBC、Hb、Plt、LDH 、原始细胞、复发率及病死率等指标在两组之间差异无统计学意义(P均>0.05)。见表1。

表1 两组实验室指标和预后比较

2.2125例T-ALL脾脏、肝脏和淋巴结浸润的比例 在125例T-ALL患者中有脾脏浸润者57.6%(72/125)，有肝脏浸润者29.6%(37/125)，有淋巴结浸润者56.0%(7/125)。

2.3IL-7R突变信息 IL-7R突变位于IL-7R跨膜区的P240-S246序列；突变的类型为开放阅读框的插入和缺失，7例突变类型分别为：c.727-730 InsAGCCACTGCCAGG DelCTAA, c.724-736 InsCCTACGGGAT DelTTACTAACCATCA, c.732 InsGGGCCCAATATTGTGACGT DelC， c.724-736InsCCTACGGGAT DelTTACTAACCATCA，c.732 InsCTAAGGTGC，c.731-732 InsGGTTGTCAGAG DelAC， c.720-736 InsAAAACGGT DelTATCTTACTAACCATCA。见表2和图1。

表2 T-ALL中IL-7R突变插入缺失的具体碱基序列及其他基因突变情况

3 讨 论

IL-7R在T淋巴细胞的发育、成熟、细胞内环境稳定的维持等方面有着重要的作用[9]。本研究125例T-ALL患者中IL-7R基因突变率为5.6%(7/125)，Shochat等[7]研究中IL-7R在ALL中的突变率为10.5%，Zenatti等[10]报道IL-7R基因突变率为9%，本研究IL-7R基因突变率稍低于后两者的报道。本研究中7例IL-7R基因突变者同时伴有Notch1基因突变的有2例，伴有PFH6突变的有1例，伴有WT1突变的有1例。7例IL-7R基因突变的类型是开放阅读框的插入和缺失，突变的位置位于IL-7R跨膜区的P240-S246序列，与文献报道基本一致[10]。

图1 IL-7R突变插入缺失的具体碱基序列图 方框内为插入的序列(所有插入-缺失突变均为杂合，只有等位基因分离后才显示突变的等位基因)。WT：野生型；Ins：插入；Del：删除

本组IL-7R突变分别是c.727-730 InsAGCCACTGCCAGG DelCTAA, c.724-736 InsCCTACGGGAT DelTTACTAACCATCA, c.732 InsGGGCCCAATATTGTGACGT DelC， c.724-736InsCCTACGGGAT DelTTACTAACCATCA，c.732 InsCTAAGGTGC，c.731-732 InsGGTTGTCAGAG DelAC， c.720-736 InsAAAACGGT DelTATCTTACTAACCATCA。本研究显示，两组病死率差异无统计学意义。由于突变患者比较少，需扩大样本量进一步研究该基因突变对预后的影响。研究显示，IL-7R突变产生一个半胱氨酸，使相邻的链产生同源二聚化，导致二硫键的形成，使受体发生构像改变，导致信号通路持续活化而参与肿瘤形成机制[11]。另外，有研究报道IL-7R的5号外显子也可以发生基因突变[12]。这就要求我们扩大T-ALL患者的样本量、增加T-ALL病人的信息作进一步的研究。

生物学和功能分析表明这些突变的IL-7R基因可激活造血祖淋巴细胞独立生长的细胞因子[7]。有研究指出IL-7R和CRLF2的突变表明额外增加在近膜处的半胱氨酸是白血病Ⅰ型细胞因子受体基因突变激活的机制[7]。针对T-ALL的靶向治疗方案仍缺乏特异性以及不良反应大等问题，这些问题有待于进行更深入性的探究和解决。强化化疗方案的应用使儿童T-ALL患者预后显著提高，但成人及复发耐药T-ALL患者的预后仍较差。研制新型靶向药物特异性阻断T-ALL细胞内生存及耐药相关的异常激活信号通路近年来被认为是治疗成人及复发难治T-ALL患者的新策略[13-16]。近年来，虽然对IL-7R突变在T-ALL中具体机制仍不清楚，但对IL-7R基因在T-ALL中的认识不断增加。综上所述，本研究发现的若干突变位点和类型值得进行深入的功能和机制研究，需进一步扩大样本量进一步研究该基因突变在T-ALL患者中的影响。