血浆miR-577水平对急性ST段抬高心肌梗死预后评估的价值分析

周函，黄文胜，冷利华，郭飞

急性ST段抬高型心肌梗死（STEMI）是一种临床常见的心血管急危重症，指由于冠状动脉（冠脉）阻塞引起心肌持续性缺氧缺血导致的心肌变性或坏死[1]。急性STEMI大多在冠脉病变基础上发生，属于急性冠脉综合征最严重类型之一[2]。近年来受生活压力大、吸烟饮酒等不良生活习惯影响，中国急性STEMI发病率和死亡率呈较高水平[3]。随着经皮冠脉介入治疗（PCI）、药物溶栓治疗等治疗手段的广泛应用，急性STEMI患者住院期间生存率明显改善，但仍有一部分患者会发生心肌再灌注受阻、心力衰竭、恶性心律失常、心肌再梗死等不良心血管事件（MACE）。因此，加强随访、及时评估预后对降低急性STEMI患者死亡率仍有重要作用。有研究报道，脂代谢异常与动脉粥样硬化进展密切相关，是冠心病、心肌缺血等心血管疾病发生危险因素[4]。王蕤等[5]研究表明，微小核糖核酸-577（miR-577）在糖尿病患者血浆中表达水平降低，可能通过影响脂代谢，在糖尿病发生发展中发挥作用。本研究通过检测急性STEMI患者血浆miR-577表达水平，分析与不同预后及相关因子关系，探究miR-577在急性STEMI中表达意义。

1 资料与方法

1.1 研究对象选取2014年6月～2016年6月于海军安庆医院内科收治的急性STEMI患者67例作为研究对象。其中男性43例，女性24例，年龄（45～73）岁，平均（61.52±18.74）岁。纳入标准：①根据中华医学会心血管病学分会诊断标准[6]，确诊为初发急性STEMI；②临床资料完整；③受试者及家属知情并签署知情同意书。排除标准：①合并患有先天性心脏病、陈旧性心肌梗死、风湿性心脏病、扩张型心脏病者；②合并患有恶性肿瘤者；③合并患有肾、肝脏、脑部严重疾病者；④有凝血功能障碍者。本研究经本院伦理委员会批准同意。

1.2 主要仪器和试剂全自动血细胞分析仪（型号：希森美康500i，日本SYSMEX（希森美康）株式会社）、实时荧光定量（Quantitative realtime PCR，qRT-PCR）仪（型号：7500，美国Applied Biosystems公司）、全自动生化分析仪（型号：日立7600，株式会社日立制作所）、RNA提取试剂盒（货号：775001，德国Roche公司）、反转录试剂盒（货号：RR047A，大连宝日医生物有限公司）、qRT-PCR试剂盒（货号：RR820A，大连宝日医生物有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 样本采集所有受试者于入组后第2 d清晨（7:00～9:00）空腹采集5 ml外周静脉血，置于EDTA抗凝管中抗凝后离心分离血浆，于-80℃环境保存备用。

1.3.2 qRT-PCR法检测血浆miR-577表达水平采用Trizol法提取总RNA并经反转录得到cDNA，于-20℃保存用于qRT-PCR实验。20 μl反应体系如下：ROX 0.4 μl， Primix 10 μl，上游、下游引物各0.8 μl，cDNA 2 μl，dH2O 6.0 μl。反应步骤如下：95℃、34 s，1循环；95℃、5 s；62℃、37 s，40循环。每个样本重复3次，用2-△△CT法计算miR-577表达水平。qRT-PCR所用引物如表1所示，以U6为内参基因。

表1 qRT-PCR引物

1.3.3 其它临床指标检测使用全自动血细胞分析仪检测白细胞计数、血小板计数水平，采用全自动生化分析仪检测低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、总胆固醇（TC）。采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测心肌肌钙蛋白（cTnI）、高敏C-反应蛋白（hs-CRP）水平。使用紫外分光光度计检测谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）水平。

1.4 随访以患者经治疗后出院时为随访起点，通过复查、电话等方式对入组急性STEMI患者进行3年随访，每3个月1次。将入组患者根据有无MACE发生分为：有MACE组32例，无MACE组35例。根据MACE组的MACE发生类型可分为：心力衰竭7例，心源性休克4例，心肌再梗死3例，恶性心律失常12例，死亡6例。

1.5 统计学分析用SPSS 21.0软件对本文中数据进行分析，计量资料以（±s）表示，组间比较采用独立样本t检验；计数资料用例数（百分数）表示，组间比较采用 检验。采用Pearson法进行相关性分析，Logistic回归模型进行危险因素分析，ROC曲线进行诊断价值分析，P＜0.05表示数据之间差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 不同预后急性STEMI患者一般资料及临床指标比较如表2所示，有MACE组和无MACE组急性STEMI患者年龄、性别比例、吸烟比例、高血压比例、糖尿病比例、白细胞计数、血小板计数、LDL-C水平、TC水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。有MACE组急性STEMI患者心率、血肌酐水平、cTnI水平、hs-CRP、MDA水平均明显高于无MACE组患者（P＜0.05），GSH、HDL-C水平明显低于无MACE组患者（P＜0.05）。

2.2 不同预后急性STEMI患者血浆miR-577表达水平比较有MACE组急性STEMI患者血浆miR-577表达水平明显低于无MACE组患者（P＜0.05）（表3）。

2.3 血浆miR-577水平与急性MACE组STEMI患者临床指标相关性如表4所示，MACE组STEMI患者血浆miR-577水平与心率、血肌酐水平、cTnI水平、hs-CRP水平、MDA水平呈负相关（P＜0.05），与HDL-C、GSH水平呈正相关（P＜0.05）。

表2 不同预后急性STEMI患者一般资料及临床指标比较（±s）

表2 不同预后急性STEMI患者一般资料及临床指标比较（±s）

注：LDL-C：低密度脂蛋白胆固醇；HDL-C：高密度脂蛋白胆固醇；TC：总胆固醇；cTnI：肌钙蛋白I；hs-CRP：超敏C反应蛋白；GSH：谷胱甘肽；MDA：丙二醇

组别 有MACE组 无MACE组 t/χ2值P值例数 32 35 - -性别（男/女） 21/11 22/13 0.056 0.813年龄（周岁） 63.08±16.91 59.75±15.42 0.843 0.402吸烟（n，%） 20（62.50） 17（48.57） 1.312 0.252高血压（n，%） 18（56.25） 16（45.71） 0.742 0.389糖尿病（n，%） 9（28.13） 6（17.14） 1.160 0.281心率（次/min） 98.73±23.47 81.34±21.56 3.161 0.002白细胞计数（×109/L） 12.87±4.05 11.16±3.92 1.756 0.084血小板计数（×109/L） 238.15±79.04 236.97±78.12 0.061 0.951 LDL-C（mmol/L） 3.04±1.09 2.67±0.86 1.549 0.126 HDL-C（mmol/L） 0.75±0.21 0.93±0.28 2.955 0.004血肌酐（μmol/L） 85.67±24.05 73.08±21.92 2.242 0.028 TC（mmol/L） 4.79±1.56 4.85±1.61 0.155 0.878 cTnI（ng/mL） 48.47±15.73 35.91±9.08 4.045 0.000 hs-CRP（mg/L） 7.31±2.39 4.68±1.55 5.389 0.000 GSH（mmol/L） 435.91±76.47 681.06±94.21 11.627 0.000 MDA（nmol/mL） 19.23±4.61 8.25±2.07 12.760 0.000

表3 不同预后急性STEMI患者血浆miR-577表达水平比较（±s）

表3 不同预后急性STEMI患者血浆miR-577表达水平比较（±s）

组别 例数 miR-577有MACE组 32 0.59±0.17无MACE组 35 1.02±0.31 t值 - 6.947 P值 - 0.000

表4 血浆miR-577水平与急性STEMI患者临床指标相关性

2.4 急性STEMI患者MACE发生危险因素分析以急性STEMI患者有无发生MACE为因变量（1=发生MACE，0=未发生MACE），以表1、表2中P＜0.05的因素/指标为自变量，以本研究资料为样本建立非条件Logistic回归模型。由于本研究样本量较少，将已知对急性STEMI患者MACE发生有影响的心率、血肌酐、cTnI、hs-CRP四个指标剔除，将GSH、MDA两个指标合并，最终纳入HDL-C、MDA、miR-577水平为自变量，并将三者以各自表达均值为界转化为二分类变量，采用逐步向前法，行LR检验，设定α剔除=0.10，α入选=0.05。如表5所示，低HDL-C、高MDA、低miR-577水平是影响急性STEMI患者MACE发生的独立危险因素（P＜0.05）。

2.5 血浆miR-577表达水平对急性STEMI患者发生MACE的诊断价值如图1所示，根据ROC曲线分析可知，血浆miR-577表达水平预测急性STEMI患者发生MACE的曲线下面积为0.883（95%CI：0.638～0.833，P＜0.05），取miR-577的最佳临界值为0.82时，其预测急性STEMI患者发生MACE的敏感度为87.50%，特异度为88.60%。

表5 急性STEMI患者MACE发生危险因素分析

图1 血浆miR-577表达水平预测急性STEMI患者发生MACE的ROC曲线

3 讨论

急性STEMI是由冠脉斑块损伤后诱发急性闭塞性血栓引起，患者在发病前往往有前驱症状，包括原有心绞痛加剧、心绞痛持续时间增长、既往无心绞痛者出现长时间心绞痛等。急性STEMI患者在发病时出现发热、心律失常、急性左心衰竭、持续性心绞痛，休息或含服硝酸甘油片不能缓解，常有烦躁不安、恐惧、有濒死感，部分患者伴有恶心、呕吐、腹胀等症状[7]。患者若不能得到及时有效的治疗，将发生并发症、复发、死亡等不良预后[7]。探究相关生物标志物对患者预后评估、指导早期临床干预及改善患者生存质量有一定帮助。

微小核糖核酸（miRNA）是一种长度为22～25nt的具有调控功能的单链非编码RNA，能够稳定存在于各种组织和器官中并参与疾病进展。Zhang等[8]研究发现，心肌梗死后心肌纤维化过程中miR-26a表达水平升高，可通过削弱PI3K/AKT信号通路，抑制MMP-9等蛋白表达，参与疾病进展[8]。有研究报道[9]，miR-98在心肌梗死和缺血心肌新生大鼠心室肌细胞中明显下调，miR-98过表达可显著增加心室肌细胞活力并抑制其凋亡。Yi等[10]研究表明，急性心肌梗死患者miR-379表达水平明显低于健康对照组，过表达miR-379可抑制血管平滑肌细胞增殖，诱导细胞周期G0/G1阻滞，与心肌梗死发展密切相关。本研究结果显示，有MACE组急性STEMI患者血浆miR-577表达水平明显低于无MACE组患者，提示血浆中miR-577表达水平异常可能与STEMI患者不同预后有关，miR-577表达水平升高可能预示急性STEMI患者经治疗后心力衰竭、心源性休克、心肌再梗死、恶性心律失常等MACE及死亡发生。

研究报道，成纤维细胞生长因子（FGF-21）在糖脂代谢、心血管疾病等预防和治疗中应用广泛[11]。Chen等在小儿糖尿病中研究发现，miR-577可通过调控FGF21生成，增强脂肪细胞对葡萄糖摄取，降低糖尿病患儿血糖、三酰甘油水平，可能用于小儿糖尿病靶向治疗[12]。本研究结果显示，有MACE组急性STEMI患者心率、血肌酐水平、cTnI水平、hs-CRP水平均明显高于无MACE组患者，HDL-C水平明显低于无MACE组患者，且MACE组急性STEMI患者血浆miR-577水平与心率、血肌酐水平、cTnI水平、hs-CRP水平呈负相关，与HDL-C水平呈正相关，提示miR-577可能通过与FGF21相互作用，调控患者脂代谢水平，影响急性STEMI患者预后。有研究表明，氧化应激、免疫炎症与心肌梗死后心室重构密切相关，是心肌缺血再灌注损伤的重要机制[13,14]。Mansuri等研究报道，miR-577可靶向非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶22（PTPN22），在氧化应激、自身免疫、内质网应激介导的白癜风发病机制中有重要作用[15]。研究发现，PTPN22持续性过表达与Treg细胞分化受损有关，可能在心肌梗死进展中有一定作用[16]。本研究结果显示，有MACE组急性STEMI患者MDA水平均明显高于无MACE组患者，GSH水平明显低于无MACE组患者，且MACE组STEMI患者血浆miR-577与MDA水平呈负相关，提示miR-577下调，可能促进PTPN22表达，影响患者体内氧化应激反应，参与急性STEMI患者预后不良进展。

进一步研究发现，低HDL-C、高MDA、低miR-577水平是影响急性STEMI患者MACE发生的独立危险因素，提示血浆miR-577水平异常与急性STEMI患者发生MACE密切相关，临床应对上述指标变化予以重视，以期为及早判断急性STEMI患者不良预后发生情况，为提高患者生存率及生存质量提供一定理论依据。本研究还发现，血浆miR-577表达水平预测急性STEMI患者发生MACE的曲线下面积为0.883，其预测急性STEMI患者发生MACE的敏感度为87.50%，特异度为88.60%，提示血浆miR-577对急性STEMI患者发生MACE的预测价值较高，可能作为急性STEMI预后生物标志物。

综上所述，与无MACE组患者相比，有MACE组急性STEMI患者血浆miR-577表达水平明显降低，与心肌功能、脂代谢、氧化应激等相关指标变化有关，可能用于预测急性STEMI预后。但由于本研究样本量较少，后续miR-577在急性STEMI预后进展机制研究还需扩大样本量进一步证实。